观赏羽衣甘蓝高频再生体系的建立

观赏羽衣甘蓝是一种赏食兼用的耐冻优良景观植物。为了通过基因工程手段赋予其抗虫性,并进一步提高其低温耐受性,获得新的抗性种质,本研究以优良育种品系为试材,详细探讨了影响离体培养不定芽再生的因素,建立了高效再生体系。以8份不同类型羽衣甘蓝基因型的带柄子叶、子叶、下胚轴为外植体,研究了不同基因型、不同外植体、不同的培养基激素浓度配比及添加AgNO3对不定芽诱导的影响。结果表明:无论基因型及使用的培养基,带柄子叶均为最佳外植体;不同的基因型、不同外植体其最佳的芽诱导培养基不同;筛选出两份材料,其带柄子叶分别在L6(MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L)及L3(MS+6-BA1.5mg/L)培养基中不定芽诱导率为100%,下胚轴诱导率最高也能达88.33%;培养基中添加4mg/L AgNO3不利于羽衣甘蓝的不定芽诱导;再生株生根以MS+NAA0.1mg/L效果好,生根率可达100%。     

菊苣高效不定芽直接发生及其植株再生

本研究以菊苣无菌苗叶片为外植体,建立了高效不定芽直接发生及其植株再生体系。在附加不同浓度N-6-benzyladenine(6-BA)或与低浓度α-naphthaleneacetic acid(NAA)组合的MS培养基上,5~7d外植体表面不经过愈伤组织诱导阶段,直接形成不定芽。组织学观察表明,不定芽起源于叶片维管束薄壁细胞,且其微管组织系统与叶片外植体内微管组织系统紧密相连。6-BA是不定芽直接发生所必需的,外植体的发育时期、取材部位和培养基蔗糖浓度对不定芽直接发生有重要影响。在附加2.0mg/L 6-BA,0.5mg/L NAA,100mg/L Vc,100mg/L VB1,300mg/L脯氨酸和40g/L蔗糖的MS培养基上,培养20d龄基部叶片15d时,不定芽直接发生频率最高为100%,每块外植体上产生的不定芽数量也最多,平均为36~38个。在1/2 MS+IBA 0.5mg/L培养基上,再生苗诱导生根频率为97.58%,再生植株移栽于盆土中,100%存活且生长良好,未见形态异常。     

朝天罐的离体培养与植株再生

以朝天罐（Osbeckia opipara）的茎段为外植体进行离体培养植株再生研究,结果表明：茎段在适宜的培养基上可形成愈伤组织,并分化成再生植株。培养基MS + 6-BA 2 mg/L  + NAA 0.2 mg/L + 蔗糖30 mg/L+ 琼脂7 mg/L,既适合于愈伤组织的诱导,也适合于愈伤组织的增殖和分化,诱导率为83.3％;丛生芽增殖的最佳培养基为MS + 6-BA 0.2 mg/L+ NAA 0.1 mg•L-1 + 蔗糖 50 mg/L + 琼脂 7mg/L,增殖系数为 7.2; 试管苗生根的最佳培养基为1/2 MS + NAA 0.5 mg/L + IBA 0.2 mg/L + 6-BA 0.05 mg/L + 蔗糖 20 mg/L + 琼脂 7 mg/L,生根率为100％。     

鸡冠花的组织培养及试管苗开花诱导

以鸡冠花顶芽为外植体,采用不同激素组合对试管鸡冠花的芽诱导以及花诱导进行试验研究。结果表明:培养基MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.1 mg/L诱导的芽数量最多,而且芽生长表现较好,为最适芽诱导培养基;改良MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L+PP333 0.5 mg/L诱导的花大且都集中在主茎上,花型紧凑美观,为最适的试管苗开花培养基。在组培的基础上采用多效唑(PP333)调控花芽的形成,将为目前市场上试管苗开花的商品化研究提供数据资料。     

冰城寿离体培养与植株再生

以冰城寿的花梗为外植体进行离体培养植株再生研究,结果表明:中段花梗最易形成愈伤组织并分化成苗。初代培养的最佳培养基为MS+1 mg/L6-BA+1 mg/LKT+0.2 mg/LNAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂,可诱导少量愈伤,也可直接诱导丛生芽。丛生芽增殖的最佳培养基为MS+0.5 mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.2 mg/LNAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂。丛生芽壮苗的最佳培养基为MS+0.5 mg/LNAA+0.2 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂。     

安祖花愈伤组织诱导及其分化的正交试验设计

用正交设计法研究了不同激素处理及不同外植体对安祖花愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明,在本试验设计中,外植体是诱导安祖花愈伤组织的主要因素;以茎段为外植体诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+1.0mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA;愈伤组织不定芽诱导的主要因素是6-BA;不定芽诱导分化的最佳培养基为1/2MS+0.5mg/L 2,4-D+1.0mg/L 6-BA。     

大花卷丹百合组培快繁技术研究

为获得大花卷丹百合的优质种苗，促进其规模化生产，以大花卷丹百合的鳞片为外植体，采用MS、N6、B5培养基，添加激素NAA、6-BA、GA3，进行了大花卷丹百合的快繁技术研究。结果表明，外植体在N6培养基中产生愈伤组织最快、效果最好。愈伤组织及不定芽诱导最佳培养基配方为N6+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA；不定芽增殖最佳培养基为N6+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L GA3。NAA诱导小鳞茎效果最佳，最适培养基为 N6+1.0 mg/L NAA；促进小鳞茎膨大生根要在诱导鳞茎的基础上加入IBA，即最适培养基为N6+0.1 mg/L NAA+2.0 mg/L IBA。     

不同培养基对云烟97变异株腋芽培养的效应研究

以云烟97变异株腋芽为外植体,研究不同培养基对云烟97变异株组织培养的效应。结果表明,初代培养基MS+6-BA 2.0 mg/L分化成芽率高达75%;初代培养基MS+6-BA 1.0 mg/L,继代培养基MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L分化成芽率高达77%;初代培养基MS+6-BA 2.0 mg/L,继代培养基MS+6-BA 3.0 mg/L分化成芽率高达76%。故利用植物快繁技术培养云烟97时,要根据初代培养基选择相应的继代培养基。     

不同激素处理对山苍子雄性离体再生植株快繁的影响

用大叶山苍子成年雄株带茅茎段为外植体,研究不同激素种类和配比对山苍子离体培养及再生植株快繁的影响效果.结果表明:以MS 6-BA 2.0 mg/L 2.4-天1.0 mg/L培养基适于带茅茎段愈伤组织的诱导分化,分化率达62.5%;以MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L培养基适于芽苗增殖,增殖倍数为5.3;最佳生根培养基为1/2 MS IAA0.5mg/L IBA0.5mg/L TA2.0MG/L,生根率达83.3%.     

牛角瓜的组织培养

以牛角瓜的叶片为外植体,进行牛角瓜的组织培养。结果表明,培养基MS 2,4-D 2 mg/L利于愈伤组织的诱导;培养基MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.1 mg/L有利于芽的分化和增殖;生根壮苗的培养基为1/2 MS NAA 0.5 mg/L,其生根率100%;试管苗生根培养30 d后移栽,成活率可达85%以上。     

6-BA对大豆子叶节再生的影响

以大豆品种黑农35的子叶节为材料,研究6-BA对子叶节再生三个阶段即无菌苗萌发、丛生芽诱导、丛生芽伸长的影响。结果表明:添加1mg/L 6-BA的萌发培养基上萌发的无菌苗适合作为外植体的来源;丛生芽诱导培养基中6-BA的最适浓度为1.7mg/L;丛生芽伸长的四因素正交试验表明丛生芽诱导阶段的继代培养基中降低6-BA的浓度对其伸长的影响效应最大,水平为继代培养基中0.34mg/L 6-BA浓度,为原来的1/5。     

结球白菜带柄子叶外植体不定芽离体再生能力的遗传分析

解析控制植物不定芽离体再生能力的遗传因素,有助于从根本上提高离体培养困难材料的不定芽再生能力,是植物基因工程遗传改良的基础。本研究以结球白菜4个纯合亲本及其杂交后代的带柄子叶为外植体,建立了高频率离体不定芽再生技术。据此我们还对白菜不定芽再生能力进行遗传分析,并开展亲本与后代杂种的离体培养及反应研究,包括对培养基的激素需求,不定芽形成频率,不定芽形成数量,芽形态等系列特征。研究结果表明,杂种与亲本在培养基的激素浓度上有类似需求;杂交后代的不定芽再生率均至少高于一方亲本,在一些组合中可以高于双亲;在适宜的杂交组合及培养条件下,结球白菜带柄子叶外植体的不定芽再生率可以达100％,每一外植体上的不定芽数达3～7个。方差分析表明,结球白菜的不定芽离体再生能力存在基因的加性效应。     

浑善达克沙地境内沙地榆的自然更新

对不同生境下浑善达克沙地榆(Ul mus pumila L.var.sabulosa J.H.Guo Y.S.Li)林下幼苗的密度、生长情况及林缘、单株下幼苗扩散分布进行了野外调查研究,运用种群生态学方法及数理统计方法分析了其更新规律。结果表明,浑善达克沙地榆幼苗的密度为流动沙丘半固定沙地固定沙地;固定沙地、流动沙丘幼苗生长较差且流动沙丘幼苗死亡现象严重,半固定沙地幼苗生长较好更适于沙地榆的更新;幼苗主要集中分布于距林缘20m范围内,20m外幼苗密度显著降低;风向对浑善达克沙地榆的分布有较大的影响。     

Plant regeneration from hypocotyl and cotyledon explant of tomato (Lycopersicon esculentum Mill.)

Three tomato cultivars were used to examine the influence of the genetic background on the regeneration efficiency. White embryonic calli were formed within two weeks of culture. Shoots emerged either directly from the explant or indirectly from the embryonic callus. Multiple adventitious shoots were formed by clonal propagation of somatic embryos in the presence of 2 mg zeatin L^-1. The meristematic end of the hypocotyl of the cultivar Pontaroza showed a high regeneration frequency (70.2%) compared with the cotyledonary leaf explant (35.3%). The plants grown in the green house and the regenerants obtained showed a similar peroxidase banding pattern. The combined analysis of variance indicated that the difference in shoot induction between cultivars was highly significant. Shoot induction frequency was 57.2%, 43.5%, and 35.5% for the cultivars UC-97, Pontaroza, and Zuishi, respectively. The regeneration frequency was 50%, 28%, and 20% for the cultivars UC-97, Pontaroza, and Zuishi, respectively. The observed differences in shoot induction between cultivars were due to the genetic difference between them.     

Influence of Growing Medium and Seed Size on Germination and Seedling Growth of Pinus gerardiana Wall.

Pinus gerardiana Wall. is an important nut-producing pine having restricted distribution in the world. It has been observed that natural regeneration in the species is extremely poor or entirely lacking. The species has erratic and infrequent seed years, dormancy-related problems, and slow growth of seedling, which reduces its regeneration process in natural habitats. Therefore, we investigated the effect of growing medium and seed size on germination and seedling growth of the Pinus gerardiana. The seeds were categorized into two sizes, viz, small (<2.35 cm) and large (>2.35 cm) and five growing medium treatments were used, viz, Soil:Sand:FYM; Soil:Sand:Moss:FYM; Soil:Moss:Vermicompost; Soil:Sand:Vermicompost; and Soil:Sand:Moss:Vermicompost, for assessing their impact on germination and seedling growth. It was observed that, among different growing medium treatments, higher germination and seedling growth parameters were recorded, when Soil:Sand:Moss:Vermicompost was used for the study. Between different seed sizes, higher germination and seedling growth were recorded when seed size was large.     

陕北安塞不同林龄刺槐林下幼苗更新的动态变化特征

为了探讨黄土丘陵沟壑区刺槐林下幼苗更新的动态变化特征,进而为黄土高原地区人工刺槐林生态恢复与功能提升提供参考依据,在陕北安塞纸坊沟流域不同林龄(10 a,20 a,30 a,40 a)的刺槐林下共设置8个典型样地作为研究对象,调查分析林下幼苗的物种组成、密度及月动态变化特征。结果表明:(1)幼苗和地上植物间相似性系数表现为10 a>20 a>40 a>30 a,都以菊科、禾本科、豆科为主,生活型以多年生草本和一年生草本植物为主。(2)4—10月间,不同林龄林下均有大量刺槐幼苗萌发; 随林龄增加,林下幼苗更新过程各异,10 a林以狗尾草、猪毛菜幼苗为主,20 a林以猪毛菜、臭草、狗尾草、裂叶堇菜幼苗为主,30 a林以长芒草、裂叶堇菜幼苗为主,40 a林以翠雀、榆树幼苗为主。(3)随林龄增加,幼苗物种数与密度均呈降低趋势; 幼苗种类在4月、6月、9月较多; 幼苗密度在4月和6月相对较高。(4)林下草本植物幼苗大多数存活时间短; 在刺槐林恢复初期(10年),田旋花幼苗容易建植成功; 在刺槐林恢复的中、后期(20 a,30 a,40 a),裂叶堇菜、臭草、长芒草幼苗容易建植成功。因此,在陕北黄土高原丘陵沟壑区,根据刺槐林的恢复时期及林下不同物种幼苗存活特性对幼苗进行合理地抚育管理,促进林下植被的恢复与更新。     

巴西蕉高效间接器官发生再生体系研究

香蕉间接器官发生再生体系是一种较好的突变育种和基因转化受体再生系统。本研究以巴西蕉低代试管苗茎段薄层切片、中代试管苗茎段薄层切片、吸芽薄层切片、雄花薄层切片为外植体,对巴西蕉间接器官发生再生体系进行了系统研究。研究结果表明,以MS为基本培养基,巴西蕉低代试管苗茎段薄层切片在0.5～1.0mg/L2,4-D＋4～6mg/L6-BA激素条件下;雄花薄层切片在0.5～1.0mg/L2,4-D＋0.2～0.5mg/LZT激素条件下能通过花菜体间接器官发生途径实现高效再生;同时,花菜体薄层切片在1.0mg/L2,4-D＋5mg/L6-BA激素条件下,再次通过花菜体途径实现循环高效再生。本研究为建立香蕉高效间接器官发生再生体系和相关育种技术奠定了基础。     

匍匐型地被菊再生及遗传转化体系的建立

为构建有效的地被菊再生和遗传转化体系,本研究以匍匐型地被菊雨花落英叶片为外植体,研究不同苗龄和激素配比对叶盘再生的影响;通过农杆菌介导法将外源基因导入野生型植株中,研究预培养、延迟培养、抗生素浓度等遗传转化条件对转化效率的影响。结果表明,雨花落英叶盘转基因最适再生条件为,以苗龄为30 d的组培苗幼嫩叶片为外植体,设置再生培养基配方为MS+6-BA 1.5 mg·L^-1+NAA 0.8 mg·L^-1,此时再生率高达91.11%,平均芽数为5.90;最优遗传转化组合为预培养2 d,侵染5 min,共培养2 d,延迟培养5 d,之后进行选择培养。羧苄青霉素在延迟培养阶段最适抑菌浓度为400 mg·L^-1;潮霉素叶盘筛选的最适选择压为8~10 mg·L^-1,生根筛选最适浓度为11 mg·L^-1;培养后期加入6-KT可以有效提高抗性芽的再生率;调节6-BA浓度为1.0 mg·L^-1,蔗糖浓度为40 g·L^-1,可以将得到的玻璃化苗转化为正常苗。分子鉴定结果表明,15株抗性苗中有10株阳性苗,阳性苗概率为67%;与野生型植株相比,9个株系的CmERF12基因均受到了明显的抑制表达。本研究建立了地被菊雨花落英再生和遗传转化体系,为进一步进行基因功能研究和遗传改良奠定了一定的理论基础。     

＇早红＇草莓高效遗传转化受体系统的建立

本文以草莓主栽品种‘早红’组培苗离体叶片和叶柄为外植体,进行叶龄、暗培养、植物生长调节剂配比及抗生素敏感性研究,建立草莓高效遗传转化的受体系统。在含3.0mg/L6-BA与0.1mg/L2,4-D的MS培养基上,30d叶龄的叶片再生频率高达98.31%,平均每叶片再生芽数5.09个,叶柄切段的再生频率为89.25%,平均每叶柄切段再生芽数4.92个,叶片的再生频率略高于叶柄;不定芽在含0.2mg/L6-BA与0.2mg/LGA3的MS继代培养基上培养成苗。将生长状态良好的不定芽转至含0.2mg/LIBA的1/2MS培养基上生根,生根率达100%,平均生根数量16.27条,平均根长1.85cm。抗生素敏感性试验表明,草莓外植体适宜的卡那霉素选择压力为25mg/L,头孢霉素的筛选浓度为300mg/L。本研究建立的再生体系可作为草莓遗传转化的受体系统。     

虎杖茎尖离体再生体系的建立和优化

研究了苗龄、接种方式、不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖等对虎杖(Polygonum cuspidatum)茎尖愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响。结果表明:愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+蔗糖28g/L+琼脂5.5g/L+2,4-D 1.5mg/L+6-BA 1.0mg/L,诱导率为100%;3-7d苗龄的虎杖茎尖愈伤组织诱导能力无显著差异,诱导率均达到95%以上,此后随着苗龄的增加,愈伤组织诱导能力快速下降,苗龄为12d时愈伤组织诱导率只有55.6%;以正插(形态学下端插入培养基)方式接种的外植体愈伤组织诱导率显著大于反插(形态学上端插入培养基)和平放的;不定芽分化最佳培养基为MS+AgNO34.0mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.0g/L+NAA 0.5mg/L+TDZ 0.8mg/L,分化率为83.9%,增殖系数为7.63;生根培养基选用1/2 MS+蔗糖26g/L+琼脂6.5g/L+活性碳3%+IBA 0.2mg/L+NAA 0.3mg/L,生根率为100%。用透气膜封口比用聚乙烯菌膜生根率明显提高,生根明显提前。