“猪Ⅱ型圆环病毒”专栏三：与PCV2有关的血清学试验重要性

鉴于由PCV2引起感染的高流行性,以及它可出现在健康和患病的猪中,针对这种病原体的血清学试验作为疾病的诊断性试验已受到质疑。众所周知,圆环病毒的诊断必须以Sorden标准为依据。     

PCV2基因构成的重要性和监控

在养猪生产的各个阶段中,猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus Type 2,PCV2)与多种临床疾病的表现有关,这些表现通常称为PCV相关疾病(PCV-associated diseases,PCVAD).与PCV2感染相关的临床症状包括衰竭、体重损失、腹泻、呼吸道疾病(打喷嚏、流涕、呼吸频率加快)、黄疸、贫血、皮肤损伤.接种疫苗是一种用来减轻或预防由PCV2感染引发经济损失的手段.     

PCV2a/2b灭活疫苗与PCV2b亚单位疫苗免疫效力比较试验

比较猪圆环病毒(PCV)2a、PCV2b基因型全病毒灭活疫苗和PCV2b亚单位疫苗对PCV2b基因型强毒株免疫攻毒保护效力。取3种类型PCV2疫苗,分2次免疫PCV2抗原和特异性抗体阴性的BALB/c小鼠和14日龄仔猪,间隔21d,分别于免疫后14、21和35 d进行PCV2特异性ELISA抗体测定。使用临床分离鉴定的PCV2b基因型强毒株进行攻毒,通过攻毒前后临床观察、体温变化、平均相对日增重及PCV2核酸载量检测等对疫苗免疫效果进行评价。结果:不同类型PCV2疫苗免疫BALB/c小鼠后14 d能检测到PCV2特异性抗体,在35 d时抗体水平持续升高,其中PCV2b亚单位疫苗产生抗体水平高于全病毒灭活疫苗;不同类型疫苗均能刺激仔猪产生较好的免疫应答,其中PCV2b亚单位疫苗刺激机体免疫应答强于灭活疫苗;仔猪免疫攻毒试验表明,3种类型疫苗均可刺激机体产生抵御PCV2强毒攻击的特异性免疫应答,免疫组体温变化、相对日增重及PCV2核酸载量检测均与攻毒对照组间存在显著性差异,3种类型疫苗之间差异不显著。试验表明:3种类型PCV2疫苗免疫小鼠和仔猪后均能诱导产生抵御PCV2b基因型强毒攻击的特异性免疫应答反应,有效抵抗PCV2感染和提高猪的生长性能。     

PRRSV与PCV2混合感染的临床检测试验

沈阳地区某猪场出现了母猪流产、仔猪腹泻、呼吸困难等症状.根据其临床症状、剖栓变化、RT-PCR及PCR等检测,确诊该场此次发病为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪2型圆环病毒(PCV2)的混合感染.     

PCV2d的出现给商品化PCV2疫苗(PCV2a和PCV2b)带来的新挑战

<正>近几年证实了业内PCV2b向2d的基因型变化,并且PCV2d成了主要流行基因型,甚至在临床PCV2阳性样本中占比高达73%。那么,目前的商品化疫苗集中在PCV2b和2a两个基因型,是否对PCV2d有很好的交叉保护?PCV2(猪圆环病毒2型Porcine circoviruse type 2,PCV2)在养猪业的感染已普遍存在,给养殖场造成     

SI与APP、PRRS、PCV－2和Mhyo交叉感染的血清学调查

对甘肃省健康规模猪场和发病（非流感）规模猪场进行H1N1和H3N2猪流感（SI）感染抗体检测,健康规模猪场H1N1SI和H3N2SI混合感染抗体阳性率为25．45％（28／110）;发病（非流感）规模猪场H1N1SI和H3N2SI混合感染抗体阳性率为25．97％（20／77）。对两个规模猪场1、6、7和10月份的抗体检测结果,平均抗体阳性率分别为21．27％、56．14％、75％和15．62％。H1N1和／或H3N2SI阳性猪场猪传染性胸膜肺炎（APP）、猪繁殖与呼吸综合征（PARS）、猪圆环病毒病（PCV-2）和猪支原体肺炎（Mhyo）感染抗体平均阳性率依次分别为50．79％、40．32％、43．82％和33．33％;猪传染性胸膜肺炎（APP）免疫抗体平均保护率为49．5％,猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）、猪圆环病毒病（PCV-2）和猪支原体肺炎（Mhyo）免疫抗体阳性率依次分别为56．52％、47．92％和38．04％。     

PCV2a和PCV2b感染性克隆的体外拯救

 研究旨在获得PCV2a和PCV2b的拯救毒株。对筛选得到的PCV2a和PCV2b感染性克隆分别进行酶切,使酶切得到的全长基因组DNA自身环化并分别转染PK15细胞。经IFA和PCR验证,确认成功拯救出两亚型PCV2病毒。病毒传至第9代时对PCV2a和PCV2b的毒价分别进行测定,结果显示PCV2a的毒价为103.5TCID50/mL, PCV2b的毒价为104.6TCID50/mL。本试验为分型特异性序列与病毒致病力相关性的研究打下了基础.     

有无PMWS病史比利时猪场中与PCV2有关消瘦的流行

本研究在3个有断奶后多系统消耗综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）病史的比利时猪场和4个无疑似PMWS对照猪场中确定了PMWS感染猪的流行情况。PMWS的诊断基于完成如下4个准则：呈现消瘦；PMWS的肉眼和组织病理学病变：在淋巴器官内有多量猪圆环病毒2型（Porcine circovirus 2，PCV2）。在有PMWS病史的猪场中，观察期间有2％仔猪死于PMWS。在对照猪场中，0．1％的仔猪感染PMWS。     

PCV2a与PCV2b鉴别诊断PCR方法的优化及应用

猪圆环病毒2型（Porcinecircovirustype2,PCV2）是严重危害养猪业的重要病原之一,根据基因组大小可分为2个基因型：PCV2a和PCV2b。为更好地掌握PCV2a和PCV2b在我国猪场的流行情况,本研究对先前的鉴别PCR诊断方法（涉及到引物、PCR体系及程序）进行优化,并应用优化的鉴3qPCR方法对1184份PCV2阳性样品进行检测,结果显示PCV2a占30．5％（36／118）,PCV2b占37．3％（44／118）,共感染占32．2％（38／118）,与常规PCR检测结果符合率为100％,此外,对30份,瞄床送检组织和血清样品也有很高的检出率。部分鉴别PCR扩增的目的产物进行测序及序列进化树分析,表明扩增序列为PCV2a与PCV2b的特征序列。经本研究优化后的鉴别PCR方法易操作、特异性强、敏感性好,可广泛用于临床样品中PCV2a和PCV2b的快速检测。     

陕西7个地区猪2型圆环病毒(PCV2)感染的血清学调查

为明确陕西省PCV 2感染的发生情况,以便控制PMW S的流行,本试验用间接EL ISA方法对陕西省7个不同地区多个猪场不同日龄的猪群进行了PCV 2感染的血清学调查。报告如下。1材料与方法1.1材料被检血清样品共476份,采自陕西省榆林、宝鸡、西安、渭南、汉中、商洛、安康等7个不同地区     

猪圆环病毒病和猪繁殖与呼吸综合征二联灭活疫苗免疫效力

利用猪圆环病毒病(PCVD)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)二联灭活疫苗免疫4周龄仔猪,免疫后7、14、21、28d采血,测定免疫后血清中抗PRRSV、PCV中和抗体和ELISA抗体较价,并于免疫后28d分别用PRRSV和PCV2攻毒,攻毒后每日检测猪体温和观察临床症状,于攻毒后21d所有存活猪全部扑杀,分别对每头猪肺、肝、脾、淋巴结、心和血进行剖解病理和组织病理学观察及PRRSV和PCV2核酸检测,以确定该疫苗免疫保护率。结果表明,所有试验猪于免疫后7d血清抗体开始检出,28d达到峰值,免疫后28dPRRSV和PCV2攻毒保护率均为100%(5/5)。     

Effect of porcine circovirus type 2 (PCV2) vaccination on PCV2-viremic piglets after experimental PCV2 challenge

The objective of this study was to evaluate the effect of porcine circovirus type 2 (PCV2) vaccines on PCV2-viremic and -seropositive piglets born from naturally PCV2-infected sows against postnatal PCV2 challenge. The experimental design was aimed at mimicking commercial swine rearing conditions to evaluate the response of the PCV2 vaccine on PCV2-viremic and -seropositive piglets after experimental PCV2 challenge. PCV2a (or 2b)-viremic piglets received a PCV2 vaccine at 21 days of age followed by a PCV2b (or 2a) challenge at 49 days of age (28 days post vaccination). The PCV2 vaccines elicited a high level of humoral (as measured by immunoperoxidase monolayer assay and neutralizing antibody titers) and cellular (as measured by the frequency of PCV2-specific interferon-γ-secreting cells) immune response in the PCV2-viremic piglets after vaccination even in the presence of maternally derived antibodies (MDA). The initial infection of PCV2 in the pigs was not affected by PCV2 vaccination, however the challenging PCV2 was reduced by PCV2 vaccination on PCV2-viremic pigs. The results from this study demonstrate that the PCV2 vaccine used in this study is effective at reducing PCV2 viremia and lymphoid PCV2 DNA, even for PCV2-viremic pigs with passively acquired MDA at the time of vaccination.     

Investigation of aberrant positive reactions to serological tests for bovine brucellosis

Fifty cattle thought not to be infected with Brucella abortus but giving persistent positive serological reactions, were investigated. It was concluded that only one of these was infected since exhaustive bacteriological examination produced only one isolate of B. abortus (strain 19) and none of the herds of origin was subsequently shown to be infected with brucellosis. Antibody was detected in stifle joint fluid of 15 cattle, which may have been stimulated by the presence of Strain 19 antigen that persisted in collagenous tissue long after the viable organisms had been eliminated.     

猪圆环病毒3型与猪圆环病毒2型二重PCR检测方法的建立

为建立同时检测PCV3和PCV2的二重PCR方法,分别以PCV3和PCV2基因组的保守区域设计2对特异性引物,片段大小分别为649,295 bp。将反应条件进行优化,构建PCV3和PCV2的二重PCR检测方法。检测结果表明该方法能特异性扩增PCV3和PCV2,且无法扩增其他猪常见病毒;PCV3和PCV2的最低检出限分别为508,412 copies/μL。临床样品检测结果显示,PCV3和PCV2阳性率分别为2.1%(3/145),62.1%(90/145),PCR产物经测序证实为PCV3。本研究建立的二重PCR方法具有速度快、特异性强和灵敏度等优点,可以用于PCV3和PCV2的检测和流行病学调查。     

猪圆环病毒2型衣壳蛋白Loops结构及病毒样颗粒制备的研究进展

病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是某种病毒的1种或几种结构蛋白在体外组装而成,由于VLPs不包含病毒基因组,在宿主细胞中不能自我复制,因此VLPs在亚单位疫苗应用中具有较高的生物安全性。自猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)在世界范围内流行以来,已经给全球养猪业带来巨大经济损失,因此PCV2的致病机理和疫苗研究具有重要现实意义。PCV2Cap蛋白(capsid protein)是病毒唯一的衣壳蛋白,也是主要的免疫原性蛋白,60个Cap蛋白亚基在体外能自行组装成PCV2VLPs,该VLPs因与天然病毒粒子形态相似并保留了病毒完整的构象表位,已经在PCV2组装和侵染机理研究、亚单位疫苗的研发及其相关性系统疾病(PCV2-systemic disease,PCV2-SD)的预防研究中得到广泛应用。本文主要对PCV2Cap蛋白的Loops结构及其VLPs的制备研究进展进行阐述,为PCV2侵染机理与亚单位疫苗的研发等提供参考。     

Detection of porcine Circovirus type 2 (PCV2) variants PCV2-1 and PCV2-2 in Brazilian pig population

In the present study whole genome of six Brazilian isolates of PCV2 were sequenced, analyzed and compared with 35 other sequences (24 from other countries and 17 from Brazil). The phylogenetic analysis showed that mostly Brazilian variants of PCV2 were grouped as PCV2-1. Two isolates among the six analyzed here could not be grouped with any other PCV2-2 analyzed in this study. One of these isolates was from an aborted fetus with myocarditis and the other from a PMWS affected pig. The results pointed here showed that both groups of PCV2 are present in Brazilian pig population without any clear geographical correlation.