用A蛋白免疫电镜快速检测几种蔬菜作物的两种杆状病毒

 应用A蛋白免疫电镜技术对几种蔬菜作物的长叶车前草花叶病毒(RMV)、烟草花叶病毒(TMV)的检测比常规的电镜负染技术至少要灵敏近10,000倍,比普通的免疫电镜技术要灵敏10~100倍,抗血清浓度稀释至400,000倍,病毒粗提液稀释到1,000,000倍或病毒提纯液浓度为2.5×10^-7 mg/ml时均能观察到病毒粒子。同时由于抗体分子能特异性地结合到病毒粒子表面,能够很容易地区分不同的病毒种类。
应用此项技术作者检测了杭州地区几种常见的蔬菜病毒病,对大白菜(Brassica campestris L.),蕃茄(Lycopersicum esculentum Mill),榨菜(Brassica juncea var.tsatsai Mao),雪里(Brassicajuncea var.multiceps Tsen et Lee)等作物发病期的叶或果的浸提液用A蛋白免疫电镜进行快速检测,结果在大白菜,番茄等病株上检测到较多的病毒粒子,且大多能被RMV抗血清修饰,同时在番茄病株检测到的少量病毒粒子亦能被TMV抗血清修饰,而榨菜及雪里等病株上检测到的病毒粒子很少能被RMV及TMV抗血清所修饰,另外,病毒粒子的含量以番茄病果中为最高,要比其它几种蔬菜作物叶子中高约10~30倍。     

胶体金免疫电镜技术用于烟草花叶病毒的检测

 本文报道了以改良的鞣酸法制备颗粒大小适于植物病毒标记的胶体金方法,以及以胶体金免疫电镜技术检测、鉴定植物病毒的方法,并以此法检测了烟草花叶病毒TMV。     

大麦黄矮病毒PAV血清型免疫电镜检测

用免疫电镜技术对大麦黄矮病毒PAV 血清型进行了检测。病毒粗提液经过抗体IgG 的诱捕、修饰后,在电镜下观察到病毒粒体。病毒在抗体的诱捕下,产生了明显的聚集效应。单个病毒粒体周围有抗体环,病毒二聚集体之间有抗体桥存在。病毒粒体表面结构清晰,而且能够清楚地看到抗体分子与病毒表面突起的结合     

应用A蛋白免疫电镜技术快速检测病株中大麦黄花叶病毒

 用A蛋白免疫电镜技术,检测大麦病汁液中的大麦黄花叶病毒(BaYMV),其捕获抗血清的适宜工作浓度范围很宽,320-20,480倍均能达到满意的结果;抗原孵育条件以室温(约25℃)下30分钟或冰箱(约4℃)中3小时,捕获到的病毒粒子数量较多。应用这项技术,在稀释3,125倍的病汁液中还能检测到BaYMV粒子,比普通免疫电镜方法的灵敏度至少高5倍。BaYMV在病株中的分布以症状明显的花叶中含量最高,黄化叶中较少,茎和根中找不到病毒。利用该技术可以快速而灵敏地进行大麦品种抗病性的鉴定与筛选。本文最后还讨论了BaYMV的稳定性。     

泰安市郊蔬菜病毒病毒原类型的血清学测定

用常规血清学方法并辅以生物学测定法检测33种蔬菜(包括芝麻、甘薯,下同)414个样品,证明CMV、TMV、TuMV和PVY在泰安市郊均有分布,当P=0.95时,4种病毒的阳性率置信区间为CMV:52.2-61.7％;TMV:26.2-35.0％;TuMV:13.4-20.6％;PVY:11.0-17.7％。CMV在茄科和十字花科中最高,TMV在茄科中最高,TuMV在十字花科中最高,PVY则在豆科中分布最高。4种病毒在田间均存在一定的复合感染。     

泰安市郊蔬菜病毒病毒原类型的血清学测定

用常规血清学方法并辅以生物学测定法检测33种蔬菜(包括芝麻、甘薯,下同)414个样品,证明CMV、TMV、TuMV和PVY在泰安市郊均有分布,当P=0.95时,4种病毒的阳性率置信区间为CMV:52.2-61.7％;TMV:26.2-35.0％;TuMV:13.4-20.6％;PVY:11.0-17.7％。CMV在茄科和十字花科中最高,TMV在茄科中最高,TuMV在十字花科中最高,PVY则在豆科中分布最高。4种病毒在田间均存在一定的复合感染。     

检测植物病毒的几种免疫电镜法

免疫电镜一般是指用电镜检测特异抗原抗体反映的技术,可以大致分为二类:一种是用来检测固定或切片材料中的免疫反应;另一种用来检测在特殊材料特别是病毒制剂中的免疫反应。对于后者我们先简单回顾一下早期的几种方法,然后详述二种快速的改进方法。     

进一步研究A蛋白在检测病毒粒体的免疫电镜技术中的应用

在前一篇(Shukla 和 Gough,1979)我们报道了检测二种线状植物病毒甘蔗花叶病毒(SCMV)和烟草花叶病毒(TMV)改良的流行免疫电镜技术(Derrick,1973;Milne 和 Luisoni,1977)。它包括在用特异抗血清包被铜网前,预先用 A 蛋白(一种金黄葡萄球菌细胞壁蛋白)包被铜网。虽然这条件对严格比较来说还不是最理想的,但此方法比起单用抗血清处理诱捕的 SCMV和 TMV 病毒粒体的数量多。此技术特别适合在植物抽提液中含病毒浓度低的病毒。     

进口大豆上菜豆荚斑驳病毒的免疫捕获巢式RT-PCR检测

利用DAS-ELISA对进口大豆上BPMV进行检测发现,从美国进口的部分大豆样品对BPMV的多抗血清呈阳性反应;利用免疫吸附电镜观察发现,ELISA检测阳性的大豆种皮病汁液中存在直径约30nm的球状病毒粒子.根据BPMV外壳蛋白（CP）基因的保守序列设计了2对嵌合引物,建立了BPMV的高灵敏的免疫捕获巢式RT-PCR（IC-nested RT-PCR）检测方法.该方法经免疫捕获、反转录和2轮PCR扩增,能从带毒大豆种子中扩增到预期大小的DNA条带.序列测定与分析表明此条带的序列为BPMV部分CP基因,在系统关系树上与BPMV的其它分离物形成一簇亲缘关系很近.实验表明从进境大豆上检测到了BPMV.     

无公害蔬菜的几种防虫技术

每667m^2用草木灰10kg对水50kg浸泡24h,取滤液喷洒可有效地防治蚜虫、黄守虫。如果在草术灰液中加入适量的敌百虫,可增强药液的触杀熏蒸作用,提高防效。若葱、蒜、韭菜受蝇、葱蝇蛆虫危害,每667m。沟施或撒施草木灰20—30kg,既治蛆又增产。     

受侵染细胞内病毒抗原的免疫标记

采用金颗粒免疫标记技术,通过电镜现察,初步明确了豇豆裉绿斑驳病毒(CCMV)在浸染豇豆后,侵染点细胞的变化,病毒增殖及扩散的部位等,并对检测技术提供了今后的改进意见.     

蔬菜农药残留的现状与检测技术的概况

本文对蔬菜农药残留的现状进行详细的分析,并对其检测技术的概况作了系统的总结.     

非洲菊三种病毒的快速检测及其组培脱毒方法

利用感染了番茄黑环病毒、烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的非洲菊叶片,建立同步检测非洲菊3种病毒的多重RT-PCR和实时荧光RT-PCR,多重RT-PCR可一次性扩增出3种病毒的DNA条带,最低可检测到相当于1μg的带毒叶片;实时荧光RT-PCR可分别检测相当于1 ng、1 ng和100 Pg的带毒叶片.同时采用茎尖、叶片和花托组织培养脱毒并结合培养基添加病毒A的脱毒方法,对接种3种病毒的非洲菊进行外植体脱毒试验,获得非洲菊组培苗脱毒方法.用建立的多重RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测脱毒效果,茎尖脱毒率分别为75.0%和66.7%,花托脱毒率分别为52.0%和54.5%.     

用免疫分离法检测稻种上的白叶枯病菌

 免疫分离法是一种新型的、高度灵敏和准确的种菌带菌检验法,它结合了利用专化性抗血清的选择法吸附作用和活细菌可形成菌落的两方面的优点,从种苗材料中分离到目标细菌,用纯菌测试它的回收率为50~70%,最低检出率为50~100个菌/ml,人工喷接种和病田收获的病种带菌率达87%,平均每粒自然病种上的细菌数在100个左右。免疫分离所得菌落经致病性测定,大多数为白叶枯菌。     

两种桑树病毒的形态观察与检测

桑树病毒病一直是影响蚕桑产业发展的重要因素之一, 但其病原也尚未完全确认。本研究收集全国不同桑园、不同时间和不同品种的皱缩状和花叶状桑叶样品, 分离病毒后使用透射电子显微镜观察病毒形态特征。结果在桑病叶中分离获得两种病毒, 一种为双联体形态病毒, 长(27.84±1.71)nm, 宽(17.05±1.13)nm, 形态特征与双生病毒属的病毒形态特征一致; 另一种为球状体病毒(80~100 nm), 形态特征与番茄斑萎病毒属的病毒形态特征一致; 桑叶切片观察, 发现同一桑叶材料中存在这两种病毒。通过高通量测序发现其存在桑花叶型萎缩病相关病毒Mulberry mosaic dwarf associated virus (MMDaV)和桑脉带相关病毒Mulberry vein banding associated virus (MVBaV)。设计上述病毒的特异引物, 对158份桑病叶进行PCR检测, MMDaV的检出率为93.04%; 而MVBaV为60.13%, 同时检出率为57.59%。结果表明, MMDaV和MVBaV在桑病叶中普遍存在, 且同时存在。本研究首次在桑树病叶中同时观察并检测到MMDaV和MVBaV, 二者在桑皱缩状和花叶状的桑叶中存在混合感染的现象, 研究结果将为今后深入研究桑病毒病及防控奠定了基础。     

两种蔬菜中甲胺磷、氧乐果和克百威的残留量分析

分别选取一种瓜菜 (黄瓜 )和一种叶菜 (生菜 ) ,选择了两种有机磷 (甲胺磷、氧乐果 )和一种氨基甲酸酯类 (克百威 )农药 ,对这 3种农药在两种蔬菜中的残留测定方法进行了研究。采用弗罗里硅土柱提取的方法进行前处理 ,淋洗液浓缩后用 GC- NPD测定 ,建立了一种简便快速的检测方法 ,并采用该方法对实际处理样本进行了测定。从方法添加回收率和实测数据可以看出 ,该方法净化提取效果好 ,结果平行性好 ,灵敏度较高 ,是一次快速准确测定蔬菜中农药残留的成功尝试。     

用聚丙烯酰胺凝胶电泳病毒衣壳蛋白快速诊断瓜类作物上的三种病毒Ⅰ

 本试验以发生在我国葫芦科作物上的三种主要病毒WMV-2,CMV和SqMV为研究对象,尝试用病毒衣壳蛋白亚基的SDS——聚丙烯酰胺凝胶电泳诊断瓜类作物病毒。试验结果说明,对病株叶片或其他组织进行初步的澄清和病毒浓缩处理,可以检测出病毒衣壳蛋白亚基谱带。根据病毒衣壳蛋白亚基的分子量差异,可以区别这三种病毒。这种方法有其他常规诊断方法(包括生物学测定,电镜观察和血清学方法等)所不具有的优点。病毒浓度的检测限度在1-50μg/ml水平。