猪不同直径卵泡中卵母细胞体外培养的成熟潜力

比较研究了猪卵巢表面直径０．５～１ｍｍ、１～２ｍｍ、２～６ｍｍ、〉６ｍｍ卵泡中卵母细胞所处的发生泡阶段。结果表明,０．５～１ｍｍ卵泡中卵母细胞主要处于ＧＶ－Ｉ用ＧＶ－Ⅱ期２个阶段,比例分别为６７．２％和２０．６％;而１～２ｍｍ和２～６ｍｍ直径卵泡中,卵母细胞大部分则处于ＧＶ－Ⅱ期,比例分别为９１．９％和８９．６％;〉６ｍｍ直径卵泡中,卵母细胞逐渐发生老化,ＧＶ－Ⅱ期比例仅为５３．２％,一部分处于Ｖ     

卵丘细胞对猪卵母细胞成熟及发育的影响

本实验旨在研究有无卵丘细胞对卵母细胞成熟及其胚胎发育能力的影响。实验分别设裸卵组、卵丘细胞与卵母细胞共培养组、卵丘-卵母细胞复合体(COCs)组(对照组),检测猪成熟卵母细胞的存活率、极体率、孤雌激活后的卵裂率、囊胚率及各组卵母细胞的谷胱甘肽合成相关基因的表达。结果表明:COCs组卵母细胞经体外培养42 h后其存活率最高(95.76%),高于裸卵组(P<0.05)和共培养组(P>0.05);COCs组第一极体排出率为71.77%,高于共培养组和裸卵组(P<0.05);COCs组在后期发育中卵裂率与囊胚率高于共培养组和裸卵组(P<0.05),而共培养组的卵裂率及囊胚率高于裸卵组(P<0.05);与COCs组相比,裸卵组显著下调了GCLM、GCLC的表达(P<0.05),共培养组中GCLM的表达与COCs组无显著差异。研究结果显示,卵丘细胞对卵母细胞的成熟及发育均有显著影响,在卵母细胞成熟过程中,卵母细胞与卵丘细胞的缝隙连接受损会对卵母细胞的成熟效率产生影响,并且在卵母细胞后期发育中,缝隙连接的完整性与否会影响后期发育能力,并可推论出随着卵丘细胞的减少和缝隙连接的破坏,会造成谷胱甘肽合成基因表达降低,从而影响卵母细胞内的谷胱甘肽合成。     

猪卵泡卵母细胞体外成熟研究现状

猪卵泡卵母细胞体外成熟研究现状孟庆刚李光鹏曹允考（东北农业大学动物科学系１５００３０）１引言随着哺乳动物胚胎工程技术的发展,人们对猪卵母细胞体外成熟的研究也取得了很大的进展。关于猪卵母细胞体外成熟的理论和培养技术也日渐成熟。相信随此项技术的发展,人们...     

猪卵泡卵母细胞体外成熟与冷冻保存

研究了激素、猪卵泡液、不同类型血清对猪卵泡卵母细胞体外成熟的影响 ;比较了卵泡直径小于 2 mm、2～ 5 mm和大于 5 mm的卵母细胞体外成熟能力的差异 ,并对不同发育阶段猪卵母细胞的冷冻保存进行了研究。结果表明 :猪卵母细胞体外培养 4 8h时 ,培养的前 2 4 h培养液中加入激素 ,后 2 4 h去掉激素 ,卵母细胞的 A级成熟率 (5 1.73% )和总成熟率 (83.2 5 % )最高 ,极显著高于前 2 4 h不加激素 ,后 2 4 h添加激素培养的成熟率 (P<0 .0 1) ;也显著高于不含激素的培养液连续培养 4 8h的成熟率 (P<0 .0 5 ) ;但与添加激素连续培养 4 8h的成熟率差异不显著 (P>0 .0 5 )。在体外成熟培养液中 ,添加 10 % (体积分数 ) ECS的成熟率 (72 .86 % )显著高于添加 10 % (体积分数 ) NCS的成熟率(6 2 .2 1% ) (P<0 .0 5 ) ,而添加 10 % p FF则抑制卵母细胞的体外成熟。随着卵泡直径的增大 ,卵母细胞体外成熟能力逐渐增强。采用程序冷冻保存方法 ,成熟卵母细胞的成活率 (35 .5 9% )显著高于培养前 (2 4 .6 4 % )和培养 2 4 h(2 3.36 % ) (P<0 .0 5 )。培养 2 4 h(77.2 2 % )和培养成熟 (72 .81% )的卵母细胞解冻后的形态完整率均显著高于培养前(5 3.2 4 % ) (P<0 .0 5 )     

猪小腔卵泡卵母细胞体外成熟研究

本实验通过与2～6mm猪卵泡卵母细胞相对比,研究了猪2mm以下卵泡卵母细胞的体外成熟。结果如下(1)由2mm以下卵泡获得的小(直径100.29±7.9μm)、中(109.36±3.71μm)和大(118.90±2.46μm)3类卵母细胞培养48h的成熟率分别为0、22.31％和45.45％。(2)2mm以下卵泡卵母细胞的成熟率(52.63％)显著低于2～6mm卵泡卵母细胞的成熟率(80.39％)。(3)以含PFF的培养液培养2mm以下卵泡卵母细胞其成熟率(53.54％)显著高于不含PFF的对照组(22.77％)。(4)在培养的前24h加入PMSG、后24h去除PMSG,其成熟率(41.86％)与含PMSG的培养液连续培养48h的成熟率(50.0％)无显著差异,而显著高于前24h不加PMSG,后24h加入PMSG培养的成熟率(5.41％);也显著高于以下不含PMSG的培养液连续培养48h的成熟率(3.3％)。     

卵丘细胞在卵母细胞体外成熟培养过程中的作用

介绍了卵丘细胞在卵母细胞体外成熟培养过程中的作用,主要从卵丘细胞与卵母细胞的结构与功能联系,卵丘扩展对卵母细胞体外成熟的影响及卵丘细胞层数对卵母细胞体外成熟的影响三个方面加以阐述。     

促卵泡素和促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

本实验探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,并最终找到了其合理的使用剂量.实验选取具有3层致密卵丘细胞层及均匀细胞质的猪卵丘-卵母细胞复合物(COCs)在体外进行成熟培养.体外成熟培养液为改良的TCM-199液,根据实验设计再添加不同浓度的FSH和LH.卵母细胞体外成熟培养条件为39 ℃、5%CO2与饱和湿度下,成熟培养48 h.培养结束后,以第1极体排出作为卵母细胞成熟的标准.在成熟液中添加LH浓度分别为1、5、10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(成熟率为15.9%)相比,成熟率有显著提高,前者成熟率分别为49.1%、30.0%、36.3%.LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(P＜0.05);然后以成熟液中只添加浓度为1 IU/mL LH为对照组,实验组添加FSH浓度分别为1、5、10 IU/mL.结果表明,添加FSH浓度为5 IU/mL和10 IU/mL时其成熟率分别为40.1%、27.6%,低于对照组(49.0%).添加FSH浓度为1 IU/mL时其成熟率(49.1%)高于对照组(49.0%),但差异不显著(P＞0.05).试验表明,随着FSH与LH添加浓度逐渐增加,成熟率呈下降趋势.添加FSH与LH浓度均为1 IU/mL可得到最佳的成熟效果.     

影响猪卵母细胞体外成熟的因素

猪卵母细胞体外成熟培养为胚胎体外生产、体细胞克隆等研究领域提供了大量廉价实验材料。本文就影响猪卵母细胞体外成熟的因素及其研究进展作简要综述。     

猪卵巢卵母细胞的收集和体外成熟培养

实验对猪卵母细胞的采集和体外成熟培养(IVM)以及培养液进行研究。结果表明，在卵母细胞的采集过程中，机械破碎法平均每个卵巢所获得的A、B级细胞数(7.00，20.50)要显著多于抽吸法(1.48，2.73)(P＜0.05)。但抽吸法中平均每个卵巢所用的时间(1.05min)却显著少于机械破碎法(15.6min)(P＜0.05)。NCSU-23与TCM-199两种培养液对卵母细胞体外成熟率无显著差异(P＞0.05)。添加10μg／LrpGH比20μg／LrpGH更有利于卵母细胞的成熟(71.5％，45.5％)，两者差异显著(P＜0.05)。     

甘氨酸对猪卵母细胞体外成熟质量及卵丘细胞的影响

本实验旨在研究甘氨酸对卵丘细胞及卵母细胞体外成熟质量的影响,优化猪卵母细胞体外成熟(IVM)培养体系。在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加6 mmol/L甘氨酸,体外培养至44 h后,通过倒置显微镜测量卵丘细胞扩散直径,结合流式细胞术与qPCR检测卵丘细胞凋亡情况;进一步检测成熟卵母细胞中谷胱甘肽(GSH)、细胞成熟促进因子(MPF)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)水平及细胞成熟相关基因表达。结果表明:甘氨酸能显著提高卵丘细胞扩散直径,减少卵丘细胞的总凋亡率,并能显著提高卵丘细胞中Bcl-2的mRNA表达;甘氨酸能显著增加成熟卵母细胞中的GSH、MPF和MAPK水平以及成熟相关基因BMP15、GDF9、CyclinB1、CDK1、C-MOS的mRNA表达。综上可知,甘氨酸可提高猪卵母细胞体外成熟质量,降低卵丘细胞凋亡率。     

猪卵泡卵母细胞的体外成熟与体外受精

本试验对猪卵泡卵母细胞不同体外成熟培养时间、不同精子获能时间、不同精卵共孵育时间对体外受精的影响进行了研究。结果表明,体外成熟培养44 h左右,精子获能时间在1～2 h之间,精卵共孵育时间在6～8 h之间,受精后卵裂率最高。     

不同因素对牛卵母细胞体外成熟培养效果的影响

文章主要从采集方法、性周期阶段以及培养液中FBS浓度3个方面对牛卵母细胞体外成熟的影响进行了分析。结果表明：①不同采卵方法的采卵效果存在差异,但成熟培养和体外受精情况差异不显著（P〉0．05）;②从卵泡期和黄体期卵巢采集到的卵母细胞的体外成熟率和卵裂率分别,为59.7%,56．6％和39．5％、36．6％,没有显著差异（P〉0．05）;③培养液中添加20％FBS组的卵母细胞成熟率和卵裂率显著高于10%FBS和30%FBS组（P〈0．05）.     

牛卵丘细胞对卵母细胞体外成熟与孤雌发育的影响

试验以牛卵泡内卵丘-卵母细胞复合体(COCs)为材料,探讨了牛卵丘细胞包裹程度对卵母细胞体外成熟(IVM)和孤雌胚胎(PAEs)发育的影响。试验1,将COCs随机分为2组,在开展IVM前,将其中一组COCs的卵丘细胞机械吹打去除成为机械裸卵(DOs),研究卵丘细胞层存在与否对卵母细胞体外核成熟(排出第一极体)和孤雌激活后发育能力的影响;试验2,根据COCs卵丘细胞包裹层数将COCs分为3组,即卵丘细胞层少(1～4层)的COCs为A组、卵丘细胞层多(5层以上)的COCs为B组及包裹5层以上卵丘细胞且附带卵泡壁颗粒细胞层(FSP)的COCs为C组,研究卵丘细胞层包裹程度对卵母细胞的体外核成熟和孤雌激活后胚胎发育能力的影响。结果表明:卵丘细胞的存在更有利于卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎发育;COCs中卵丘细胞包裹层数对卵母细胞体外核成熟率没有显著影响,但包裹卵丘细胞层数多且附带FSP的卵母细胞,其PAEs的囊胚率显著高于包裹卵丘细胞少的卵母细胞PAEs。     

海狸鼠卵母细胞体外成熟培养初探

实验用ＰＭＳＧ或ＰＭＳＧ＋ＨＣＧ处理或未经激素处理的海狸鼠８只，共获卵巢卵母细胞１３８枚。激素处理对获取卵巢卵母细胞的数量没有影响，而对体外成熟发育至卵丘扩展和半成熟阶段有促进作用。三种不同培养液（Ｗｈｉｔｅｎ＋ＦＣＳ；ＴＣＭ１９９＋ＰＭＳＧ＋ＦＣＳ；ＴＣＭ１９９＋ＨＣＧ＋ＦＣＳ）共培养１２５枚卵母细胞，培养后卵丘扩展率及半成熟率分别为５６．５％，４５．７％，４７．６％和２１．７％，１２．３％，９．５％，以Ｗｈｉｔｅｎ液较高（分别为５６．５％和２１．７％），但只有ＴＣＭ１９９＋ＰＭＳＧ＋ＦＣＳ组有２枚卵母细胞出现第一极体。结果表明海狸鼠卵母细胞与其它啮齿动物的卵母细胞一样，能够在体外培养成熟，完成第一次减数分裂，排出第一极体     

卵丘细胞对卵母细胞成熟、受精和胚胎发育的影响试验

将从猪卵巢上获取的卵母细胞根据卵丘细胞层数的多少分为两类,并将这两类卵母细胞进行成熟培养、体外受精和孤雌激活,以验证两类卵母细胞的发育潜能.结果显示,将两类卵母细胞分别进行成熟培养时,优级卵的成熟率高于次级卵（67.42±177;1.52％vs 48.33±177;2.85％）,且差异极显著（P＜0.01）;将成熟的卵母细胞进行孤雌激活后,优级卵的囊胚率高于次级卵（58.00±177;2.88％ vs 41.00±177;6.40％）,且差异极显著（P＜0.01）,但囊胚总细胞教两者无显著差异（P＞0.05）;将成熟的卵母细胞进行体外受精后,优级卵的囊胚率、囊胚总细胞数均高于次级卵（18.00土5.70％ vs 4.25±177;2.31％,41.7±177;3.33 vs 36.2土2.10）,且差异极显著（P＜0.01）;进行受精卵孵育时,未去除卵丘细胞的胚胎卵裂率、囊胚率、囊胚总细胞数均高于去除卵丘细胞的（88.14土7.48％ vs 58.69±177;2.89％,51.2±177;7.33％ vs 11.92±177;2.29％,41.7±177;3.33 vs 36.8±177;3.15）,且差异极显著（P＜0.01）.以上结果说明：卵丘细胞层数较多的卵母细胞成熟率高,且其孤雌和体外受精胚胎的发育潜能也好;卵丘细胞存在时,有助于卵母细胞的受精及以后的胚胎发育.     

绵羊卵丘细胞对裸卵体外成熟及孤雌发育影响的研究

本研究探讨绵羊卵丘细胞对裸卵体外成熟和后期发育的影响。实验分为4组,对照组为卵丘-卵母细胞复合体(COCs);裸卵(DO)组;COCs与DO共培养组(CODO);卵丘细胞(CC)与DO共培养组(CCDO)。体外成熟培养18 h后,检测各组卵子成熟质量并进行孤雌发育研究。结果表明:CODO和CCDO组中裸卵活率显著高于DO组(P<0.05),但显著低于COCs组(P<0.05),且COCs组中卵子活率极显著高于DO组(P<0.01);在极体排出率方面,CODO、CCDO和DO3组差异不显著(P>0.05),但是它们都显著低于COCs组(P<0.05)。COCs、CODO、CCDO和DO 4组卵裂率差异均不显著(P>0.05)。然而,DO组的囊胚率显著低于CODO和CCDO组(P<0.05),极显著低于COCs组(P<0.01),但CODO和CCDO 2组中裸卵的囊胚率差异不显著(P>0.05)。总之,无论散在的卵丘细胞还是COCs均能提高裸卵体外成熟及后期发育潜力。     

生殖激素对哺乳动物卵母细胞体外成熟的影响

生殖激素是卵母细胞成熟培养液中必不可少的成分,它对卵母细胞的完全成熟至关重要。本文综述了其化学特性和对卵母细胞成 熟培养的影响,并对其作用机理进行了简单阐述。     

换液培养对猪卵母细胞的成熟及胚胎体外发育的影响

通过后期去除激素培养比较了卵丘卵母细胞成熟及构建克隆胚后的发育情况,同时孤雌胚胎和体外受精胚胎体外培养48 h后全量换液,比较了其卵裂率和囊胚率之间的差异。结果显示,卵丘卵母细胞培养22h后换成不含激素的成熟培养液继续培养至44 h,其成熟率与对照组无显著差异(P0.05);后期克隆胚胎卵裂率和囊胚率与对照组均无显著差异(P0.05)。孤雌胚胎换液培养卵裂率高于未换液组,囊胚率低于未换液组,但差异均不显著(P0.05)。体外受精胚胎换液培养卵裂率以及囊胚率和未换液组差异不显著(P0.05)。本实验结果说明换液培养对卵母细胞的成熟及后续的体细胞克隆胚发育无显著影响,孤雌和体外受精胚胎换液培养对后期发育也无显著影响。     

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

本试验探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,最终找到了其合理的使用剂量。在成熟液中添加LH浓度分别为1、5、10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(15.9%)相比,成熟率有显著提高,成熟率分别为49.1%、30.0%、36.3%。LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(p<0.05);然后以成熟液中只添加1 IU/mLLH为对照组,试验组分别添加1、5、10 IU/mLFSH。试验结果表明:添加FSH浓度为5和10 IU/ml时其成熟率分别为40.1%、27.6%,低于对照组(49.0%)。添加FSH浓度为1 IU/mL时其成熟率(49.1%)高于对照组(49.0%),但差异不显著(p>0.05)。两组试验同时得出,随着LH与FSH添加浓度的增加,成熟率呈下降趋势。通过本试验结果得出,在体外成熟培养猪卵母细胞时,各添加1 IU/mL LH与FSH时,得到最佳的成熟效果。     

山羊卵母细胞体成熟培养条件的研究

从山羊屠宰场收取卵母细胞,置于39％、5％CO2的培养箱中,作24小时体外成熟培养。在含10％犊牛血清(FCS)的成熟培养液里分别添加0％、20％~N卵泡液,试验结果表明,成熟卵母细胞率分别为54．5％、66．7％,差异不显著。在成熟培养液里添加不同血清,即10％犊牛血清(FCS)和羊血清(NGS),试验结果表明,成熟卵母细胞率分别为54．5％、65.4％,差异不显著。