ISSR分子标记技术在植物种质资源研究中的应用

ISSR是在SSR基础上发展起来的一种分子标记技术,兼具SSR、RAPD、RFLP、AFLP等分子标记的优点.本文综述了ISSR分子标记技术在种质资源鉴定和指纹图谱构建、遗传多样性和亲缘关系、基因定位和分子标记辅助选择等方面的研究进展.     

ISSR分子标记技术在桃品种鉴定中的应用

为了有效地鉴别桃苗木优良品种或类型,为桃种质资源研究和新品种保护提供理论基础,利用ISSR标记对28份桃种质进行了品种鉴定及亲缘关系检测。结果发现：23条ISSR引物共扩增出188条DNA片段,其中96条具有多态性,多态性频率为51.06%;材料间遗传相似系数GS变幅为0.84～0.97,平均为0.92。获得28份供试材料的指纹图谱,鉴定出9条特异出现DNA片段和11条特异缺失DNA片段。通过UPGMA聚类分析发现,供试材料中地理来源及部分农艺性状相近的品种或类型聚为小类,但大的聚类群没有明确的划分标识,可能与桃种质在地区间互换及所选择的ISSR标记有关。     

ISSR标记技术及其在作物遗传育种中的应用

ISSR(inter-simple sequence repeat)标记技术是在SSR基础上发展起来的一项新的标记技术,由于其引物设计比SSR简单,不需要知道SSR两端的碱基序列,多态性高,重复性好,能够提供更多的信息,已在多种动植物的种质鉴定、遗传作图、基因定位、遗传多样性等研究方面得到应用。本文对ISSR技术的特点、实验操作及其在作物遗传育种领域的应用进行了概述。     

ISSR分子标记技术在作物遗传育种中的应用

ISSR分子标记是目前生物标记上新型的标记技术模式,通过引用设计简单的SSR技术,按照两端碱基础序列,实施高重复性操作,完成多信息的综合重组。在作物的种植鉴定、遗传定位、多样性区分上具有良好的标记作用,可以实现多态化的操作。针对ISSR分子标记技术的相关特点进行了分析,研究作物实验操作上,通过遗传育种技术领域的操作,完成作物遗传育种的整体应用操作过程。     

ISSR分子标记及其在植物研究中的应用

ISSR(inter simple sequence repeat)分子标记是一种以微卫星序列为引物,进行多位点PCR扩增的技术.ISSR技术简易、快捷,同时兼备AFLP(扩增酶切片段多态性)、SSR(简单序列重复)和RAPD(DNA随机扩增多态性)等分子标记方法的优点.引物设计无需预知基因组序列,只要是目标区域的长度在可扩增范围内,就能扩增出微卫星重复序列间的DNA片段.ISSR标记以其高多态性,已被广泛应用于种质收集、品种鉴定、遗传多样性、系截系、遗传作图、基因定位、标记辅助选择、预测基因组SSR基序的丰度以及SSR引物开发等研究.本文对ISSR技术及其在植物研究中的应用进行全面的概述.     

广玉兰叶乙醇提取物对植物病原真菌抑菌活性研究

同过测定广玉兰（Magnolia grandiflor .Lima）叶的乙醇提取物以及不同溶剂萃取层对植物病原真菌的抑菌活性,寻找广玉兰叶中的农用活性物质,为其综合开发利用提供科学依据。采用菌丝生长速率法测定了广玉兰叶乙醇提取物对8种植物病原菌的抑制作用。结果表明,当供试浓度为1.0 mg/ml时对苹果腐烂病菌(Valsa mali)、白菜黑斑病菌(Alternaria brassicicola)的抑菌率比较高,抑菌率分别为81.4%和52.1%。当供试浓度为5.0 mg/ml时,对小麦赤霉病菌(Gibberella zeae)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)和苹果轮纹病菌(Physalospora piricola nose)的抑菌率也比较高,均为50.0%以上。乙醇提取物对苹果腐烂病菌和白菜黑斑病菌EC50分别为0.04 mg/ml和1.20 mg/ml。广玉兰叶乙醇提取物的不同极性溶剂萃取物中正己烷层与乙酸乙酯层的抑菌活性较高,EC50分别为0.03 mg/ml和0.11 mg/ml。活性物质主要集中于正己烷和乙酸乙酯萃取部分,是进一步研究的重点。     

花生ISSR分子标记技术初步研究

以花生为研究对象,初步建立起花生的ISSR分子标记技术体系,包括DNA提取、DNA模板浓度、引物浓度、退火温度、循环次数和引物筛选等.结果表明:从48条引物中选择4个条带清晰的引物对7个品种进行扩增,共检测出15条带,其中多态性带为12条,多态性比例为80％,能把7个花生品种区分开采.本试验为花生品种鉴定和新品种选育提供理论依据.     

菜心ISSR分子标记技术初步研究

以菜心为研究对象,初步建立起菜心的ISSR分子标记技术体系,包括DNA提取、退火温度、循环次数和引物筛选等.对退火温度进行优化,确定最佳退火温度为48℃,最优循环次数为45次.共筛选了49条引物,其中11条引物能扩增出多态性带,选择4个条带清晰的引物对6个品种进行扩增,共检测出32条带,其中多态性带为22条,多态性比例为68.80%,6个品种的遗传相似性系数为0.19～0.77.说明ISSR标记能够揭示材料间较高的遗传多样性,本试验为菜心的种子纯度鉴定和新品种选育提供理论依据.     

ISSR在高粱属植物遗传关系研究中的应用

以高粱、杂交高粱、甜高粱、苏丹草、黑高粱和假高粱6种不同高粱属植物为实验材料,利用ISSR分子标记分析其遗传关系。结果表明,这6种高粱属植物在DNA水平上具有较高的遗传多样性。从110条ISSR引物中成功筛选到22条多态性高、稳定性好的引物,共扩增出182条带,其中差异性条带153条,多态条带比率(PPB)为84.0%。基于遗传距离系数的Neighbor-Joining聚类分析可以将6种高粱分为两大组,相互之间的遗传距离为0.25。另外可以根据一些多态性高的引物所扩增得到的品种特异性条带区分所有不同高粱种,如引物IR89、IS16等。这些为研究高粱属植物的分类、鉴定和进化提供了分子生物学方面的理论依据。     

DNA分子标记技术在石蒜属植物中的应用

DNA分子标记技术在石蒜属植物的进化和系统发育分析、种质资源遗传多样性与亲缘关系鉴定、品种指纹图谱和遗传图谱的构建、目标性状基因定位与克隆等研究领域已广泛应用.本文综述了主要几种用于石蒜属植物的DNA分子标记技术( RAPD、AFLP、SSR、ISSR、EAT、SRAP、SNP)的基本特点、原理及其应用现状.     

人工栽培石斛的ISSR标记分析

为了给石斛品种的人工选育和杂交育种提供参考,利用ISSR分子标记技术对9种药用栽培石斛的遗传多样性进行了研究。从备选的引物中筛选出14条多态性引物,共检测到179个多态性位点,多态性比率为94.71%。Jaccard相似性指数显示：15个铁皮石斛样本的相似度介于0.264~0.536之间,6个齿瓣石斛样本的相似度介于0.351~0.561之间,不同种间的相似度介于0.115~0.371之间。虽然种内与种间的相似度值存在一些交叉情况,但UPGMA聚类分析表明,不同种的石斛之间并不存在明显的杂交情况。ISSR标记检测结果显示,源于不同栽培地区栽培的的石斛属植物的遗传多样性非常丰富。     

贵州地方中国樱桃资源的ISSR分析

利用12条ISSR引物对40种樱桃资源进行遗传多样性分析,结果显示,总位点数为120,平均观测等位基因数为1.75,平均有效等位基因数为1.30,平均Nei's遗传多样性为0.19,平均香浓信息指数为0.30.毕节地区遗传多样性最高,且野生资源遗传多样性高于栽培资源.聚类结果显示,相似性系数在0.64～0.98之间,以...     

利用ISSR标记分析海南岛五节芒的遗传多样性

对7份来自海南不同地区的五节芒用ISSR标记分析,采用NTSYS-pc2.10y软件得到相似性系数后,用UPGMA法进行聚类分析。实验结果显示,从42条ISSR引物中筛选出了6条合适的ISSR引物,利用这6条引物对7份五节芒材料进行扩增,一共扩增出107条带,不同引物扩增条带数15~22条不等,平均每条引物产生17.8条带,其中104条为多态性条带,占总条带数的97.2%。样品之间的相似系数（GS）在0.4673~0.8318之间,平均值为0.6816;遗传距离（GD）在0.1682~0.5327之间,平均值为0.3184。研究结果表明海南岛的五节芒具有较高的遗传多样性水平,ISSR标记方法适用于五节芒的遗传多样性分析。     

不同来源棉花种质资源遗传多样性的ISSR分析

 采取ISSR分子标记对48份棉花种质资源的遗传多样性进行分析,从60条ISSR引物中筛选出11条引物,这11条引物共扩增出92个条带,平均每条引物扩增出8.36个条带;其中多态性带77个条带,多态率达83.70％。UPGMA聚类分析显示,48份材料的相似性系数（GS）变化范围在0.27～0.93之间。聚类将48个种质资源划分为 4个大类(GS=0.55),湛江野生棉、廉江野生棉与其它品种在遗传上有很大差别,属于较原始类型,归为一类;长绒棉与陆地棉品种存在明显的遗传差异也单独归为一类;其它不同省份的陆地棉品种在遗传上有较高的相似性,归为其它类型。分析结果表明,ISSR具有丰富遗传多样性和稳定性, 是一种较好的遗传分子标记,适宜于棉花品种遗传多样性分析     

广西马尾松天然林古蓬和浪水种源群体遗传多样性ISSR分析

从100个ISSR引物中筛选出10个多态性引物,对广西古蓬和浪水两个种源区的马尾松天然林5个群体共85份样品进行遗传多样性分析,古蓬种源三个群体47份样品共检测到192个位点,其中多态位点数为177个,浪水两个群体共38个样品检测到168个多态位点.对两个种源区的马尾松群体ISSR分析数据采用POPgene 32软件进行分析,结果表明:古蓬马尾松天然林群体内,总的多态位点百分率(P)为94.35%.总的Shannon信息指数(I)为0.4278,Nei's基因多样度指数(h)为0.2765;浪水种源马尾松群体内,总的多态位点百分率(P)为94.38%,总的Shannon信息指数(I)为0.5190,Nei's基因多样度指数(h)为0.3510;这表明马尾松天然林群体内遗传多样性水平高,个体闻基因多样性变异大.古蓬马尾松群体间的基因分化系数(Gst)为0.0481,浪水的为0.0363,这表明分别有95.19%和96.37%的变异存在予群体内;古蓬3个群体的基因流为9.8877,浪水两个群体的基因流为13.2643,这表明本研究分析中的种源内群体间存在比较高的近亲交配现象,因此有必要加大对马尾松天然林的保护力度,扩大天然林的保护范围.     

枇杷ISSR分子标记的研究进展

枇杷传统标记方法具信息量少、取材部位有限、无法进行早期鉴定、人为因素影响鉴定结果等局限。ISSR技术以其丰富的多态性、较低的实验成本、相对简单的操作、较高的稳定性以及呈共显性等优点,日益受到研究者的青睐。笔者总结了ISSR技术的原理及优缺点,归纳了ISSR技术在枇杷种质鉴定、遗传变异分析,枇杷分类研究,枇杷指纹图谱构建等方面的进展。发现ISSR技术目前在枇杷上的应用较少,研究深度不够。笔者认为今后可通过提高ISSR技术的准确性,延伸ISSR在枇杷上的研究深度和广度,加强ISSR的联合应用,促进研究团队间的合作交流等方面,使ISSR成为枇杷育种研究中不可或缺的分子标记技术。     

海南、云南油棕种质材料遗传多样性的ISSR分析

为进一步开发利用海南和云南油棕种质资源,从DNA分子水平上对海南和云南油棕种质资源进行遗传多样性研究.应用ISSR技术对海南和云南的63份油棕种质材料进行遗传多样性分析,用23个引物共扩增得到201条扩增条带,其中有多态性的条带为155条,多态性条带占总扩增条带的77.1%.聚类分析的结果将不同地方采集的种质明显的分为8类,采自不同地方的种质材料能明显的根据种质来源相对集中在一起,油棕种质材料可按采集地进行分类.     

基于ISSR标记的贵州山核桃遗传多样性分析

以贵州省黔西南州安龙县栖凤镇24份贵州山核桃种质为供试群体,采用ISSR分子标记技术进行遗传多样性分析,并利用筛选出的5条ISSR引物对24份样品进行扩增.结果显示,5条引物共扩增出30个位点,其中多态性位点26个,多态性位点比率(PPB)为86.67％,有效等位基因数(Ne)为1.5798,Shannon信息多样性指...     

芽孢杆菌在植物真菌病害防治中的应用

芽孢杆菌是一类革兰氏阳性菌,对多种植物的病原菌有拮抗作用,其生长迅速、抗逆性强、对环境友好,是国内外应用最广泛的生防菌之一。本文综述了目前国内外利用芽孢杆菌进行植物真菌病害防治的主要进展、防病机制及其应用情况,并对当前研究与应用中存在的问题进行了探讨。     

烟草赤星病菌遗传多样性ISSR和RAPD标记比较分析

对分离出的链格孢菌株用ISSR和RAPD分子标记技术分析研究其遗传多样性,比较2种分子生物学方法在链格孢遗传分析中的优劣,为研究烟草赤星病菌遗传多样性及烟草抗病品种的培育奠定基础。采用ISSR和RAPD分子标记方法对来自不同地区的28份烟草赤星病菌进行遗传多样性分析,筛选出10个ISSR引物和10个RAPD引物;ISSR扩增出多态性条带112条,多态性条带比率为86.82%,菌株间相似性系数为0.53~0.97;RAPD引物扩增出多态性条带70条,多态性条带比率为81.39%,菌株间相似性系数为0.57~0.94。用SPSS 17.0 软件对2种标记遗传距离进行相关性分析,发现2种分子标记结果呈显著正相关,表明2种分子标记方法都适合于烟草赤星病菌遗传多样性研究,ISSR是一种多态性优于RAPD的标记技术。根据2种标记的结果,利用NTSYS软件按UPGMA方法进行聚类分析,发现烟草赤星病菌遗传多样性与地理差异没有显著相关性。