万寿菊雄性不育两用系遗传转化体系的建立

为了筛选适合万寿菊不定芽诱导的最佳外植体及激素浓度组合,并探讨该组织部位对卡那霉素、潮霉素的抗性临界点以及头孢霉素和利福平对LBA4404的抑菌性效果,构建万寿菊遗传转化体系。本研究以三种激素为组合,以万寿菊雄性不育两用系2-2的子叶、下胚轴、叶片为材料筛选出适合万寿菊的再生体系的激素配比及最佳的组织部位;以万寿菊子叶为材料筛选其对卡那霉素、利福平、头孢霉素、潮霉素四种抗生素抗性临界点;筛选利福平、头孢霉素对农杆菌LBA4404的抑菌浓度。结果表明：1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA+30 g蔗糖的MS培养基可以作为万寿菊子叶的最佳诱导激素浓度组合,MS5和MS9可以在万寿菊叶片中诱导出不定芽,但诱导率极低,下胚轴在48个激素组合无不定芽的产生;利福平和头孢霉素两种抗生素浓度在200 mg/L时能对LBA4404农杆菌的生长起到有效的抑制,并且在该浓度下对万寿菊子叶不定芽的产生起到一定的促进作用;子叶对于潮霉素、卡那霉素的抗性浓度分别为30、100 mg/L。利用建立的万寿菊再生体系及抗生素浓度体系可以为农杆菌介导万寿菊遗传转化提供理论基础。     

番茄‘黄樱桃-2号’再生体系研究

以番茄‘黄樱桃-2号’的子叶切段为外植体,研究不同激素组合对愈伤组织产生以及再生芽诱导的影响。结果表明,不同种类和浓度的激素诱导形成的‘黄樱桃-2号’愈伤组织和再生芽数目存在差异,最适培养基为：MS+ 6-BA 2.5 mg/L+ IAA 0.2 mg/L,出愈率可达到95.08%,每个外植体再生芽数约为5。最适生根培养基为：1/2MS+ IAA 0.2 mg/L。通过观察头孢霉素和羧苄青霉素2种抗生素对子叶愈伤组织和再生芽诱导情况的影响,确定‘黄樱桃-2号’子叶的除菌培养基为：MS+ 6-BA 2.5 mg/L+ IAA 0.2 mg/L+ 头孢霉素 200 mg/L+ 羧苄青霉素 200 mg/L。同时还对作为筛选剂的卡那霉素进行了浓度筛选,确定了卡那霉素对‘黄樱桃-2号’子叶的筛选浓度为50 mg/L。     

不同抗生素对罗汉果遗传转化受体系统的影响

本研究探讨了抗生素潮霉素(Hyg)、头孢霉素(Cef)、氨苄青霉素(Ap)和羧苄青霉素(Carb)对罗汉果遗传转化受体系统的影响,确立了其在罗汉果转基因过程中的剂量方案。研究结果表明:氨苄青霉素、羧苄青霉素对罗汉果子叶离体培养的毒性比头孢霉素大;以头孢霉素抑菌效果最佳,250mg/L已经能完全抑制农杆菌的生长;用潮霉素(Hyg)罗汉果转基因植株进行抗性筛选,结果表明选择剂Hyg在不定芽和不定根抗性筛选中的临界浓度分别为25mg/L和10mg/L。     

离体条件下抗生素对棉花愈伤组织生长的影响

研究了 3种抗生素对中棉所 19下胚轴愈伤组织生长的影响。结果表明 ,卡那霉素对棉花下胚轴的愈伤组织形成和增殖均有明显抑制作用 ,其浓度低于 10 0 mg· L -1时 ,随着其浓度增加 ,愈伤组织诱导率降低 ,增殖率下降 ;其浓度高于 10 0mg· L-1 时不能诱导愈伤组织发生。羧苄青霉素和头孢霉素对棉花下胚轴愈伤组织诱导率没有影响 ,浓度高于 2 5 0 mg· L-1 时对其增殖有轻微抑制作用。     

苹果叶盘法基因转化中抗生素种类和浓度的筛选

以苹果品种嘠拉试管苗为试材，研究了卡那霉素（Km）、潮霉素（Hm）对继代苗生长和离体叶片再生的影响，以确定叶盘法基因转化的选择压和转化体的筛选浓度以确定苹果叶盘法基因转化中的选择压和抗性芽的筛选浓度；同时研究了不同浓度的头孢霉素（Cef）和羧苄青霉素（Carb）对苹果离体叶片再生的影响及对农杆菌EHA105和LBA4404的抑菌效果，以确定苹果叶盘法基因转化中合适的抑菌抗生素种类和浓度；以确定侵菌共培养后合适的抑菌抗生素种类和浓度。。结果证明表明：Km卡那霉素10mg/L、Hm4.0 mg/L完全抑制了叶片不定芽的分化，可作为苹果叶盘法转化时抗性芽的选择压； 在Km 50mg/L、Hm5.0 mg/L达到继代苗的半致死浓度，可作为基因转化后抗性芽苗的筛选浓度，10mg/L时完全抑制供试叶片不定芽的分化。；由于抗性芽再生的选择压与抗性苗筛选浓度相差较小，Hm相对于Km更适合作为苹果基因转化的选择标记；培养基中附加潮霉素的浓度为5mg/l继代苗不再分化生长，作为基因转化后抗性芽的筛选浓度，2.0mg/L时完全抑制供试叶片不定芽的再生，作为基因转化后抗性芽的筛选浓度。头孢青霉素在Cef 300mg/L时就能完全抑制农杆菌生长，对叶片不定芽的再生影响不大；而附加Carb羧苄青霉素则需400mg/L以上时才能抑制农杆菌LBA4404的生长，同时严重抑制了叶片再生。因此，宜选用Cef作为苹果基因转化的抑菌抗生素。     

几种抗生素对大白菜种子发芽及离体子叶再生的影响

培养基中添加不同浓度的卡那霉素、头孢霉素和羧苄青霉素，观察抗生素对大白菜基因型GP－11种子发芽以及离体子叶再生的影响。结果表明：GP－11种子在含有200mg/L卡那霉素的MS培养基上发芽生长时，幼苗子叶完全黄化，侧根数为0；随卡那霉素浓度的增加，芽、主根和侧根生长均受到一定程度抑制，但发芽率和发芽势不受影响。4日苗龄的离体子叶在含有10mg/L卡那霉素并附加一定激素的改良MS培养基生长时，基本无绿芽诱出，在含7．5mg/L和5mg/L卡那霉素的培养基中，诱出的绿芽率只有32．5％和40．2％；在仅含3mg/L卡那霉素的生根培养基中，小苗完全丧失生根能力。在添加浓度高至400mg/L的头孢霉素或羧苄青霉素的诱芽培养基中，GP－11诱芽率为0，且它们之间差异不明显，但在添加头孢霉素或羧苄青霉素的生根培养基中，小苗生根依然正常。试验结果表明，在农杆菌介导的基因转化中，对大有转化苗筛选的卡那霉素浓度在10mg/L左右是适宜的，添加的抑菌剂浓度在能控制农杆菌生长的同时，同时降低浓度，最好不超过400mg/L；在诱导生根培养基中，卡那霉素浓度不宜超过3mg/L。另外，对T0代转基因种子进行遗传分析时在发芽培养基中添加卡那霉素浓度应该达到200mg/L。     

几种抗生素对离体培养中植物形态发生的影响

抗生素羧苄青霉素(Carbenicillin),头孢霉素Ⅱ(Keflodin)和Claforan影响甘蓝型油菜(Brassica napus L.)游离小孢子培养胚胎发生,其浓度越高,影响越大.羧苄青霉素促进辣椒(Capsicum annuum L.)子叶外植体愈伤组织发生,同时,还影响油菜小孢子胚再生植株及辣椒子叶再生株的生根,产生粗短根甚或发育为瘤状物.     

农杆菌介导的世锦B悬浮细胞团转基因体系的初步建立

本试验初步建立了农杆菌介导的世锦B悬浮细胞团转基因体系.利用世锦B成熟种子诱导愈伤组织并悬浮培养,得到生长旺盛的细胞团.将细胞团先在N6Ⅱ培养基上预培养1周,再用农杆菌侵染并在N6Ⅱ培养基上共培养,在含头孢霉素250mg/L、羧苄青霉素250mg/L、潮霉素50mg/L的N6I培养基上筛选,抗性愈伤接入MSIC分化培养基中,成苗后接入MSⅡ培养基中长成植株.抗性植株经PCR鉴定表明,外源基因已经整合到世锦B的基因组中.     

抗生素对菊苣子叶离体分化的影响

以菊苣子叶为外植体,将其接种在含有不同种类和浓度抗生素的培养基上进行培养,研究卡那霉素(Km)和头孢霉素(Cef)对菊苣子叶愈伤组织诱导和芽分化的影响.研究结果表明:卡那霉素(Km)和头孢霉素(Cef)对菊苣子叶愈伤组织和芽的分化有抑制作用.随着卡那霉素浓度的提高,菊苣子叶愈伤组织和芽的分化频率逐渐降低,当Km达到25 mg/L时,完全抑制愈伤组织诱导产生芽.与Km相比,头孢霉素的抑制作用相对弱一些.但随着头孢霉素浓度的提高,菊苣子叶的出愈率和出芽率也都下降.     

百脉根高频再生体系的建立及兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因的转化

以MS为基本培养基,通过调整激素种类与浓度等培养条件,按正交试验设计的原则,建立了百脉根高频再生体系.结果表明MS 2,4-D 2.0 mg/L KT 2.0 mg/L 培养基可高效诱导愈伤组织的形成,MS 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.1 mg/L 培养基可高效诱导芽的分化,MS NAA 0.1 mg/L 培养基可快速诱导根的生成,形成再生植株.通过构建植物表达载体VP60-pBI121,研究了根癌农杆菌介导的兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60基因对百脉根遗传转化的影响因素,建立了百脉根快速高效遗传转化体系,结果表明,以农杆菌LBA4404为介导菌株、以下胚轴为外植体,预培养3 d,在OD600为0.6的菌夜中浸染20 min,共培养3 d,以及300 mg/L 羧苄青霉素脱菌浓度和50 mg/L 卡那霉素筛选浓度为最佳转化条件.为利用百脉根生产动物口服型疫苗建立了技术基础.     

番茄子叶和下胚轴离体再生体系建立

以番茄无菌苗子叶和下胚轴为外植体,研究其在MS附加不同浓度6－BA和NAA的培养基上的分化情况。结果表明：在不同培养基上,番茄子叶和下胚轴均能诱导出淡绿色的愈伤组织和分化形成不定芽,但在不同的培养基上,番茄子叶和下胚轴的出愈率和不定芽诱导存在明显差别。诱导番茄愈伤组织形成和芽分化的最佳培养基分别为：MS+6-BA 2 mg/L+IAA 0.2 mg/L和MS+6-BA 2 mg/L+IAA 0.02 mg/L,番茄不定芽生根培养基为：MS+IAA0.2 mg/L。     

马蹄金(Dichondra repens Forst.)组织培养和快速繁殖

为了探究马蹄金组织培养及快繁技术,本研究以马蹄金为材料,使用75%的酒精和10%NaClO对不同外植体(胚根,下胚轴,子叶)进行消毒处理,在不同激素浓度配比的MS培养基中进行丛生芽诱导、愈伤组织诱导及分化,成功建立了马蹄金的组培快繁体系。结果表明:利用马蹄金下胚轴为外植体直接诱导不定芽效果较好,其最适程序为:流水冲洗30 min+75%酒精30 s+10%NaClO 9 min,污染率为5%,成活率为75%;下胚轴不定芽诱导的最适培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,诱导率为93.55%,出芽指数为8.86;胚根愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,诱导率为100%,下胚轴愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+1 mg/L NAA,诱导率为95.24%,子叶愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.3 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,诱导率为100%;愈伤组织不定芽分化的最适培养基为1/2MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,芽诱导率为20%,平均芽数为12.83;组培苗诱导生根的最适培养基为不加激素的1/2MS培养基;生根苗以瓶盖全开的炼苗方式移栽到以河沙为基质的育苗盒中成活率为100%,且添加蒸馏水与自来水对植株生长并无明显影响。本研究成功建立了马蹄金组织培养与快繁体系,为马蹄金种质资源改良及优质种苗生产提供了技术参考。     

In vitro culture of tissues,cells and protoplasts of Trifolium alexandrinum L. (Egyptian clover)

Summary Callus induction derived from root, hypocotyl and cotyledon explants were investigated for four cultivars of Trifolium alexandrinum L. The Murashige & Skoog (1962) medium containing 2.0 mg/L NAA and 0.5 mg/L BAP was able to induce callus from different explants. A wide range of culture media were tested to determine the morphogenetic potential of different callus types derived from different explant types. Shoot morphogenetic development was observed with the cultivars Sakha 4 and Giza 10. Cell suspension cultures were established from hypocotyl derived callus. Methods for isolation and culture of protoplasts from cotyledons are described.     

油菜不同类型外植体组织培养及再生研究

为建立高效的组织培养体系，以甘蓝型油菜杂交品种恢复系627R、621R和616R材料田间种植植株的侧芽、花托和无菌种子实生苗下胚轴为外植体，探索不同苗龄、预培养时间、预培养基、愈伤分化培养基、诱导出芽培养基以及成苗壮苗培养基中激素配比对芽再生、成苗植株生长势的影响。结果表明：无菌苗快速繁殖体系中，发芽6 天的无菌苗下胚轴或者子叶在预培养（MS+ 2.0 mg/L 2,4-D+ 1.0 mg/L 6-BA+ 30 g/L 蔗糖+ 8 g/L 琼脂，pH 5.85）3 天后转移到分化培养基MS+ 3 mg/L 6-BA+ 1.0 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3+ 30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂(pH 5.85)，或者MS+ 3 mg/L 6-BA+ 1.0 mg/L IAA+ 5 mg/LAgNO3+ 30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂(pH 5.85)生长，可以获得较高的芽再生频率，对于田间生长到抽薹开花期植株取样的外植体，腋芽的出芽频率高于花托培养的出芽频率，但是这2 类外植体在分化培养基（MS+ 10 mg/L 6-BA+ 1 mg/L NAA+ 30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂，pH 5.85）生长30 天后都有成苗的潜力，上 述外植体经过组织培养出芽后转移到添加矮壮素的培养基（MS+15 mg/L CCC+15~20 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂，pH 5.85）上继续生长30 天，能够得到根系发达、生长势强的植株。甘蓝型油菜优良恢复系建立的组织培养体系能够快速获得生长势优的油菜植株，加速油菜良种的繁殖与评价。     

新疆大叶紫花苜蓿(Medicago sativa.L)子叶、下胚轴、根的植株再生

随着植物抗逆性研究和植物转基因技术的发展，通过异源目的基因转化培育耐盐碱苜蓿品种的研究已引起人们的关注，植物受体高频再生体系的建立是异源转化高效的基础。选取新疆大叶紫花苜蓿种子萌发5~7d无菌苗的子叶、下胚轴及根为外植体，诱导愈伤培养基为MS+2,4-D 0.1~3.0 mg/L(8种不同水平)或MS+2,4-D 2.0 mg/L+ KT 0.01~0.5 mg/L(10种不同水平)，诱导芽培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.05 mg/L，生根培养基为MS。结果表明，外植体在MS+2,4-D 2.0 mg/L+ KT 0.2 mg/L培养基中能够产生状态较好可再分化的愈伤组织，子叶、下胚轴、根的平均出愈率分别为93.1%、100%、100%。愈伤组织在MS+6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.05 mg/L培养基中培养40~80d中均可分化芽，子叶、下胚轴、根的芽平均分化率为50%、78%、50%，将2 cm以上的芽转入MS培养基中诱导生根，14d后，生根的小植株炼苗移入花土中，成活率达90%以上。子叶、下胚轴、根在该体系中均能获得再生植株，根也是一种较好的植株再生材料，以根为外植体进行植株再生的研究报道还较少。     

不结球白菜亮白叶再生体系的优化

摘 要：本文以不结球白菜品种亮白叶为实验材料,研究不同外植体类型和不同生长调节剂配比等因素对其不定芽分化频率的影响。结果表明,对不结球白菜品种中再生比较困难的品种亮白叶来说,以下胚轴、子叶及子叶柄为外植体的诱导频率存在明显差异。以生长5-6天无菌苗的子叶柄为外植体,在培养基为MS+6-BA（5 mg/L）+NAA（0.1 mg/L）+ AgNO3（4mg/L）的培养条件下,亮白叶分化不定芽的再生频率最高,可达59.5%;这为将来该不结球白菜转化体系的建立奠定了坚实基础。     

苦豆子愈伤组织培养及其药用成分含量测定

本研究利用组织培养技术考察外植体种类、激素水平、水解酪蛋白浓度等不同因子对愈伤组织的生长状态的影响;同时采用分光光度法和HPLC测定不同继代次数愈伤组织中总黄酮和槐定碱的含量。结果表明,苦豆子愈伤组织诱导的最适外植体是子叶;愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,最佳继代培养基为MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 4.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L;总黄酮和槐定碱在第5次继代培养的愈伤组织中含量最高,分别为0.53%和0.0112%。因此,可选择第5次继代培养的愈伤组织作为苦豆子细胞悬浮培养的材料。     

番茄组培再生体系优化研究

对番茄再生体系中无菌苗的苗龄、不定芽诱导培养基和生根培养基的激素配比进行了优化。试验以‘浙杂905’、‘圣亚’和‘富丹’为材料。用番茄的茎段和子叶作为外植体,对外植体的出愈率、诱导率和不定芽生根情况进行差异比较。主要结果如下：选苗龄为4天的番茄幼苗。番茄子叶为外植体的最佳再生培养基配比为MSB5+3%蔗糖+0.6%琼脂+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L（pH5.8）,‘浙杂905’、‘圣亚’和‘富丹’子叶的出愈率分别为97.00%、91.00%、86.00%,诱导率分别为64.67%、59%、53%。以番茄茎段为外植体的最佳再生培养基配比为MSB5+3%蔗糖+0.6%琼脂+BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L（pH5.8）,‘浙杂905’、‘圣亚’和‘富丹’茎段的出愈率分别为81.67%、76.00%、82.67%,诱导率分别为41.00%、48.67%、39.67%。不定芽生根培养基为：1/2MS+NAA 0.1 mg/L +IBA 0.5 mg/L。通过试验对比得出,番茄再生体系中选用无菌苗的最佳苗龄、不定芽诱导培养基和生根培养基的配比,子叶的再生能力要显著高于茎段。