不同施肥方案对露地和盆栽桑树根围土壤微生物的影响

土壤中的微生物对土壤肥力的维持与提高有重要作用,而土壤施肥方案又影响微生物种类与数量。采用常规的土壤微生物分离培养技术,分别测定露地和盆栽桑树按3 000 kg/hm2有机-无机桑树专用复混肥(TA)、3 750 kg/hm2有机-无机桑树专用复混肥(TB)、与TA等氮的尿素(TC)、与TA等氮磷钾的复合肥(TD)4种方案施肥后根围土壤微生物的数量,并对微生物的多样性指数进行分析。施肥处理前,露地和盆栽桑树根围微生物中的细菌约占95%左右。TB施肥方案处理的露地和盆栽桑树在施肥后10、40、90 d,根围细菌数量均高于其它施肥方案处理,且在施肥后90 d根围放线菌和解磷细菌数量高于其它处理,但露地桑树根围真菌数量低于其它处理。露地桑树按TA和TB施肥方案处理的根围细菌多样性随施肥后时间呈升高趋势,而按TC和TD施肥方案处理后则呈降低趋势,施肥后90 d,TA、TB施肥方案处理的露地和盆栽桑树根围细菌多样性指数均高于TC、TD处理;盆栽桑树TA和TB 2种施肥方案处理在施肥后10 d,TC和TD 2种施肥方案处理在施肥后90 d,根围细菌多样性指数最低,且各处理区细菌均匀度指数均于施肥后10 d最低。试验结果表明,有机肥的施用能显著提高桑树根围细菌的数量与多样性。     

不同处理方法对细菌气溶胶样本基因组DNA回收率的影响

为分析不同处理方法对空气中细菌气溶胶样本基因组回收率的影响,本研究利用玻璃纤维滤膜采集空气样品中的微生物气溶胶后,针对采样膜的不同处理(钢珠敲打、研磨、MOBIO PowerWater试剂盒)进行DNA提取方法比较,结果表明利用MOBIO PowerWater DNA Isolation Kit对采样膜进行基因组DNA的提取能获得高纯度的DNA(OD_(260nm)/OD_(280nm)=1.82);利用荧光定量PCR技术对所回收基因组进行定量分析,验证该处理方法的样品DNA得率最高,达到15.81%。起始模板浓度的对数与对应的CT值成反比且具有极强的线性关系,其线性相关系数R~2为0.9985。本研究将对养殖场等环境空气中病原体气溶胶样本处理具有重要指导意义。     

不同介质冷冻保存鸡血样基因组DNA提取效果比较

以-20℃保存10年的仙居鸡血样为试验材料,研究不同保存介质(乙醇和裂解液)对基因组DNA效果的影响,以确定更适合的保存介质长期保存血样。琼脂糖凝胶电泳检测结果显示:裂解液保存10年的家禽血样中提取的DNA条带清晰,没有降解现象;75%乙醇保存10年的血样中提取的DNA条带有弥散拖尾现象,DNA降解严重。两种不同介质保存的血样提取的DNA的OD_(260)/OD_(280)值在1.8~1.9之间,纯度均较高,两者之间差异不显著。裂解液保存的血样提取的DNA浓度极显著高于75%乙醇保存的血样提取的DNA浓度(P0.01)。说明75%乙醇保存的血样可以常温保存一段时间,适合长途运输,但不太适合长期-20℃冷冻保存血样;裂解液保存的血样更适合较长时间-20℃冷冻保存。     

瘤胃细菌DNA提取方法的研究与优化

为优化出可获得完整瘤胃细菌总DNA的方法,以满足分子生物学研究需要,试验采用3种DNA提取方法对瘤胃细菌DNA进行提取并对提取效果进行了比较。结果表明:细菌基因组试剂盒法提取的DNA其OD_(260)/OD_(280)值在1.8以上,电泳无杂带,DNA的提取效果最佳,PCR扩增效果较好;珠磨-CTAB法提取的DNA其OD_(260)/OD_(280)值在1.8以上,电泳结果存在少量杂带;水煮法提取的DNA其OD_(260)/OD_(280)值在2.0以上,无电泳条带,DNA严重降解。推荐采用细菌基因组DNA试剂盒法和珠磨-CTAB法对瘤胃细菌进行DNA提取。     

桑树间作大豆对桑园土壤微生物多样性的影响

利用稀释平板法与Biolog-Eco技术对桑树单作、桑树-大豆间作的桑园土壤微生物数量、种群结构以及微生物碳代谢多样性进行研究,为桑树合理间作其它作物改良桑园土壤提供理论依据。桑树间作大豆的桑园,桑树根际(IMR)土壤中的细菌和放线菌数量、可培养细菌种群结构、微生物碳代谢活性的平均单孔颜色变化率(AWCD)及多样性指数(H)均显著高于单作桑园,而真菌数量低于单作桑园。争论贪噬菌(Variovorax paradoxus)和沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)是间作桑园的桑树根际土壤中特有的优势菌属。土壤微生物对不同碳源的利用及主成分分析表明,糖类、氨基酸、聚合物和混合物是间作桑园桑树根际土壤微生物利用的主要碳源类型,利用强度均显著高于单作桑园的桑树根际土壤微生物。间作桑园土壤的有机质、速效磷和速效钾含量亦显著高于单作桑园。以上研究结果表明,桑树间作大豆改变了桑树根际土壤微生物群落结构组成,增强了根际土壤微生物群落的碳代谢多样性,改善了土壤养分条件。     

瘤胃微生物总DNA快速提取法研究

本文介绍了一种简便快速地提取瘤胃微生物细胞总DNA的方法,该法是对提取植物的CTAB法进行改进而成。与经典反复冻融 SDS/蛋白酶K裂解法相比,该法可在数小时内高效地提取瘤胃内容物总DNA,经琼脂糖凝胶电泳对所提取瘤胃微生物总DNA进行检测,证明所获得的瘤胃总DNA符合分子生物学操作要求。     

瘤胃微生物总DNA快速提取法研究

本文介绍了一种简便快速地提取瘤胃微生物细胞总DNA的方法,该法是对提取植物的CTAB法进行改进而成.与经典反复冻融＋SDS/蛋白酶K裂解法相比,该法可在数小时内高效地提取瘤胃内容物总DNA,经琼脂糖凝胶电泳对所提取瘤胃微生物总DNA进行检测,证明所获得的瘤胃总DNA符合分子生物学操作要求.     

桑树/苜蓿间作对根际土壤酶活性和微生物群落多样性的影响

以桑树(Morus alba)/苜蓿(Medicago sativa)间作系统为研究对象,探讨间作种植模式对根际土壤酶活性及土壤微生物群落功能多样性的影响.结果表明:间作苜蓿的蔗糖酶和过氧化氢酶活性分别比单作苜蓿提高了30.0%和21.4%,达显著差异水平;而间作桑树则相反,分别比单作桑树降低了23.8%和2.6%,达显著差异水平;间作桑树和间作苜蓿的根际土壤酸性磷酸酶活性分别比单作提高了23.0%和28.9%,而脲酶活性则分别降低了52.4%和44.3%,二者差异显著.在桑树/苜蓿间作体系下,间作桑树的表征土壤微生物代谢活性强弱平均颜色变化率、多样性指数、均匀度指数和优势度指数均显著高于单作桑树,而间作苜蓿均低于单作苜蓿,达显著差异水平.主成分分析表明,间作种植模式改变了作物根际土壤微生物群落的主要碳源类型,使苜蓿的主要碳源变为氨基酸、聚合物和其他化合物,与单作之间具有显著差异.表明桑树/苜蓿间作提高了桑树根际土壤微生物群落的多样性,改变了苜蓿根际土壤微生物群落利用主要碳源的类型.     

微生物总DNA的提取

目前,对微生物多样性的研究越来越多地从传统的培养方法转向分子生物学方法,现代分子生物学技术的蓬勃发展解决了不可培养微生物研究的难题,使肠道微生物的研究进入了一个新的发展阶段,而肠道微生物总DNA的提取是整个分子生物学方法的关键.主要总结了前人提取土壤、植物、粪便、瘤胃和肠道微生物DNA的试验方法,介绍了微生物总DNA的纯化方法,为用于分子生物学研究的肠道微生物总DNA的提取提供依据.     

沙拐枣DNA提取方法改进及PCR扩增检测

利用改进的提取沙拐枣Calligonum mongolicumDNA的CTAB方法,从沙拐枣当年鲜根提取总DNA,以琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测,并进行PCR扩增试验。结果显示,所提取的DNA片段大小在20 kb以上,OD260/OD280比值为1.880~1.900,OD260/OD230比值为2.000~2.040,DNA的浓度0.380~0.470μg/mL,DNA纯度较高,可直接用于随机扩增的DNA多态性(RAPD)标记,条带清晰、迁移率低而整齐。     

桑树根的分泌物和根际微生物的研究

为了解不同剪伐方式的桑树根系分泌物对桑树抗病能力的影响,进行了以氨基酸为主的根系分泌物和根际微生物的研究。在桑苗茎叶切除后的根分泌物中,除丙氨酸和苯丙氨酸外,几乎所有氨基酸的含量都增加,这种倾向在切除20d内明显,至40d后差异基本消失。将桑苗地的健全根、衰弱根和患病根根际的细菌、放线菌和真菌进行了定量分析,发现健全根的根际微生物相是细菌型的,但随着根系的衰弱与病变,逐渐由细菌型转向真菌型。分析认为,茎叶切除后根的氨基酸的分泌量增加是由于根毛死亡而释放出来的。根的分泌物有利于真菌孢子的发芽和菌丝的生长发育,促进了病菌对根系的侵入。     

犊牛盲肠微生物总DNA的提取方法

采用反复冻融法、玻璃珠法和超声波+反复珠磨的方法提取犊牛盲肠的微生物总DNA,并对以上三种方法进行比较,从中确定最佳的方法,以实现普通实验条件下成功提取符合PCR扩增要求的DNA.经紫外分光光度分析表明,超声波+反复珠磨的方法所得的DNA的A<,260>/A<,280>的比值为1.81,0.8%琼脂糖凝胶电泳结果显示,所提DNA片段分子量大于20 kb,适于酶解和PCR扩增要求.以提取的DNA样品为模板,利用细菌通用引物,对其16S rDNA进行PCR扩增,获得了1.7 kb大小特异性很好的预期条带.这是研究犊牛盲肠微生物的关键一步.     

柠条根际土壤微生物分布特征及其与土壤养分的关系

对库布齐沙地柠条根际、非根际土壤微生物数量、组成及其与土壤养分的关系进行了研究.结果表明:在0～10cm、10～20cm、20～30cm、30～40cm4个土层中,柠条根际土壤微生物数量均高于非根际和流沙,且细菌＞放线菌＞真菌.柠条各类微生物的根际效应明显,且真菌＞细菌＞放线菌,R/S值介于1.15～16.22之间.根际土壤细菌、放线菌、微生物总数与土壤全氮、有机质、速效磷、速效钾含量之间有显著的相关关系.     

桑树根际硅酸盐细菌的分离鉴定及解钾能力测定

利用选择性培养基,从桑树根际土样中分离获得29个具有解钾能力的细菌分离株,经rep-PCR DNA指纹分析得到24株硅酸盐细菌。通过解钾能力测定,筛选出FK2、FK3、FK8、FK11、FK4′、FK23和PK187个具有较强解钾能力的菌株,其中FK2菌株的解钾能力最强,有效态钾增长41.79%。对这7株具有较强解钾能力的细菌进行菌落形态特征观察及16S rDNA序列测定和同源性分析:FK2菌株为假单胞菌属(Pseudomonas sp.),FK3和FK23菌株为中华根瘤菌属(Sinorhizobium sp.),FK11和FK8菌株为根瘤菌属(Rhizobiumsp.),FK4′菌株为中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium sp.),PK18菌株为屈挠杆菌属(Flexibacter sp.)。     

油蒿根际土壤微生物数量及其与土壤养分的关系

对库布齐沙地油蒿根际、非根际土壤微生物数量及其与土壤养分的关系进行研究,结果表明:微生物三大类群数量均为根际土壤>非根际土壤>流沙,且细菌>放线菌>真菌;微生物根际效应十分明显,细菌>真菌>放线菌,R/S值介于1.14～8.19之间。土壤微生物数量与土壤养分含量之间存在着不同程度的相关关系,影响微生物总数、细菌数量的主要土壤因子是有机质与速效钾,影响真菌数量的主要土壤因子是有机质与含水量,影响放线菌数量的主要土壤因子是全磷和速效钾。     

分支杆菌DNA的不同提取方法在PCR反应中的定性评价

采用已报道过的分支杆菌DNA7种不同提取方法分别对标准BCG菌株和结核病鹿肺样本DNA提取后比较并进行聚合酶链反应(PCR)扩增,通过PCR反应对几种DNA提取方法做出定性评价。结果表明:方法5和7有100%临床样本检测率,方法7所得DNA浓度和纯度最高。说明临床样本分支杆菌DNA提取过程中使用物理和化学方法裂解细胞,使用蛋白酶K和氯仿纯化、异丙醇沉淀DNA是十分必要的。     

SDS-PAGE电泳检测桑种子纯度的蛋白质提取液筛选

为了利用蛋白质凝胶电泳检测桑种子纯度,对采用SDS-PAGE电泳及定量分析的PO4、EX3、ddH2O以及20%和30%2-氯乙醇等4种桑种子蛋白质提取液进行了筛选。结果表明,EX3为适合SDS-PAGE电泳的桑种子蛋白质提取液,其最佳提取用量、点样量分别为60、30μL。     

微波加热快速提取芽孢杆菌与乳酸菌DNA

试验旨在研究快速、简单、高效提取芽孢杆菌与乳酸菌DNA的方法。在微波炉额定功率800 W下,对芽孢杆菌和乳酸菌进行微波处理40~150 s,离心获取上清,收获细菌DNA,将样本DNA PCR扩增后进行琼脂糖凝胶电泳验证,测定其纯度和产量后测序。结果显示,在微波炉功率800 W条件下加热40~150 s均可有效提取芽孢杆菌与乳酸菌DNA。所得DNA质量较好（D_{260 nm}/D_{280 nm}在1.8~2.1之间）。DNA浓度符合PCR检测要求,目的条带清晰,所得测序结果满足常规分子生物学研究。该微波提取方法具有简单、快速、高效的特点,且具有广泛的实用性,为乳酸菌与芽孢杆菌快速分子检测提供了简便手段。     

Rapid Extraction of Bacillus and Lactobacillus DNA by Microwave Heating

The assay was aimed to investigate a fast,simple and efficient method with microwave heating for extracting DNA of Bacillus and Lactobacillus.Treated in a microwave oven at rated power (800 W) for a certain time (40 to 150 s),then centrifuged for supernatant.The supernatant was transferred to a sterile tube for PCR testing and agarose gel electrophoresis.Sequencing was carried out after determining the purity and yield.The results showed that heating for 40 to 150 s at 800 W microwave power conditions could effectively extract DNA of Bacillus and Lactobacillus.The obtained DNA quality was good (D_{260 nm}/D_{280 nm} was 1.8 to 2.1).The DNA concentration in line with the PCR testing requirements;Sequencing results was satisfied with the routine molecular biological research.The microwave extraction method had simple,fast and efficient features,and a wide range of practical,which provided a simple means for rapid molecular assay.