4个梅花品种的胚培养及愈伤组织诱导研究

为保存和扩繁梅花种质资源,试验筛选4个梅花品种,取胚进行胚培养,旨在建立梅花胚培养的无菌体系。以梅花(Prunus mume Sieb. Et Zucc.)天然杂交的未成熟胚为外植体,初步探索‘淡寒红’、‘南京红须’、‘双碧垂枝’、‘粉瓣’等梅花品种的胚培养体系,并在此基础上,利用叶片建立了高效的愈伤组织诱导体系。结果表明：胚培养的最适培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L,叶片愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 1.0 mg/L,最适的叶龄为幼叶时期。梅花的胚培养中,不同品种的萌发率具有一定差异,难易顺序是单瓣品种群＜垂枝品种群＜朱砂品种群。     

红颜草莓叶片再生体系的建立

摘要：以红颜草莓 ( Fragaria ×ananassa Duch ‘Benihoppe’)组培苗为材料进行叶片离体再生研究,建立了一个高效的叶片再生体系。结果表明：暗培养10 d是叶片诱导愈伤组织最适合的暗培养时间。适宜的叶片诱导愈伤培养基为MS+TDZ 2.0mg/L +NAA 0.1mg/L,出愈率95.0%;适宜的愈伤诱导分化培养基为MS+TDZ 1.0mg/L +NAA 0.1mg/L,分化率90.0%;最适宜的生根培养基为1/2 MS,生根率为100%。     

安祖花愈伤组织再生体系的建立及染色体检变

试验以安祖花幼嫩叶片和无菌苗叶柄为外植体,通过愈伤组织诱导途径,建立快速高效的安祖花再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片和叶柄愈伤组织的培养基分别为1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D和1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D;诱导出愈伤组织在1/2MS+2.0 mg/L KT+0.1 mg/L NAA培养基上能很好的分化不定芽苗;1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基可对再生芽实现增殖与复壮;最适宜的生根培养基为1/2MS+0.05 mg/L NAA。试验通过观察安祖花继代过程中愈伤组织细胞染色体变异的情况,发现随着继代次数的增多染色体变异细胞的频率也随之上升,并且染色体变异多为非整倍体变异。     

桃儿七不同外植体愈伤组织诱导研究

旨在建立一种桃儿七愈伤组织诱导培养体系,筛选出最佳诱导培养基和最适外植体。以MS为基本培养基,采用正交试验法研究6-BA、2,4-D和TDZ 3个因素及其组合对桃儿七成熟叶片、叶柄和茎段愈伤组织诱导率的影响。研究结果表明：3种外植体均可诱导出愈伤组织,叶片愈伤组织诱导率最高,达44.3%,其次是叶柄,达24.7%,茎的愈伤组织诱导率为18.1%,最佳愈伤组织诱导培养基为MS+ 6-BA 1.0 mg/L+TDZ 0.1 mg/L+2,4-D 1.5mg/L,细胞分裂素6-BA和TDZ联合使用有利于提高愈伤组织诱导率并改善愈伤组织质地。与茎段和叶片所得愈伤组织相比,以叶柄为外植体获得的愈伤组织质地较疏松,呈明显的黄绿色颗粒状,更适合进一步细胞培养和诱导分化。本研究建立了一种高效的桃儿七愈伤组织诱导培养体系,为桃儿七体细胞胚的培养提供了材料。     

马铃薯晋薯16号愈伤组织再生体系的建立

为建立马铃薯品种晋薯16号组织再生体系,以晋薯16号无菌苗为材料,对外植体类型、外植体表面消毒试剂浓度和根的诱导条件进行筛选,同时优化了愈伤组织诱导和分化的最佳植物激素组合及浓度。结果表明:愈伤组织诱导的最佳外植体为茎段;2%的次氯酸钠消毒效果较好;根的诱导使用含50g/L蔗糖的MS培养基较好;愈伤组织诱导培养基以MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.5mg/L为佳;愈伤组织分化培养基以MS+6-BA 1.5mg/L+GA3 2.0mg/L+ZT 1.0mg/L为佳。     

‘黑珍珠’番茄植株再生体系的研究

为了研究‘黑珍珠’番茄植株再生,以‘黑珍珠’番茄幼嫩叶片为外植体诱导愈伤组织,通过愈伤组织诱导培养、愈伤组织分化培养、不定芽增殖培养、生根培养和试管苗移栽,建立高效快速的‘黑珍珠’番茄再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片愈伤组织的培养基为MS+ 1.0 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA,叶片外植体愈伤组织诱导率最高可达98.2%;诱导出的愈伤组织在MS+ 1.5 mg/L 6-BA+ 0.2 mg/L IBA培养基上能很好的分化出不定芽;MS+4.0 mg/L KT+ 0.01 mg/L IBA 培养基可实现不定芽芽增殖;最适宜的生根培养基为1/2MS+ (0.05~0.08) mg/L NAA,试管苗移栽成活率达92%。     

珍稀濒危植物香果树高频再生体系的建立

香果树是中国特有珍稀濒危树种,为建立一种高频香果树再生体系,以香果树叶片和叶柄为外植体,利用含新型植物激素TDZ和NAA的培养基诱导愈伤组织,结果表明,叶柄是一种较好的外植体,在培养基MS+0.5 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA上,愈伤诱导率高达98.33%;将叶柄愈伤组织转接到培养基MS+0.2 mg/L IAA+1.0 mg/L 6-BA上进行分化培养,分化率高达86.67%,平均每块愈伤组织可以产生4.31个芽;组培苗在培养基1/2 MS+0.5 mg/L IAA上,最大生根率可达86.67%,平均每株幼苗可以产生5.24条根,平均根长达到4.31 cm,移栽成活率达100%。本研究为香果树种苗繁育及其遗传转化技术提供指导。     

加工番茄离体再生体系的建立

以加工番茄‘亚心98-1’和‘里格尔87-5’2个品种的子叶作为外植体,研究不同激素组合对其出愈和诱芽的影响。结果表明,激素的种类和浓度对加工番茄外植体出愈率的影响没有差异,但是诱导形成的愈伤组织形态和不定芽存在差异,ZT与IAA组合对不定芽的诱导效果高于6-BA与IAA组合,不定芽诱导率最高的培养基为MS+ZT 0.5 mg/L+IAA 0.2 mg/L。品种之间存在差异,‘亚心98-1’比‘里格尔87-5’更易产生较高比率的正常芽。再生芽在1/2MS + 0.1 mg/L IAA生根培养基上能正常生根,并发育成完整的小植株。     

金钻蔓绿绒的离体培养研究

本研究以金钻蔓绿绒根茎、叶片、叶基、叶柄为试验材料,研究外植体类型与取材时间、消毒处理方法,植物激素种类与浓度筛选出适宜诱导愈伤组织、不定芽与继代培养基。结果表明:叶片和叶基最佳灭菌时间:75%酒精30 s+0.1%升汞10 min,叶柄:75%酒精30 s+0.1%升汞16 min,根茎:75%酒精30 s+0.1%升汞20 min;最佳取材时间为夏季,愈伤诱导率高,且诱导时间短;叶片、叶基、叶柄最佳诱导愈伤培养基:MS+2.0 mg/L TDZ+0.2 mg/L 2,4-D,增殖培养基:MS+3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA;根茎诱导不定芽及继代增殖最佳培养基分别为:MS+1 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+1 mg/L GA3与MS+0.8 mg/L 6-BA+0.2 mg/LIBA。     

马铃薯未授粉子房离体培养诱导双单体植株初探

以MS培养基为基本培养基,添加不同种类和浓度的生长调节剂,离体培养8个马铃薯普通栽培种（2n=4x=48）品种的未授粉子房,获得了青薯168和青薯7号的双单体小植株。花蕾4℃下预处理24~72 h的愈伤组织诱导率（51.24%~57.08%）比未预处理（9.35%）的明显提高。对青薯168和青薯7号而言,最佳培养基分别为MS+2-4-D 2.0 mg/L+ZT 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L和1/2MS+GA3 0.5 mg/L+2-4-D 0.5 mg/L+KT 2.0 mg/L+BAP 2.0 mg/L+ ZT 0.2 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂7 g/L。品种对愈伤组织分化形成小植株的影响比培养基的影响要大。     

油梨愈伤组织诱导及分化研究

摘要：[目的]研究不同激素及外植体类型对‘哈斯’油梨（Persea Americana Mill.cv.Hass）愈伤组织诱导及分化的影响,筛选最佳诱导条件和外植体。[方法]通过间接器官发生途径。主要探讨（1）单一激素萘乙酸（1-Naphthylacetic acid,NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-dichlorophenoxy acetic acid,2,4-D）;6-苄氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine,6-BA）分别与2,4-D和NAA 结合时对‘哈斯’油梨叶片愈伤组织的诱导效应。（2）不同外植体（叶片、叶柄、茎尖、茎段）在相同条件下（基本培养基：MS+1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.1NAA mg/L）的愈伤组织诱导效应。（3）单一激素 6-BA（或与NAA结合）对油梨愈伤组织芽分化的效应。[结果]结果表明：以MS为基本培养基,（1）添加1.0 mg/L 2,4-D/NAA,其诱导效果最佳,诱导率分别为45.3%和20.2%;但NAA诱导的愈伤质地较佳。（2）1 mg/L NAA与1.0 mg/L 6-BA结合,诱导效果较好,其诱导率最高可达84%。（3）诱导愈伤组织的最适外植体为茎段,其诱导率≥72.8%。叶柄次之,叶片和茎尖较差。[结论]综上,不同激素种类及其浓度和外植体类型对‘哈斯’油梨愈伤组织诱导影响显著。最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂。愈伤组织诱导最佳外植体为茎段,但诱导形成的愈伤组织难以分化出芽。     

金边阔叶麦冬的组培快繁技术研究

旨在研究金边阔叶麦冬的组织培养与快速繁殖技术。分析了植物生长调节剂对金边阔叶麦冬地下茎芽和叶片愈伤组织诱导、芽分化及试管苗生根的影响。结果表明:MS+BA 1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L为地下茎芽诱导愈伤组织最佳的培养基,诱导率达100%;MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L为叶片诱导愈伤组织较为理想的培养基,诱导率为52%。地下茎芽形成的愈伤组织其芽诱导率、芽增殖倍数明显高于叶片,诱导率高者达100%,增殖倍数高者为4.6。金边阔叶麦冬试管苗生根的较为合适的培养基为1/2MS+IBA 0.5 mg/L和1/2MS+IAA 0.25 mg/L,生根率达100%,平均生根数量在5根以上。试管苗移栽苗成活率达90%以上。     

章丘大葱子叶再生体系建立及再生株倍性鉴定

以章丘大葱子叶为材料,研究了不同激素配比对愈伤组织诱导和继代、芽分化、芽点的伸长及根诱导的影响,并对获得的再生植株进行了鉴定。结果表明,诱导章丘大葱子叶产生愈伤组织、愈伤组织的继代培养、愈伤组织芽分化、芽点的伸长及诱导生根的最佳培养基及激素配比分别为：MS+2,4-D 2.0mg/L+KT 0.5mg/L、MS＋2,4-D 2.5mg/L＋KT 0.5mg/L、MS+2,4-D 0+KT 1.0mg/L、MS+KT 0.5mg/L和MS基本培养基;试管苗经驯化移栽后,共有22株成活,成活率为92%,对成活的再生植株进行形态学、叶片气孔及根尖染色体鉴定表明,共有3株发生变异,其中2株为外部形态上的变异,而另一株为染色体的加倍变异。     

大叶黄杨幼茎愈伤组织诱导的研究初报

以大叶黄杨的幼茎段为外植体,在添加BA和NAA、IBA、2,4-D不同激素组合的MS培养基上培养,对其愈伤组织进行诱导试验。结果表明：①生长素对愈伤组织诱导的效应为2,4-D >NAA>IBA;②在不同激素组合培养基上均可诱导出愈伤组织,其中MS+BA1.0~2.0 mg/L+NAA 1.0~1.5 mg/L、MS+BA1.5~2.0 mg/L+IBA1.0~1.5 mg/L、MS+BA0.5~1.0 mg/L+2,4-D 0.5~1.5 mg/L等对愈伤组织的诱导效果最好,其诱导率分别为74.3%、65.3%、81.1%。因此,通过科学配制不同激素组合的MS培养基,就能有效地诱导出大叶黄杨幼茎的愈伤组织。     

苎麻遗传转化再生体系的建立

苎麻(BoehmerianiveaL.Guad)是荨麻科苎麻属宿根型草本植物,主要分布在热带和亚热带地区,为我国特产,是重要的纺织纤维和饲料作物。由于苎麻为杂合体,其遗传背景十分复杂,有性杂交等常规方法难以取得育种上的突破,因此,探讨利用基因工程技术改良苎麻品种具有重要意义。本研究以苎麻品种圆叶青叶盘为外植体,选用MS培养基为基本培养基,附加激素BA、IAA、GA3和NAA,通过研究不同激素浓度组合对外植体愈伤诱导及不定芽分化的影响以及不同激素配比对生根的作用,建立了较好的遗传转化再生体系。试验结果表明圆叶青叶盘最适诱导愈伤培养基为MS 6-BA2.0mg/L GA30.4mg/L IAA0.2mg/L 蔗糖30g/L 琼脂7.5g/L;分化培养基为MS 6-BA2.0mg/L GA30.4mg/L 蔗糖30g/L 琼脂7.5g/L;小苗的最佳生根培养基为MS NAA0.2mg/L IAA0.1mg/L 蔗糖30g/L 琼脂7.5g/L。在抗生素浓度梯度筛选实验中获得50mg/L卡那霉素可以抑制叶盘的分化;40mg/L卡那霉素可以抑制再生植株的生根。筛选出的遗传转化再生体系,为进一步利用基因工程技术对苎麻进行遗传改良打下基础。     

杜仲愈伤组织诱导及胚性愈伤组织的判别

为探索杜仲胚性愈伤组织诱导的条件,建立杜仲体细胞胚胎发生初步体系,以杜仲幼嫩叶片和未成熟合子胚为外植体、MS为基本培养基,探究外源激素配比、未成熟合子胚发育阶段与基因型对愈伤组织诱导的影响,并从形态学和细胞学对愈伤组织进行胚性的判断。试验结果表明：4种不同激素配比的培养基诱导出的叶片愈伤组织在形态上具有差异,MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L和MS+ 2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L有利于叶片胚性愈伤组织诱导;在培养基MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L上,以未成熟合子胚为外植体诱导出4种类型愈伤组织,其中圆球形和颗粒型突起的愈伤组织具有胚性;未成熟合子胚采集时间对愈伤组织诱导率具有显著差异,6月14日采集的外植体愈伤诱导率最高,不同基因型差异不显著。     

马铃薯耐热无性系离体筛选的初步研究

为了获得耐热性较高的马铃薯品种,本研究以马铃薯试管苗的愈伤组织为供试材料,采用羟脯氨酸(HYP)和热胁迫相结合的方法来进行马铃薯耐热无性系的离体筛选研究.研究结果表明,MS+1.5～3.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA的培养基均能够诱导全部供试马铃薯茎段产生愈伤组织,说明细胞分裂素6-BA对愈伤组织的形成有着非常重要的作用;同时确定了马铃薯愈伤组织耐羟脯氨酸筛选的适宜浓度为0.2～0.4 mg/mL.MS+1.0～5.0mg/L BA+0.1 mg/LNAA+5 mg/LGA的分化培养基能够诱导愈伤组织进行植株再生,但分化率较低,只有8%～25%.结果表明不同浓度的分化培养基均能诱导马铃薯愈伤组织分化成苗,本实验还筛选出热胁迫的适宜条件为42℃24 h,且经过羟脯氨酸与高温胁迫结合多次筛选获得了两个耐热无性系NKY1和NKY2.初步表明本筛选方法可以用于马岭铃薯耐热无性系的筛选.     

大花绣球‘无尽夏’组培苗叶片再生植株的研究

为建立大花绣球’无尽夏’规模化无性繁殖和高效遗传转化体系,以’无尽夏’组培苗叶片为外植体,研究叶位、暗培养时间及不同激素组合等因素对叶片诱导形成愈伤及分化不定芽的影响。结果表明,’无尽夏’组培苗植株中上部叶片的愈伤诱导效果好,适宜的外植体取样叶位为第3～6位叶片。初始暗培养有利于叶片形成愈伤,暗培养15～25天的效果最佳。诱导’无尽夏’组培苗叶片形成愈伤的适宜培养基为MS+CPPU 3.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L,其愈伤诱导率达到98%以上;愈伤增殖与不定芽分化培养基为MS+6-BA 1.0～2.25 mg/L+IBA 0.1 mg/L。