运用致病毒素筛选抗稻曲病突变体的研究

通过4个品种水稻愈伤组织的诱导、继代与分化,研究了稻曲病病原菌粗毒素为选择压力进行抗稻曲病突变体的筛选的可行性。结果表明,供试的水稻各品种在细胞水平的抗性与田间的抗性相一致,因而可以以制备的稻曲病菌粗毒素为选择压力进行抗病突变体的筛选。对得到的抗性愈伤组织的抗性稳定性进行了鉴定。结果表明,继代后愈伤组织的抗性仍得到了保持并得到了分化植株。这说明毒素筛选体系是目前最成熟的一种方法。     

利用粗毒素离体筛选苏丹草抗叶斑病体细胞突变体

以苏丹草叶斑病菌粗毒素提取液作为抗性筛选的选择压,对苏丹草幼穗愈伤组织进行抗病筛选。结果表明,粗毒素对幼穗愈伤组织的分化具有明显的抑制作用,抑制程度随浓度的增大而加强,其最适粗毒素浓度为10 mg/L。利用粗毒素离体筛选获得的体细胞突变体中出现了对叶斑病抗性比对照提高2~3级的植株。     

离体筛选茄子抗羟脯氨酸突变体的初步研究

利用体细胞无性系变异筛选茄子的抗羟脯氨酸突变体,通过建立一套茄子离体培养技术,用浓度为8mmol·L-1的羟脯氨酸(L-Hyp)作为筛选压力进行离体筛选,获得了茄子抗羟脯氨酸的愈伤组织,并再生培养成抗性植株.经耐冷性生理生化指标测定,抗性愈伤组织的脯氨酸含量与可溶性糖含量显著地高于对照,而丙二醛含量和电导百分率却显著低于对照,从而具有更好的耐冷性.再生植株的幼苗叶片脯氨酸含量显著高于对照,而电导百分率却显著低于对照,表现出更强的耐冷性.     

耐氨基酸和氨基酸类似物水稻细胞系选择 Ⅰ.氨基酸和氨基酸类似物对水稻愈伤组织生长的影响

以单倍体和二倍体水稻愈伤组织为材料,在附加不同浓度的氨基酸或氨基酸类似物的筛选培养基上培养,测定其对愈伤组织的生长效应。结果表明:筛选抗性愈伤组织突变体的合适剂量为:1,000毫克/升的四氧赖氨酸(OL),2mM的AEC,2mM赖氨酸+1mM苏氨酸,10mM的色氨酸。     

利用反义基因沉默策略构建水稻突变体库及突变体筛选

尝试利用鸟枪反义基因沉默策略构建水稻突变体库．利用水稻反义cDNA文库转化粳稻品种中花11,获得了来源于105块潮霉素(Hm)抗性愈伤组织的1486个转化植株．随机选择来源于11个独立转化系的335个T0植株进行Hm离体叶片筛选,结果表明所有植株均呈抗性,并且与PER检测结果相吻合,说明T0植株中不存在假转化体．Southern blot分析结果表明T0植株大部分为单位点整合．T0及T1代转化植株均呈现了一些形态变异,如矮化、无分蘖或多分蘖、结实率降低、粒型或穗型改变、小穗结构改变等．利用Hm离体叶片筛选法对部分T1群体进行筛选,得到了1个变异性状与Hm抗性共分离的突变体,该突变体的变异表型为结实率比非转化对照下降约50％,每穗颖花总数比对照减少约40％,二者的总效应导致突变体单穗产量比对照约下降70％．     

植物抗性突变体离体筛选和鉴定研究进展

抗性突变体离体筛选技术已经成为一种新的育种技术,其获得的变异多属于单基因或少数基因变异,可以针对不同的需要改进植物个别性状。综述了抗性突变体的类型和抗性突变体离体筛选的途径、鉴定、研究近况及发展前景。     

三黄占2号EMS诱变突变体库的构建与稻瘟病抗性初步评价

三黄占2号是国际公认、具有稻瘟病持久抗性的籼稻品种.为了获得用于三黄占2号稻瘟病持久抗性基因鉴定及机制研究的突变体,利用化学诱变剂EMS对三黄占2号进行诱变处理,创建突变体库,并对三黄占2号EMS突变体进行稻瘟病抗性评价.以成苗率50％为标准,筛选出最佳EMS诱变浓度为0.8％.从M2代起以单粒传方法进行突变体库的构建,获得了性状相对稳定的7 387份M4代突变体.广东阳江稻瘟病自然诱发鉴定结果表明,约有5.9％和5.4％的材料的叶瘟和穗瘟抗性分别发生了突变,并观察到多种抗性变化类型,从中筛选出300份突变体作进一步的研究.     

利用幼穗愈伤组织筛选小麦抗赤霉病菌毒素体细胞突变体的研究

以不同小麦品种（系）幼穗诱导的愈伤组织进行小麦抗赤霉病体细胞突变体筛选，结果表明，不同赤霉病抗性品种（系）对赤霉菌素表现不同的反应，抗性品种愈伤组织生长受毒素抑制小，感病品种伤组织受毒素抑制强烈，筛选出了赤霉病菌毒素加入的最适浓度为２％（Ｖ／Ｖ），在该浓度下可筛选出抗性突变体，获得了咸农１５１，陕１６７，陕２２９等品种（系）的赤霉病菌素抗性体细胞无性系再生植株，再生植株田间人工接种鉴定表现出中或高     

稻曲病菌粗毒素的初步研究

稻曲病菌在生长过程中能产生有毒物质，本文研究了稻曲病菌粗毒素的制备及生物测定方法。结果表明，以PD为液体培养基振荡培养21d后经离心、过滤、高压灭菌制得的粗毒素对水稻种子的萌发、幼苗生长及愈伤组织的生长具有毒害作用。其可以作为抗性突变体筛选的选择压力进行抗稻曲病育种。     

彝药青羊参离体培养庆大霉素抗性筛选

以青羊参离体培养的茎、叶及愈伤组织为材料,以不同浓度的庆大霉素为筛选压,就青羊参离体茎、叶及愈伤组织对庆大霉素的抗性水平进行浓度筛选.结果表明:庆大霉素对青羊参离体茎、叶的致死浓度为50 mg/L,对愈伤组织的致死浓度为75 mg/L.青羊参对庆大霉素极为敏感,用庆大霉素抗性基因作为标记基因,筛选转基因青羊参植株有较好效果.     

河北杨体细胞抗盐性突变体离体筛选的研究

以河北杨优树无性系一年生枝条为外植体诱导愈伤组织,建立了河北杨体细胞抗盐性突变体离休筛选的实验系统,并以ＮａＣｌ为选择剂,从未经诱变处理及￣（６０）Ｃｏγ－射线或ＥＭＳ诱变处理的愈伤组织材料中,通过一步和多步选择程序进行了抗性愈伤组织的筛选。共得到７个抗性变异系,并均已分化出完整植株。     

灰霉菌毒素诱导番茄抗性突变体及相关防御酶活性

以灰霉菌毒素为选择剂,利用多步筛选法筛选番茄抗性愈伤组织突变体,结果显示,毒素对番茄愈伤组织的诱导、生长具有抑制作用,且随毒素浓度的升高而增强;获得的抗性愈伤组织在不同浓度毒素胁迫下,其增殖率均高于原始型愈伤组织,并在离开选择因子继代培养2代后,仍保持获得的抗性。研究毒素处理后过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)的活性变化发现,无论有无毒素胁迫,抗性愈伤组织突变体及其再生植株的酶活性均高于原始型愈伤组织和原始植株(对照);随着毒素胁迫浓度的增大,抗性愈伤组织突变体及再生植株的3种酶活性有相同的变化趋势,即先升高后降低,且均比对照升高幅度大,其中PAL和PPO酶活性的下降速度较对照慢,说明抗性突变体通过增强与抗病性相关的酶活性,增强植物的防卫能力。     

枸杞抗黑果病变异体的初步研究

用枸杞品种宁杞1号的髓组织进行离体培养,诱导产生胚性愈伤组织,用110GY(半致死剂量)的60Co-γ射线处理并恢复增殖14d后,以枸杞胶孢炭疽菌(ColletotrichumgloeosporioidesPens)纯菌株产生的培养滤液为选择剂,筛选抗性变异体。在含毒素液60%条件下,一步筛选获得抗炭疽病毒素的愈伤组织,将其转移到含50%毒素液的诱导培养基上培养,经不断选择,选出了抗50%毒素液、且抗性稳定的抗性愈伤组织变异体,该变异体在含30%毒素液的分化培养基中可分化成再生植株,其叶片经胶孢炭疽菌分生孢子接种鉴定,有6株抗病。说明经筛选得到的抗性再生植株是抗炭疽病(黑果病)的变异体。     

渗透调节对水稻愈伤组织继代培养效应的研究

<正> 前言在离体继代培养中,多数愈伤组织丧失植株再生能力,从而大大地限制了突变体筛选。近年来继代培养方法的研究颇受重视,并取得一定的进展。赖光隆、Kishor等分别用一定浓度的蔗糖和甘露醇、山梨醇以及NaCl等加入继代培养基中,使水稻愈伤组织继代培养60多代(1500N)仍获高比例的再生植株。陈克贵等在培养到16代以上仍保持很高比例的植株再生能力。本文报道蔗糖和甘露醇、脯氨酸以及烟草愈伤组织分泌物对水稻愈伤组织继代培养的影响。材料与方法一、愈伤组织诱导供试品种:腾板5号,台北309、日本     

龙眼胚性愈伤组织长期继代培养及其染色体数目变异

从龙眼幼胚培养诱导并筛选出的松散型胚性愈伤组织，在继代培养基上已培养6a以上，所保持的若干愈伤组织仍具有强烈的体细胸胚胎发生能力，经细胞学检查，其中个别愈伤组织系的部分愈伤才发现有2n=3x=45或2n=4x=60，等染色体数目的变异细胞，这对于离体筛选龙眼细胞突变体很有价值。     

水稻白叶枯病菌对体细胞突变体HX-3愈伤组织的侵染

以抗白叶枯病细胞突变体HX-3及其感病供体明恢63的愈伤组织为试材,观察白叶枯病菌对水稻愈伤组织的侵染。结果表明：接种水稻白叶枯病菌后,明恢63愈伤组织的生长明显受到抑制,接种后13d,愈伤组织的生长量仅为对照(未接菌)的66．2％;而HX-3愈伤组织生长量减小不明显,为对照的91．3％。通过光学显微镜和透射电子显微镜观察,明恢63接菌后5d,愈伤组织细胞逐步解体,且细胞内有大量细菌侵入,接菌后13d,愈伤组织细胞大量解体破碎;而HX-3接菌后5d,愈伤组织的细胞排列致密,未见异常,接菌后13d,愈伤组织中有些细胞解体,但解体程度小且侵入到细胞内的细菌数量少。说明HX-3和明恢63在细胞水平上的抗性存在较大差别,同时也证实了水稻对白叶枯病的抗性在植株水平和细胞水平上具有相关性,这就为运用细胞突变体离体筛选技术获得抗病突变体提供了理论依据。     

生物工程应用于作物育种的试验甘蔗抗黑穗病细胞突变体的筛选

本试验采用甘蔗愈伤组织作离体培养，在培养基中加入甘蔗黑穗病粗毒素滤液为选择压力。采用电导率、生长量、蛋白质含量作为选择抗病性突变体的一种技术方法加以研究。实验表明：粗毒素滤液具有与黑穗病孢子相同的致病性，可替代孢子用于甘蔗抗黑穗病突变体的筛选与鉴定。测定甘蔗愈伤组织受侵染后的生长量和愈伤组织的电导率，可作为选择抗病突变体鉴别方法之一。     

甲基磺酸乙酯诱变筛选强耐盐旱柳愈伤组织变异体研究

为获得强耐盐旱柳愈伤组织突变体,采用甲基磺酸乙酯(EMS)诱变处理旱柳愈伤组织,对得到的旱柳愈伤组织变异体进行耐盐性检验。结果表明,0.4%EMS处理3 h为旱柳愈伤组织的半致死处理方式;愈伤组织存活率和生长率会随盐浓度的升高而降低,NaCl为0.4%时,愈伤组织的死亡率为93.6%;对筛选出的愈伤组织突变体进行盐胁迫形态与生理指标检验,诱变组SOD活性、POD活性、积累可溶性蛋白的能力比对照组高,而MDA含量始终低于对照组。旱柳愈伤组织突变体在0.4%NaCl胁迫下可正常生长,而原亲本只能耐受0.2%盐浓度,诱变体比原亲本耐盐性提高了100%。     

稻瘟菌粗毒素对水稻成熟胚愈伤组织的影响

以生产上大面积推广的杂交水稻恢复系蜀恢527和西南科技大学自育优质高产杂交水稻恢复系“2330”为材料．研究目前四川地区的稻瘟优势菌株稻瘟菌粗毒素对水稻成熟胚愈伤组织诱导、生长和分化的影响。结果表明,在优势稻瘟菌株A2中,随着稻瘟菌粗毒素浓度的提高．水稻愈伤组织的诱导率和分化能力显著降低,“2330”的最低诱导率为16．7％,蜀恢527只有12、5％：愈伤组织的致死率随毒素浓度的提高而增加．其最高致死率达到100％。在混合毒素培养基中粗毒素浓度为30％的处理选择效率较合适．但是增加毒素浓度可以进一步提高选择效果和提高得到抗性突变苗的几率。     

IPT基因遗传转化谷秆两用稻的研究

采用农杆菌介导的方法,将嵌合基因PSAG12-IPT导入谷秆两用稻201幼胚诱导的胚性愈伤组织中,经潮霉素筛选,抗性愈伤分化成苗,共获得46个抗性愈伤克隆,126株转基因植株.对这些植株进行PCR检测和GUS染色分析,确定其中80株为阳性植株.