西葫芦细菌性茎基软腐病病原的分离与鉴定

[目的]为分离鉴定山西温室蔬菜西葫芦根茎部软腐病害。[方法]对分离物进行致病性测定、形态学观察、生理生化特性测定及16SrDNA系列分析。[结果]结果表明,40个菌株经人工接种后,CY39导致西葫芦茎基部软腐,经柯赫氏法则验证为致病病原。在电镜下菌体呈短杆状,两端钝圆,具鞭毛,革兰氏阴性。CY39菌株通过测序和序列比对分析,其与胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜软腐亚种(Pectobacterium carotovorum subsp.carotovorum)AB680280报告的序列相似度为100%。[结论]西葫芦茎基软腐病原菌应归属于胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜软腐亚种。     

胡萝卜软腐果胶杆菌clpP基因的功能研究

为探索clpP基因对胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacterium carotovorum subsp.carotovorum,P.c.c)生物学特性及致病性等方面的影响,采用同源重组法构建clpP基因缺失突变体ΔclpP和互补菌株ΔclpP(clpP),测定突变体及互补菌株的运动性、生物膜、抗氧化压力,以及在不同培养基和不同温度下的生长能力、部分致病因子活性及致病性等表型,并采用RT-PCR分析了果胶酸裂解酶(Pel)、纤维素酶(Cel)、蛋白酶(Prt)和坏死诱导蛋白(necrosis-inducing protein,Nip)等相关致病因子的编码基因转录水平变化。结果表明:ΔclpP的运动性无变化,生物膜形成、高温和营养饥渴耐受力及抗氧化压力等均下降;果胶酶、纤维素酶与蛋白酶活性有不同程度降低,酶活性检测平板上水解圈的直径分别比野生株下降19.35%、34.38%和35.00%;ΔclpP的致病性显著下降,离体接种‘黄花马蹄莲’叶片和大白菜叶柄,病斑面积分别比野生株的减小99.00%和99.60%;在4个毒力因子中,qRT-PCR显示:ΔclpP果胶酸裂解酶与纤维素酶mRNA相对表达量为野生菌株的40.00%左右。由此可见,clpP基因对胡萝卜软腐果胶杆菌的生长和致病性具有多方面的决定作用。     

山东马铃薯细菌病害研究

从山东省8个地区18个县市调查和采集766份马铃薯植株样本中,检出带病样本736份,分离到青枯假单孢菌菌株741个,环腐菌菌株269个,软腐欧氏杆菌菌株53个。青枯假单胞杆菌和环腐菌复合侵染同一植株。对34个青枯假单胞杆菌研究表明,它们分别属于生物型Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ以及另一新类型,在血清学上有差异。两个环腐菌菌株在MR试验和血清学上亦有差异,分别属于不同的菌系。8个软腐欧氏杆菌菌株经生化测定分别属于胡萝卜软腐欧氏杆菌黑胫变种和胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜变种。     

绿萝叶腐病病原菌16S rDNA序列的克隆与分析

为绿萝叶腐病病原菌菌株LR12的分子鉴定和应用研究提供参考,利用PCR法克隆其16S序列,并借助生物信息学方法进行分析,明确其16S rDNA序列特征。结果表明:以YFUP/YFDN为PCR引物,扩增到大小约为1 700bp的条带;LR12的16S rDNA全长为1 551bp,GC为53.9%;LR12与胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种的16S rDNA相似性最高,达100%,与巴西亚种的相似性次之,为99.9%,两者存在2个碱基的差异;15种细菌在发育树上可分为5组,其中LR12与胡萝卜软腐果胶杆菌巴西亚种的关系最近,处于同一分支,支持率达100%,并与其他2种果胶杆菌属细菌聚在同一组。     

拮抗胡萝卜软腐欧文氏杆菌的放线菌的分离和筛选

采用平板稀释法进行了土壤中放线菌的分离,以胡萝卜软腐欧文氏杆菌(Erwinia carotovora var. carotovora)为拮抗对象,筛选拮抗放线菌。根据抑菌圈的大小,初步筛选出F10、F4、F5、F11等有较强的拮抗作用的12株放线菌。分别对这12个菌株进行发酵,根据发酵液和菌丝破碎稀释液的拮抗活性复筛。复筛结果表明,12个菌株中,发酵液的拮抗活性F11最强,F1、F9次之;菌丝体破碎稀释液的拮抗活性F12最强,F3、F11、F1、F10次之。不同菌株产生的拮抗物质在细胞内外的分布不同。     

荆州魔芋软腐病及其病原菌初步研究

荆州魔芋软腐病发生始期在6月上旬，随后发病速度加快，7月中下旬至8月中下旬为盛发期，9月上旬终止，病株死亡率达68．82％。经鉴定病原菌为胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜致病变种(Erwinia carotowra pv.carotovara)，该菌10～40℃内均能生长，适温范围20～35℃。     

胡萝卜软腐欧文氏菌分子检测技术的研究

胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜亚种Erwinia carotovora subsp.carotovora(Ecc)是引起魔芋和马蹄莲软腐病的主要病原细菌.本研究根据细菌L-氨基酸渗透酶同源基因设计URP核苷酸序列特异性引物进行普通PCR、巢式PCR,同时采用细菌16S-23S rI)NA间的ITS序列设计引物及TaqMan探针进行实时荧光PCR,对样品中存在的胡萝卜软腐欧文氏菌进行检测,并比较了3种检测方法的特异性和灵敏度.结果表明,应用实时荧光PCR方法检测样品,其中存在的胡萝卜软腐欧文氏菌的最低菌悬液浓度可达10 cfu/mL;巢式PCR灵敏度也可检测到10 cfu/mL;而用普通PCR最低可检测到103 cfu/mL.用实时荧光PCR和巢式PCR方法榆测病菌,其灵敏度都比常规PCR提高了100倍,且实时荧光PCR方法更快速、简便、安全、准确,不需PCR的后续处理.实时荧光PCR方法适用于种苗、种球等检测领域.     

人参细菌性软腐病组织解剖研究

用人参软腐细菌「胡萝卜欧文氏菌胡萝卜软腐变种（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｐｖ。ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ Ｄｙｅ）」接种参根后在２４－２５℃下培养２－１４ｈ，电镜扫描结果表明，接种参根２ｈ，病原细菌在参根表皮细胞定位，随着接种时间的延长，病原细菌向参根组织内部扩展并繁殖，接种６ｄ后可在参根各部位的组织中观察到大量的细菌。     

两种天南星内生细菌抗魔芋软腐病菌株筛选

魔芋软腐病严重影响着魔芋的生产,利用内生细菌来抑制魔芋软腐病菌有很多优点。选择23株从药用植物一把伞南星、异叶天南星中分离得到的内生细菌,用牛津杯法皿内测试内生细菌对魔芋软腐病菌的拮抗作用,以筛选拮抗软腐病菌能力强的菌株。研究结果表明,23株供试内生细菌对魔芋软腐病菌均有不同程度的拮抗活性,8株抑菌效果非常显著,YC06和YC09两株内生细菌抑菌能力极强,其发酵产物对魔芋软腐菌也有极强的抑菌能力。     

白菜软腐病的防治

白菜软腐病是一种细菌性病害，由细菌软腐欧氏杆菌侵染所致，除危害所有十字花科蔬菜外，还危害胡萝卜、芹菜、番茄、马铃薯、辣椒、洋葱、黄瓜等蔬菜。夏季高温多雨利于发生，发生严重时可造成白菜绝收。     

君子兰细菌性软腐病病原细菌的研究

31株君子兰软腐细菌的鉴定结果,其中7株为菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi Burkholder et al.简称Ech),其表型性状与玉米致病变种(pv.zeae)相似;另外14株为胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜致病变种(Erwinia carotovora pv.carotouora Dye简称Ecc)。血清学研究表明,君子兰上的E.chrysanthem与典型的pv.zeae不起反应。人工接种试验也表明君子兰上的E.chrysatnhem与典型的pv.zeae的致病性有明显差异。     

生防菌06-4对魔芋软腐病的防治及机理的初步研究

从拮抗作用、定殖特性、营养竞争方面研究溶杆菌属(Lysobacter)生防菌06-4对魔芋软腐病的生防机理.结果表明:生防菌06-4对不同致病力魔芋软腐病菌可产生拈抗作用;能在魔芋根部、根际土等生态位点定殖,定殖的量维持在102～104 cfu/g,定殖时间长达32 d,表现出良好的环境适应性和稳定性;与魔芋软腐病原菌...     

彩色马蹄莲细菌性软腐病菌的鉴定及其群体感应淬灭的研究

近几年南京种植的彩色马蹄莲软腐病发生严重,从不同品种的彩色马蹄莲不同部位病组织中分离到6个菌株,经形态特征与培养性状比较、生理生化测试、16S rDNA序列分析和致病性测定,鉴定为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacterium carotovora subsp.carotovora,P.c.c).信号分子检测结果表明,分离菌株可产生并释放出N-酰基-高丝氨酸内酯(AHLs)类信号分子.利用PCR技术扩增土壤根癌农杆菌中的attM基因,其编码的AttM解酯酶可以显著降解AHLs,在离体条件下可有效地减弱该病原菌的致病性,这为有效控制彩色马蹄莲细菌性软腐病提供了一种新途径.     

吉林省人参细菌性软腐病的症状和病原

近年来，人参细菌性软腐病在吉林省各主要参场均有发生，平均发病率为２％－５％，严重可达１０％以上，本文通过对省内几个主要参场的软腐病参根和经大气诱发产生软腐症状的参根进行分离所获得的菌株，根据１９７３年伯杰《细胞学分类鉴定手册》第８版的分类和美国植物病理学会１９８０年出版的植物病原细菌实验指导，进行了致病性测定，电子显微镜形态观察和生理生化测定等试验。     

在苏云金芽胞杆菌中高效和稳定表达AiiA蛋白

 【目的】摸索提高AiiA蛋白对AHLs分子的降解活性和对胡萝卜软腐欧文氏菌感染马铃薯产生病害的抑制能力的方法。【方法】苏云金芽胞杆菌的AiiA蛋白是一种胞内蛋白，能降解参与诱导调控多种植物病原菌致病基因表达的N-乙酰高丝氨酸内酯信号分子。本文采用两种方式来提高AiiA蛋白的活性，即利用苏云金芽胞杆菌S-层蛋白在细胞表面表达该蛋白以及利用苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry3Aa启动子来提高aiiA基因的表达量。为此构建该蛋白基因与细胞表面S-层蛋白的锚定区结合而成的融合蛋白基因slh-aiiA以及带有基因cry3Aa启动子的融合基因pro3A-aiiA。为了提高表达的稳定性以及去掉重组菌中非苏云金芽胞杆菌片段，本文构建了解离载体pBMB5401，并将上述两个融合基因单独或同时装入解离载体pBMB5401，分别得到重组质粒pBMBcaiiA，pBMB3aiiA和pBMB3439。转化苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171，随后导入温度敏感型辅助质粒pEG922，重组质粒在整合酶的作用下发生体内重组，消除了抗性基因等非必需片段。【结果】得到3个重组菌BMBcaiiAR，BMB3aiiAR和BMB3439R，在无抗性选择压力下的稳定性均在90%以上。融合蛋白SLH-AiiA及pro3A-AiiA在解离后的重组菌中得到表达，具有对AHLs分子的降解活性和对胡萝卜软腐欧文氏菌感染马铃薯产生病害的抑制能力。【结论】在苏云金芽胞杆菌中高效和稳定表达AiiA蛋白,可增强其对AHLs分子的降解活性和对胡萝卜软腐欧文氏菌感染马铃薯产生病害的抑制能力，当同时结合两种方式来表达AiiA蛋白时效果最好。     

云南马铃薯细菌性软腐病原菌的分离鉴定

 从云南省马铃薯产区取样,用厌气技术分离纯化了42个软腐欧文氏杆菌菌株。根据品种差异代表性地选出20个菌株进行主要细菌学性状鉴定,并在此基础上进行分类。结果表明:13个菌株（占65%）是Erwinia carotovora var. carotovora,3个菌株（15%）是Erwinia chrysanthemi,其它4个菌株根据其生理生化特性划归为中间型,介于Erwinia carotovora var. carotovora和Erwinia chrysanthemi之间。     

魔芋软腐病研究

鹿芋软腐病由胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜致病变种(Erwinia carotovora pv.carotovora)引起,病菌通过伤口侵入寄主各个部位并导致组织腐烂解体,甚至整株死亡。经人工接种试验,本病菌能危害大约13科21种植物。染病种芋与带菌土壤是病害初侵染来源。据初步测定,50%代森铵600倍液。30%DT胶悬剂500倍液,1%波尔多液及200ppm的链霉素或氯霉素等在发病初期使用能有效地控制病情发展。此外,本文还对病菌侵染温度,不同魔芋种和品种对病菌的抗感反应等进行了试验。     

魔芋软腐病致病机理及其生物防治

[目的]报道国内外学者关于魔芋软腐病生物防治的研究成果。[方法]通过近几年国内外文献调研,综述国内外学者在致病机理和生物防治方面的研究进展,并就今后魔芋软腐病防治提出几点设想。[结果]在对软腐欧文氏菌病原菌致病机理的深入研究中,明确了软腐欧文氏菌的群体调节系统,即细菌可根据特定信号分子浓度监测周围环境中自身或其他细菌的数量变化,能启动菌体中相关基因的表达来适应环境中的变化;明确欧文氏菌有一系列分泌系统,系统Ⅰ将蛋白酶从细胞质分泌到胞外空间一步完成,系统Ⅱ可分2步分泌果胶酶和纤维素酶,在致病中起重要作用;果胶酶是致病过程中最重要的酶。近年来生物防治魔芋软腐病初见成效,主要是利用生防细菌、生防真菌和植物活性物质以及利用植物基因工程防治魔芋软腐病。[结论]该研究为软腐病的有效防治提供了新的思路和手段。     

马铃薯品种对细菌软腐病抗性生理指标的研究——Ⅱ.品种还原糖含量及其与软腐病抗性的关系

多方面研究马铃薯块茎的还原糖含量及其与软腐病抗性之间的关系。结果表明,表皮组织的还原糖含量与其对皮孔侵染的抗性无关,而薯肉组织的情况比较复杂。品种之间相互比较时,两者没有相关性;但对一定的品种,经低温贮藏,不同温度处理及厌气处理后组织的还原糖含量发生改变,其感病性的变化与还原糖含量变化之间有正相关性。     

氮硫养分平衡对大白菜营养品质和抗病性影响的研究

研究了十字花科作物白菜施用硫肥对合硫必需氨基酸蛋氨酸和脱氨酸含量、硝酸根含量以及抗病性方面的影响。合理施用硫肥可以提高白菜体内胱氨酸和蛋氨酸的含量,同时降低有害物质ＮＯ３在组织内的积累,从而提高白菜的营养品质。适量施用硫肥减少氮肥用量可以大大改善白菜对霜霉病的抗病效果;;在低氮水平时还可以对病毒病和软腐病有一定的防治作用,但在高供氮水平时施用硫肥的抗病效果不明显。