土壤放线菌K2的筛选、鉴定及其抑菌活性初探

筛选具有抑制植物病原菌活性的放线菌是农用抗生素开发的基础。通过平板对峙法筛选出8株拮抗放线菌菌株,采用生长速率法测定获得一株对植物病原菌有较好抑菌作用的菌株K2,并采用抑制菌丝生长速率法对其抑菌谱进行研究,以及进行菌种鉴定。生长速率法试验表明,放线菌菌株K2发酵液对10种供试植物病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,其中以对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)抑制效果最好,抑菌率可达57.38%。根据形态学特征、生理生化特征和基于16S rDNA序列比对,鉴定菌株K2属于链霉菌属(Streptomyces)的一个菌株。放线菌K2的代谢产物具有较广的抑菌谱,对植物病原菌的防治有很大的研究开发潜力。     

百里香酚抑菌活性初探

本研究采用抑制菌丝生长速率法、抑制孢子萌发法、组织测定法和盆栽试验法系统测定了百里香酚对植物病原真菌的抑制作用。结果表明,在离体条件下百里香酚对供试的10种植物病原真菌菌丝生长均有一定的抑制作用,其中,对番茄灰霉病菌的抑制作用最强,EC50为0.012 g?L-1;对番茄灰霉病菌、烟草赤星病菌和玉米大斑病菌孢子萌发有较强的抑制作用,EC50分别为0.028、0.032和0.064 g?L-1;盆栽试验结果表明百里香酚对番茄灰霉病菌具有很好的保护和治疗作用,在供试浓度为0.75 g?L-1时,对番茄灰霉病的保护和治疗作用分别为72.01%和60.28%,与对照药剂速克灵无显著性差异。     

灵芝多糖抑菌活性初探

通过热水提取法提取灵芝多糖,得到灵芝粗多糖,并以3种植物病原菌(胡萝卜欧氏菌、指状青霉、灰葡萄孢)和5种食品有害菌(蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、黑曲霉和黑根霉)为供试菌,采用纸片琼脂法来测定灵芝粗多糖对供试菌的抑菌强度。结果表明,灵芝粗多糖对植物病原菌中的胡萝卜欧氏菌有较强的抑制作用;对指状青霉菌有一定的抑制作用,但抑制作用较弱;对灰葡萄孢几乎没有抑制作用;对食品有害菌中的枯草芽孢杆和蜡状芽孢杆菌有很强的抑制作用;对大肠杆菌和黑曲霉抑制作用相对较弱;对黑根霉几乎没有抑制作用。总体来看,灵芝多糖对细菌的抑菌活性强于真菌。     

芽孢杆菌E-1的鉴定及其抑菌活性

从云南昆明市郊不同地点紫茎泽兰根际分离细菌,经平板对峙培养筛选出一株抑菌能力较强的菌株,命名为E-1。通过菌株的培养性状、常规生理生化特性和16S rDNA序列测定及其系统发育学分析,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。该菌株的16S rDNA序列已在GenBank中注册,登录号为JN648100。对E-1与供试的5株植物病原细菌和5株病原真菌进行对峙试验。结果显示：E-1对土传病原细菌和真菌都有不同程度的拮抗作用,是较好开发潜能的生防菌株。     

海南省土壤拮抗放线菌分离方法初探

针对海南土样拮抗放线菌的分离,实验初步解决了土样中的细菌和真菌在放线菌分离培养中的污染问题。研究测定了细菌和真菌抑制剂K2Cr2O7的最佳使用浓度、土样稀释浓度、土样加热和风干处理以及土样的贮存时间等对放线菌分离培养的影响。结果表明：K2Cr2O7在一定的浓度范围内使用可以明显抑制细菌的生长,对放线菌的生长无明显的影响,浓度在50μg／ml时效果最佳。当K2Cr2O7 的使用浓度在70μg／ml时放线菌生长受到抑制,使用浓度在30μg／ml时对细菌的抑制效果不明显;土样溶液涂抹平板培养时,土样溶液浓度在10-3~10-4时平板内长出的菌落在30~40个间,菌落的重叠率在20%左右,分离效率较高,是理想的浓度;在土样放置一个星期的自然风干后,同时使用细菌抑制剂K2Cr2O7可得到较理想的培养效果;对土样进行加热处理后,可明显降低细菌的数量,但同时也会降低放线菌数量,分离效率过低。     

海南省土壤拮抗放线菌的分离筛选及发酵液抑菌作用测定

从海南南部尖峰岭、海南省中部五指山林地,海口市郊土壤中分离了91个放线菌菌株。进行了放线菌与病原菌在培养皿内的对峙培养,筛选出3个对芒果炭疽菌、芒果褐色蒂腐病原菌拟茎点霉和芒果蒂腐病原菌链格孢菌有较强拮抗作用的菌株尖峰岭11、38、39。将3个拮抗放线菌株液体培养,发酵液对病菌孢子萌发和芽管生长均有抑制作用,尤其对芽管伸长有较好抑制作用。冷冻干燥法进一步将发酵液中抑菌活性物质粗提,发现10mg/l提取物对芒果炭疽菌和链格孢菌孢子萌发和菌丝生长有强烈的抑制作用。     

类芽孢杆菌YS-1化学成分及其抑菌活性研究

为研究类芽孢杆菌YS-1发酵液抑制柑橘采后两种主要病原菌-意大利青霉(Penicillum italicum)和指状青霉(Penicillium digitatum)的活性成分,本研究对YS-1发酵液抑菌成分进行了靶向分离研究。YS-1发酵液离心去除菌体后,采用正丁醇萃取得到粗提物,硅胶和Sephadex LH-20凝胶柱层析对粗提物进行分离;赣南脐橙活体损伤接种验证分离得到的化合物及其糖苷的抑菌活性。从粗提物中分离得到一个单体化合物,通过质谱,核磁共振H谱(~1H-NMR)、C谱(~(13)C-NMR)和二维核磁共振谱(2D-NMR)等方法鉴定其结构为胞嘧啶。抑菌结果表明胞嘧啶及胞嘧啶核苷均有一定的抑菌效果,但是胞嘧啶抑菌效果较好,表明胞嘧啶为类芽孢杆菌YS-1的一个主要抑菌活性成分,为生防菌类芽孢杆菌YS-1控制柑橘采后病害的开发和利用提供了基础。     

产木聚糖酶放线菌的筛选

从北京城区及全国各地取得几十份土样,在以玉米芯木聚糖为惟一碳源的选择培养基上进行培养,筛选出具有透明圈的放线菌33株,其中9株较好。经摇瓶复筛后,菌株F0106的木聚糖酶活力最高达84.97U/mL。     

黄瓜枯萎病生防芽孢杆菌的定向筛选及其抑菌活性物质特性分析

研究拟从北京郊区黄瓜根际土壤中定向筛选黄瓜枯萎病菌生防芽孢杆菌,并研究其抑菌活性物质的基本特性。采用热处理和形态观察结合平板对峙法定向筛选黄瓜枯萎病菌拮抗菌。从北京郊区黄瓜根际土壤中定向分离到63株产芽胞的菌株,从中筛选到2株对黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium f.sp.cucumarinum Owen.）具有较好拮抗作用的菌株,命名为j-28和j-50。拮抗菌j-28对黄瓜枯萎病菌的抑菌带达到11.0 mm。此外,拮抗菌j-28有较广的抑菌谱,对黄瓜灰霉病菌（Botrytis cinerea）、马铃薯干腐病菌（Fusarium sulphureum）和茄子黄萎病菌（Verticilllium albo-atrum）等具有很强的拮抗作用。经过形态观察、理化分析和分子鉴定,j-28和j-50鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。研究还发现拮抗菌j-28的发酵液经过高温和强酸碱处理后抑菌效果会明显减弱,说明拮抗菌j-28产生的主要抑菌活性物质可能是蛋白类。笔者定向筛选到针对北京郊区多发的黄瓜枯萎病菌拮抗菌枯草芽孢杆菌j-28,具有潜在的应用价值,为今后北京郊区黄瓜枯萎病菌的防治提供新的生物防治资源。     

鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素抑菌和除草活性初探

对从砂地柏中分离得到的四个化合物鬼臼毒素、脱氧鬼臼毒素、4-表松香醛和7,13-松香二烯-3-酮的杀虫、抑菌及除草活性进行了初步测试。结果表明,4-表松香醛和7,13-松香二烯-3-酮对粘虫、小菜蛾及菜青虫等具有较强的拒食活性及一定的毒杀作用;鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素对辣椒疫霉、番茄灰霉及油菜菌核具有较好的抑制活性;除草活性研究表明鬼臼毒素对反枝苋、野燕麦根的抑制效果较强,脱氧鬼臼毒素对反枝苋、野燕麦及婆婆纳根的抑制效果较强,其抑制率均达到80％以上。     

影响放线菌H菌株抗菌活性发酵条件的研究

采用单因素试验及正交试验,对放线菌H菌株的发酵条件进行了初步研究,确定了其最佳发酵培养基的组成及基本培养条件。以玉米粉、蛋白胨、K2HPO4,MgSO4,NaCl,CaCO3为基本培养基,3.6%玉米粉为碳源,0.5%蛋白胨为氮源,起始pH值为7.5,最佳装瓶量为50mL/500mL,在28℃,转速为200r/min下,摇床培养120h,所获得的发酵滤液的抑菌作用最强,滤纸片法测定其对金黄色葡萄球菌抗菌活性,抑菌圈直径达24.6mm。     

放线菌菌株97发酵液中活性代谢产物的抑菌作用及稳定性测定

本实验室从采自山东临沂和日照的烟田土样中分离得到一株对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var. nicotianae)具有拮抗作用的放线菌菌株97,为了明确该生防菌的抑菌作用和抑菌因子的理化性质,采用菌丝生长速率法,对菌株97发酵液中活性代谢产物的抑菌作用及稳定性进行了研究。结果表明,发酵液中活性代谢产物对多种植物病原真菌均表现较好的抑制作用。此外,发酵液中活性代谢产物在低温贮藏下仍有很好的抑菌效果,在偏酸性或中性条件下稳定,有较强的热稳定性和抗紫外线照射能力,对蛋白酶K稳定性较好。     

抗真菌活性物质产生菌的分离和鉴定

从新疆马兰荒漠地区土壤中分离出1株具有拮抗真菌作用的放线菌AF1,经16sDNA鉴定为链霉菌属的Strep-tomyces macrosporus种。在贝奈特琼脂培养基(Bennett's agar)中,利用异步十字交叉培养法的实验发现,其分泌的活性物质对黑曲霉、白曲霉、青霉等丝状真菌具有抗性,但对酵母菌和细菌无作用。     

合欢叶乙醇提取物对植物病原真菌的抑菌活性测定

摘要: 本文通过测定合欢叶的乙醇提取物以及各萃取部分对植物病原真菌的抑菌活性,寻找合欢叶中的农用活性物质,为其综合开发利用提供科学依据。采用菌丝生长速率法测定了合欢叶（Albizia julibrissin）乙醇提取物对8种植物病原菌的抑制作用。结果表明,在供试浓度为5.0 mg•mL-1时,合欢叶乙醇提取物对苹果腐烂病菌（Valsa mali）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、立枯丝核病菌（Rhizoctonia solani）和辣椒炭疽菌(Colletotrichum capsici)的抑菌活性较高,抑菌率分别为84.62、68.42、55.48和48.81%;EC50分别为0.516、1.110、6.630和9.770 mg•mL-1。合欢叶乙醇提取物的不同极性溶剂萃取物中正丁醇层与水层的抑菌活性较高。正丁醇层对苹果腐烂病菌的抑菌作用最好,EC50达0.012 mg•mL-1。活性物质主要集中于正丁醇萃取部分,是进一步研究的重点。     

棉花黄萎病菌拮抗细菌TUBP1的分离鉴定及其防病作用

为研制和开发新疆棉花黄萎病优良生防菌剂,采用琼脂平板扩散法,通过初筛和复筛,分离得到一株对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)具有较强抑菌活性的拮抗菌株TUBP1。通过对形态观察、生理生化实验、16S rDNA和gyrB的基因序列分析,确定该菌株为Bacillus axarquiensis;利用生长速率法和牛津杯法分别测定了发酵液对棉花黄萎病菌抑菌活性,对棉花黄萎病菌菌丝生长抑制率为78.62%±3.48%,抑菌圈直径为21.00±3.86 mm。温室盆栽试验中,TUBP1最大生防效果为43.67%,小区试验中,TUBP1最大生防效果为43.07%。     

白鲜碱体外抗白色念珠菌活性研究

白色念珠菌等真菌是能够引起人类及动物患病的重要致病菌。本实验测定了白鲜碱对临床22株临床分离氟康唑耐药白色念珠菌的最小抑菌浓度（MIC）,采用棋盘式微量稀释实验测定了两药联合应药的分级抑制浓度指数（ractional inhibitory concentration index,FICI）值。结果表明,白鲜碱有较好的抗白色念珠菌活性且与氟康唑有协同作用。     

苦葛提取物抑菌活性初步研究

研究苦葛提取物的抑菌活性,为利用苦葛开发高效、安全、与环境友好的新型生物农药奠定基础,为苦葛资源的综合开发利用提供理论依据。采用菌丝生长速率法,测定苦葛提取物对水稻纹枯病菌、梨黑星病菌、燕麦镰刀病菌、番茄早疫病菌和烟草赤星病菌等植物病原菌菌丝生长的抑制作用。苦葛提取物对水稻纹枯病菌菌丝生长具有很强的抑制作用,随着浓度的提高,抑制作用增强,其毒力回归方程为y=1.5599x+1.2562,相关系数R为0.9640,EC₅₀值为0.2525 mg/mL;苦葛提取物对梨黑星病菌、燕麦镰刀病菌、番茄早疫病菌、烟草赤星病菌的菌丝生长也具有较强的抑制作用,在10 mg/mL浓度下,菌丝生长抑制率均达80%以上。苦葛提取物具有很强的抑菌活性,并且具有较广的杀菌谱,值得进一步深入研究开发新型生物农药,并进行综合开发利用。     

除虫菊内生拟盘多毛孢Y1菌株发酵产物抑菌活性初步研究

摘　要:在对从除虫菊中分离到的内生真菌进行抑菌活性系统筛选的基础上,对其中活性较高的Y1 （Pestalotiopsis sp.）菌株进行了抑菌活性测定。其发酵液10倍稀释液和菌丝丙酮提取物对玉米大斑病菌 Exserohilum turcicum等 6种供试植物病原真菌菌丝生长的抑制率分别在85. 2%～95.1%之间和40%～80%之间,其 5倍稀释液对番茄灰霉病菌 Botrytis cinerea和苹果炭疽病菌 Glomerella cingulata孢子萌发的抑制率均大于 82%。活体生测结果表明,该发酵液对番茄灰霉病,辣椒疫霉病和黄瓜霜霉病的保护效果大于 55%,治疗效果不明显。     

22种植物乙醇提取物对植物病原菌的抑菌作用

以苹果腐烂病菌、苹果炭疽病菌、黄瓜枯萎病菌和棉花枯萎病菌为供试菌种,用生长速率法测定了22种植物乙醇提取物的抑菌活性。结果表明:在浓度为40mg/ml时,不同植物的乙醇提取物对这4种植物病原菌的抑制作用有明显差别,其中香樟树、山麦冬、元宝槭、地笋、浒苔、鸡爪槭、鹅掌楸、长蒴黄麻和黑松对苹果腐烂病菌抑制率均达到80%以上。综合来看,以香樟树叶和鹅掌楸叶乙醇提取物对供试植物病原菌的抑制活性较好。以活性较高的香樟树叶和鹅掌楸叶乙醇提取物对另外11种植物病原菌进行活性测定。结果表明,香樟树叶的乙醇提取物对苹果腐烂病菌、葡萄白腐病菌、茄子绵疫病菌和小麦纹枯病菌的抑制效果较好;鹅掌楸叶的乙醇提取物对苹果腐烂病菌、葡萄白腐病菌和小麦赤霉病菌的抑制效果较好。对香樟树叶和鹅掌楸叶乙醇提取物抑制作用较好的病原菌进行了毒力测定,计算出了毒力方程和EC50。