神经生长因子NGF及其受体TrkA在雌性水牛生殖器官的表达定位

为研究神经生长因子NGF及其受体TrkA在广西雌性水牛生殖器官中表达定位情况,运用免疫组织化学ABC法对处于发情周期不同阶段(卵泡期、黄体期)成年水牛的卵巢、子宫、输卵管NGF、TrkA分别进行染色定位.结果表明:NGF/TrkA阳性细胞在卵巢主要见于卵泡内膜细胞、颗粒细胞及黄体细胞;在子宫主要见于子宫内膜上皮细胞、腺...     

白唇鹿雌性生殖器官的组织学研究

白唇鹿卵巢、输卵管、子宫的显微结构与一般哺乳动物相似,卵巢体积小、卵泡数量少。在某些次级卵泡的卵泡膜层见到1—2个原始卵泡或初级卵泡。输卵管狭部由粘膜、肌层和浆膜构成,无粘膜肌、无粘膜下层,未见到任何腺体。粘膜上皮为单层柱状,其中有一种小球形细胞,为固有膜进入上皮的淋巴细胞。子宫阜由内膜形成,呈蘑菇状。     

脑源性神经营养因子在母牛性腺及性腺外生殖组织中的表达

采用RT-PCR方法及免疫组织化学技术检测脑源性神经长生因子BDNF基因在母牛卵泡期和黄体期的卵巢、输卵管和子宫组织中的表达和定位情况。结果表明:BDNF mRNA表达于上述2个时期3种组织中,主要表达于卵巢的颗粒细胞和膜细胞、输卵管的黏膜上皮细胞、子宫内膜上皮细胞及子宫腺细胞,且各组织间免疫活性的表达强度明显不同。     

TRPV6在蛋鸡不同生殖器官组织的表达

【目的】研究瞬时性受体电位通道香草酸受体6（transient receptor potential vanilloid receptor 6, TRPV6）在蛋鸡卵巢、输卵管的膨大部、峡部以及子宫部的表达分布。【方法】本试验采用RT-PCR和免疫组化技术研究TRPV6在蛋鸡不同生殖器官的定性表达,同时采用Real-time PCR和Western blotting方法观察其表达量的变化。【结果】在卵巢,TRPV6蛋白主要分布在初级卵泡和次级卵泡。在输卵管的膨大部、峡部以及子宫部,TRPV6主要分布在黏膜上皮的纤毛上皮细胞游离端（面向管腔）,其中子宫部黏膜上皮的基底层也有少量分布。另外,与卵巢组织相比,膨大部和峡部TRPV6 mRNA表达量显著降低（P＜0.05）。同时,膨大部TRPV6蛋白含量也显著降低（P＜0.05）,子宫部组织TRPV6 mRNA水平低于卵巢,蛋白水平则相反,但均无统计学差异（P＞0.05）。【结论】TRPV6在卵巢、输卵管的膨大部、峡部以及子宫部均有表达,且卵巢和输卵管的子宫部表达量较高,提示TRPV6可能参与卵泡的发育成熟,对蛋鸡输卵管的子宫部Ca2+ 转运也具有重要意义。     

姜曲海母猪初情期前生殖器官雌激素受体mRNA表达丰度的研究

采用非同位素标记原位杂交组织化学方法,检测姜曲海母猪初情期前(初生及15、30、45、60日龄)卵巢和子宫中雌激素受体(ER)mRNA的表达丰度。图文分析系统扫描结果显示：初生卵巢内ER mRNA表达不明显,15～45日龄时阳性率逐渐上升,60日龄时略有下降,阳性斑点主要集中于原始、初级、次级各级卵泡,且大卵泡阳性斑点较小、卵泡密集;子宫内ER mRNA阳性率与日龄呈正相关,且阳性斑点主要出现在子宫内膜腺体中,基质部分较少。     

促性腺激素受体在母犬生殖器官的表达定位研究

为研究促性腺激素受体(FSHR、LHR)在母犬生殖器官中的分布情况,运用免疫组织化学SABC法对处于卵泡期、黄体期成年母犬的卵巢、子宫、输卵管中FSHR和LHR分别进行免疫定位。结果表明:FSHR和LHR阳性细胞在卵巢主要见于卵母细胞、颗粒细胞、卵泡膜细胞、外周生殖上皮细胞和血管周围间质细胞;输卵管中主要分布于输卵管黏膜表面的柱状上皮细胞和肌层细胞;子宫中主要见于子宫内膜上皮细胞、子宫腺上皮细胞。此外,发情周期不同,FSHR和LHR的表达量存在差异,卵泡期卵巢FSHR和LHR的表达量均高于黄体期,且卵泡期卵巢的FSHR阳性反应强度均高于LHR;子宫中卵泡期FSHR、LHR的阳性反应强度高于黄体期,且黄体期中LHR阳性反应强度高于FSHR;输卵管中卵泡期FSHR、LHR的阳性反应强度高于黄体期,且黄体期LHR阳性反应强度高于FSHR。本试验研究促性腺受体在动物生殖器官中的表达情况,对进一步探讨动物促性腺激素的作用机制,具有非常重要的意义。     

雌激素受体α和孕激素受体在不同发情周期牦牛子宫中的表达变化

 【目的】观察发情周期不同阶段牦牛子宫中ERα、PR mRNA和蛋白的表达变化。【方法】采用实时荧光定量PCR技术和免疫组织化学SP法分别对发情期、发情后期、间情期和发情前期牦牛子宫中ERα和PR mRNA及ERα和PR蛋白的表达特点进行了研究。【结果】发情周期不同阶段牦牛子宫内膜和肌层中均有ERα mRNA和 PR mRNA的表达,ERα和PR蛋白免疫阳性产物表达于子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞和子宫肌层平滑肌细胞中;子宫内膜中ERα mRNA和PR mRNA在发情后期表达最强,间情期显著下降（P＜0.05）,发情前期回升;ERα和PR蛋白表达在发情期最强而间情期最弱;子宫肌层中ERα mRNA和PR mRNA的表达在发情期较高,发情后期显著下降（P＜0.05）,间情期降到最低,发情前期显著回升（P＜0.05）,且达到最高值;ERα和PR蛋白发情期表达最强,间情期最弱,但其间无显著差异（P＞0.05）。【结论】ERα和PR在牦牛子宫内膜和肌层中随发情周期不同呈周期性变化,参与调节发情周期不同阶段牦牛子宫内膜及肌层功能的发挥。     

绵羊RARG基因在发情不同阶段卵巢中的mRNA表达

【目的】分离鉴定绵羊视黄酸受体-γ（Retinoic acid receptor gamma,RARG）基因,分析该基因的分子特征,研究其在发情周期不同阶段卵巢中的表达差异。【方法】选取年龄和体况相近、健康的甘肃高山细毛羊周岁母羊8只,通过同期发情处理,根据卵巢生理状态,将其分为两组：黄体期组和卵泡期组,各4只,屠宰后,采集卵巢组织,以周岁母羊卵巢组织RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增绵羊RARG基因并克隆到pMD18-T载体中进行测序验证。利用ORF Finder和DNAStar等生物信息学软件分析绵羊RARG基因的理化性质、同源性和预测结构域和功能。利用Q-PCR技术,检测绵羊RARG基因在母羊发情周期不同阶段卵巢组织中的相对表达量,用SPSS19.0软件进行差异显著性分析,探讨RARG基因对绵羊发情周期的调控机制。【结果】获得了绵羊RARG基因包含完整编码区序列在内的1 588 bp的绵羊RARG基因序列,并提交至NCBI,GenBank登录号为KF019682。该序列含有1个1 377 bp的完整开放阅读框（Open reading frame,ORF）,编码458个氨基酸,其蛋白分子质量为50 955.8 D,理论等电点为7.45。绵羊RARG基因与牛、普通狨、家犬、仓鼠、家猫、人、小鼠、虎鲸、狒、家鼠、野猪、海牛、海豚和蟾蜍等14个物种的同源性分析,结果显示RARG基因在上述物种间高度保守,且与牛的亲缘关系较近,序列同源性最高。GO功能分析结果显示,绵羊RARG基因作为结构蛋白参与转录调控的几率最高,分别为0.272和0.223。在绵羊RARG基因编码的氨基酸序列上发现了2个功能结构域,分别是核激素受体c4锌指结构域（c4 zinc finger in nuclear hormone receptors,ZnF_C4）和 激素受体配体结构域（ligand binding domain of hormone receptors,HOLI）。Q-PCR结果显示,绵羊RARG mRNA 在甘肃高山细毛羊卵泡期卵巢中的相对表达量显著高于黄体期（P<0.05）。【结论】绵羊RARG基因在物种间高度保守,含有ZnF_C4和HOLI等2个与转录调控相关的功能结构域,推测该基因可能作为一种重要的转录因子参与母羊发情周期调控。     

长型Leptin(瘦素)受体mRNA在大鼠卵巢中的表达和分布

以5只SD雌性大鼠为研究对象,采用原位杂交技术研究了大鼠长型Leptin受体mRNA在大鼠卵巢中的表达及其分布。结果表明,Leptin受体mRNA在大鼠卵巢中,主要分布于黄体细胞以及黄体、初级卵泡、生长卵泡和成熟卵泡周围基质颗粒细胞内。而且在黄体细胞上有黄褐色阳性颗粒密集分布;在基质等其他部位中未能检测到Leptin受体mRNA杂交信号。     

黑羽番鸭LPL基因克隆及在肌肉发育中的表达规律

脂蛋白脂酶(LPL)是水解甘油三酯的关键性酶,可以为细胞提供游离的甘油三酯,并作用于脂蛋白循环,与机体的脂质代谢有密切关系。本研究利用同源克隆策略克隆黑羽番鸭LPL基因,并采用实时荧光定量PCR技术分析其在肌肉组织发育过程中mRNA表达规律。结果表明,黑羽番鸭LPL基因cDNA序列长度为1515 bp,包括了1485 bp的编码区,编码494个氨基酸。与禽类LPL基因核苷酸和氨基酸序列同源性均在90%以上,与人和哺乳动物同源性在70%~75%之间。实时荧光定量PCR检测结果显示,LPL基因在第2周龄胸肌中mRNA表达量较低,然后开始上升,达到最大值再出现下降并保持在一定水平上;公鸭腿肌表达规律和公鸭一致,但是母鸭腿肌表达量呈波浪状。     

TETs与细胞程序性死亡相关基因在山羊妊娠早期输卵管及子宫角的表达

【目的】TET（ten-eleven translocation）家族蛋白在调控胚胎和胎盘发育等过程中具有重要作用,输卵管与子宫内膜细胞的死亡平衡会影响受精卵及早期胚胎的发育。因此探讨TETs、细胞程序性死亡相关基因和附植相关基因在妊娠早期山羊输卵管及子宫角中的表达规律及其潜在调控作用,以期为研究胚胎发育及附植的分子机制奠定基础。【方法】以合川白山羊为研究对象,采集妊娠19d（P19）山羊子宫角及输卵管组织,以空配19d（C19）为对照,利用H.E染色观察C19组和P19组山羊子宫角组织形态,利用qRT-PCR技术检测了胚胎附植相关基因（WNT5a、OPN、VEGFA）、TETs（TET1、TET2、TET3）、细胞程序性死亡相关基因（凋亡相关基因（BAX、BCL2、Caspase9）、焦亡相关基因（GSDMD、NLRP3、Caspase1）和炎症相关基因（NF-kB、TNF-α））的相对表达,并分析了TETs及细胞程序性死亡相关基因在输卵管和子宫角组织的表达相关性。【结果】H.E染色结果显示,在P19组中山羊子宫角的腺体增多,形态多变。qRT-PCR结果显示,OPN在P19组山羊子宫角中的表达量极显著高于C19组（P＜0.01）,BAX/BCL2的表达量显著增加（P＜0.05）,而WNT5a和 VEGFA表达差异不显著;TET1、TET2、TET3在山羊子宫角及输卵管中均有表达,在C19组和P19组山羊子宫角中TET1及TET2的表达量极显著高于C19组和P19组中TET3的表达（P＜0.01）;在P19组山羊输卵管中TET2（P＜0.01）、NF-kB（P＜0.01）、Caspase1（P＜0.01）、GSDMD（P＜0.05）显著增高。相关性分析表明,输卵管中TET2与TET3（P＜0.01）、NF-kB（P＜0.01）、Caspase9（P＜0.05）显著正相关;子宫角中,TET3与VEGFA（P＜0.05）、WNT5a（P＜0.01）显著负相关,胚胎附植关键基因OPN与Caspase1（P＜0.01）、NLRP3（P＜0.05）、GSDMD（P＜0.05）显著正相关,而细胞焦亡关键基因GSDMD在输卵管与子宫角中均与Bax（P＜0.05）、Caspase1（P＜0.01）、NLRP3（P＜0.05）呈显著正相关。【结论】在妊娠早期山羊子宫角和输卵管中TETs表达与细胞程序性死亡部分基因表达具有一定的相关性,推测TETs与细胞凋亡或焦亡的发生对输卵管、受精卵、早期胚胎及子宫的发育具有一定的调控作用。胚胎附植关键基因OPN与焦亡相关基因显著相关,暗示妊娠早期子宫角中细胞焦亡的发生可能参与胚胎附植。为研究TETs通过细胞程序性死亡相关基因在妊娠早期输卵管及子宫角中的表达规律提供了理论参考。     

甘加型藏绵羊发情周期内输卵管和子宫中MTR1a mRNA的表达

旨在研究褪黑素受体(MTR1a)基因在甘加型藏绵羊(Ganga Tibetan ovis aries)输卵管和子宫组织中的表达规律,选取发情周期内正常且未孕的甘加型藏绵羊32只,应用qRT-PCR方法检测输卵管和子宫组织中MTR1a基因的表达差异。结果显示:在整个发情周期中,甘加型藏绵羊输卵管和子宫中均有MTR1a mRNA表达。在发情前期、发情期、发情后期、间情期4个阶段,输卵管组织中MTR1a mRNA的相对表达量分别为0.604±0.253、 0.033±0.031、 0.202±0.151和1.000±0.221,间情期的相对表达量最高,与发情期差异极显著,与其他时期差异显著;子宫组织中MTR1a mRNA的相对表达量分别为0.188±0.086、0.525±0.347、1.878±0.209和1.000±0.094,发情后期的相对表达量最高,与其他3个时期差异极显著。发情周期内MTR1a基因在输卵管和子宫中的表达变化规律表明褪黑素(Melatonin,MT)在动物排卵、受精及早期胚胎发育过程中起调节作用。     

雌性牛蛙卵巢·输卵管组织中肥大细胞的形态学研究

[目的]研究雌性牛蛙卵巢、输卵管组织中肥大细胞的形态及分布。[方法]用改良甲苯胺蓝染色法。[结果]卵巢中肥大细胞分布在卵泡之间,卵泡的白膜上亦见;肥大细胞的形状多样,大小不等,在白膜上的以呈长椭圆形为多见,在卵泡之间的呈圆形、锥形、椭圆形等。输卵管中的肥大细胞均在黏膜层、肌层及外膜层分布,肥大细胞大小不等,形态多样,呈圆形,椭圆形或不规则形。[结论]为丰富和发展两栖动物的生殖内分泌学理论及其开发利用奠定了基础。     

山羊子宫中LHR基因片段的克隆及半定量RT—PCR检测方法的建立

【目的】进一步研究处于发情周期不同阶段的济宁青山羊子宫中黄体生成素受体(LHR)mRNA表达量的变化,为探讨其对山羊生殖内分泌机制的作用规律提供理论依据。【方法】以GAPDH为内参照基因,从济宁青山羊的子宫组织中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增目的基因,进行克隆测序,并对半定量RT-PCR反应体系进行了优化。【结果】获得了济宁青山羊LHR mRNA的部分序列,长度约为286 bp,与已报道的GenBank中羊的LHRmRNA(序列号为AF379199)41~326 bp序列同源性为100%。以此基因片段的阳性克隆为基础优化的半定量RT-PCR体系为:LHR基因的适宜循环数为30个,内参照GAPDH基因的循环数为26个,Mg2+浓度均为1.5 mmol/L。【结论】克隆了山羊LHR mRNA的部分序列,并建立了优化的半定量RT-PCR体系。     

海兰褐蛋鸡卵巢与输卵管FSHR及LHR基因定量的研究

为了研究鸡卵巢、输卵管子宫部、输卵管漏斗部FSHR及LHR基因表达水平差异,实验从海兰褐蛋鸡的子宫部、卵巢、漏斗部中提取总RNA,利用RT-PCR技术获得FSHR、LHR目的基因,并应用实时荧光定量PCR进行定量检测。结果显示卵巢组织FSHR m RNA表达水平显著高于子宫部与漏斗部组织(P0.01),子宫部与漏斗部组织FSHR m RNA表达水平没有显著性差异;子宫部组织LHR m RNA表达水平极显著高于其他两组(P0.01),但卵巢、漏斗部组织LHR m RNA表达水平没有显著性差异。实验通过研究鸡卵巢、输卵管子宫部、输卵管漏斗部FSHR及LHR基因表达水平差异,研究为今后研究禽类生殖生理提供基础数据和科学依据。     

郏县红牛子宫内细菌的分离与鉴定

研究郏县红牛产后子宫内细菌的分部情况,为牛子宫内膜炎的预防、治疗提供依据。通过对产后不同时间的21份子宫内容物进行分离、纯化、鉴定,结果共分离出细菌14种(43株),其中以蜡样芽孢杆菌、大肠埃希菌、产吲哚金黄杆菌、浅黄金色单胞菌、奥斯陆莫拉菌、葡萄球菌等为主。从革兰氏染色结果来看,革兰氏阳性菌有23株(占53.5%)、革兰氏阴性菌有20株(占46.5%)。结果与奶牛子宫内膜炎患病牛所分离的细菌菌株及革兰氏染色特性相一致。     

牛卵泡酶活性染色效果观察

本试验应用组织化学手段对牛卵巢中卵泡葡萄糖 6 磷酸酶(G 6 P酶)和碱性磷酸酶(AKP酶)进行酶活性反应显示。旨在探讨不同染色方法对酶活性反应显示效果,以便更好的观察不同发育时期的卵泡内酶的定位和酶活性反应的强弱.结果:对G 6 P酶检测效果以实验Ⅱ组好于实验Ⅰ组和对照组。其卵巢组织结构及卵泡形态较清晰;切片背景为浅粉色,酶活性处呈现棕色沉淀,酶活性反应显示较好;对AKP酶检测效果以实验Ⅰ组好于实验Ⅱ组和对照组,其卵巢组织结构及卵泡形态非常清晰,切片背景为兰色,酶活性处呈现黑色沉淀,各级卵泡上酶的反应显示较好。结论:不同染色方法对酶活性反应观察效果不同;牛卵巢卵泡不同发育时期、不同的结构部位,酶的活性具有强弱不同的反应性     

肉鸡肠道CDX2 mRNA表达的肠段差异性与发育性变化

选用遗传背景相同的1日龄父母代雄性Arbor Acre(AA)肉雏鸡120羽,随机分为4个重复,采用相对定量RT-PCR方法,以从肉鸡30 d肠道样品为模板,研究肉鸡肠道尾形相关同源盒基因(cadua-related type homeoboxgene)家族中CDX2 mRNA表达的组织特异性;以从肉鸡十二指肠和空肠样品为模板,研究肉鸡肠道CDX2 mBNA表达的发育性变化.结果显示:AA肉鸡十二指肠CDX2 mRNA的表达丰度高于空肠(P=0.09)、回肠(P=0.06)和结直肠(P=0.05);从肉鸡CDX2 mRNA在十二指肠及空肠中的表达具有相同的发育模式,2～30 d下降,44 d回升,58 d略微下降;在2和44 d时的表达丰度显著高于30 d(P<0.05).以上结果表明:从肉鸡肠道近端CDX2mRNA的表达丰度高于远端(P>0.05).AA肉鸡十二指肠及空肠CDX2 mRNA的表达具有相同的发育模式,表明CDX2 mKNA表达受到发育阶段的调控,且在十二指肠和空肠间具有稳定性.