Dot—ELISA检测猪血清中伪狂犬病病毒抗体方法的建立和评价

建立了检测猪血清中伪狂犬病病毒(PRV)特异抗体的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA),并通过对人工感染和自然感染猪血清以及野外试验猪血清的检测与微量血清中和试验(MSN)作了比较。结果表明, Dot-ELISA具有特异性和敏感性,能检测出猪血清中PRV特异性抗体,与MSN检出符合率在95％以上。经统计分析,差异不显著(P>0.05)。Dot-ELISA可检出早期感染猪血清中PRV抗体,可应用于猪伪狂犬病的临床实验诊断。     

检测猪伪狂犬病血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验方法的建立和评价

以斑点酶联免疫吸附试验(简称 Dot-ELISA)检测128份接种伪狂犬病病毒(PRV)前后的实验猪血清及49头份现地猪血清,并与微量病毒中和试验(MIVN)作比较.结果,Dot-ELISA 能检出抗 PRV 特异抗体,与MIVN 的检出符合率为95.9%,两种方法无显著性差异(P>0.05).Dot-ELISA 检出人工感染猪血清抗体的时间(接毒后第5天)早于 MIVN(接毒后第9天).Dot-ELISA 检测猪血清 PRV 抗体,具有特异性强、敏感性高、快速简便等优点,适合于大批检疫和流行病学调查.     

间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体

用猪肾传代细胞IBRS－2增殖猪伪狂犬病病毒（PRV）鄂A株，病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇（Mr20000）浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清IgG免疫家兔，HRP村记撮的兔抗猪IgG，制备出高效价的酶标抗体，酶标抗体工作浓度为1：50000；经各种条件的选择，建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为39.2mg/L，血清最佳稀释度为1：20，与猪细小病毒、猪、O型口蹄疫、猪衣原体标准阳性血清呈阴性反应，与标准阴性血清和临床未感染PRV的猪血清呈阴性反应；与猪伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应；与美国进口的PRV抗体检测ELISA诊断试剂盒检测结果比较，45份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100％。表明建立的间接ELISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点，可用于猪伪狂犬病血清抗体的定性和定量检测。     

应用斑点-ELISA 检测猪瘟血清抗体的研究

应用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)orngonC_(24)株作抗原,混合纤维素微孔滤膜作固相载体,制备检测猪瘟(HC)抗体的快速诊断膜,进行斑点-ELISA(Dot-ELISA)试验.结果,以 HC 高免血清和自然感染 HC 猪阳性血清作阻断试验,证明了本方法的特异性:猪轮状病毒阳性血清、猪流行性腹泻阳性血清、猪细小病毒阳性血清及断奶后未注射任何疫苗的健康猪血清均为阴性;断奶前后和未注苗仔猪血清几何平均效价低于1:40;注苗猪效价为1:70～1:160;注苗后又爆发,流行 HC 场的猪血清效价为16:10～1:320;未注苗爆发 HC 场的猪血清抗体效价与未注苗猪相似。本法特异性强、敏感性高、操作简便快速,适于现地 HC 免疫监测及流行病学调查.     

斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立

首次建立了斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ，美洲株）抗体的方法。特异性鉴定表明，ＰＲＲＳＶ不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应；与美国进口的ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ诊断试验盒检测结果比较，３５份猪血清的阴、阳性检出总符合率为８２．９％（２９／３５），其中Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率。     

猪伪狂犬病高免血清的制作与初步应用

用伪狂犬病抗体阴性健康猪,以不同剂量、间隔一定时间、多次免疫接种伪狂犬病强毒S株,制备伪狂犬病病毒高免血清,试验表明,用本方法制备的伪狂犬病病毒高免血清特异性强、抗体效价高达256倍以上,完全符合诊断用血清标准要求.并将高免血清在中和试验、ELISA、免疫胶体金等进行了对比试验.     

猪伪狂犬病病毒高免血清的制备及应用

用伪狂犬病病毒及抗体阴性羊,以不同免疫剂量,间隔一定时间,多次免疫不同类型的猪伪狂犬病病毒(Bartha-K61株),制备猪伪狂犬病病毒高免血清,特异性强,效价可达1:2 048以上。本研究为伪狂犬病活疫苗或毒种的鉴定及外源病毒检验提供了具有良好特异性和高效价的中和用血清。     

猪源HBV样病毒感染的研究

用检测人血清乙肝标志物的试剂和方法,检测2823份猪血清,检出HBsAg阳性血清56份(56/2823),阳性率为1.98%,不同地区的检出率在1.0%～4.5%之间.对37份HBsAg阳性血清检测了抗—HBS、HBeAg、抗—HBe、抗—HBe.共检出阳性23份(23/37);100份HBsAg阴性猪血清与37份HBsAg阳性猪血清经双育试验检测谷丙转氨酶,有非常显著性差异,血清HBsAg阳性猪的肝脏有中等度到重度的病理组织学变化(11/11);用ELISA法检测HBsAg阳性猪血清中人聚合白蛋白受体(PHSA—R),21份样品中有19份阳性(19/21),而HBsAg阴性猪血清10份未检出阳性;用生物素—亲和素标记的HBV—DNA探针检测HBsAg阳性猪血清.11份样品有41份阳性(4/11);采用从人血清中提纯Dane颗粒的方法,从8份猪血清中都提纯了类似Dane颗粒的病毒粒子(8/8);提纯的病毒粒子和Dane颗粒与羊抗—HBV作免疫电泳,沉淀线基本一致;用2mL含HBV样病毒颗粒的猪血清接种10头仔猪,有3头感染(3/10).传至第3代,10头仔猪4头感染(4/10).实验证实,猪源HBV样病毒粒子是一种新发现的病毒,和HBV相比,抗原有相关性,基因有同源性.     

乳胶凝集试验检测猪伪狂犬病血清抗体的研究

用ＢＨＫ－２１细菌增殖猪伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）鄂Ａ株,病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二酶浓缩后与等量经胰酶处理的乳胶制成凝试验抗原。此抗原与伪狂犬 病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清以及新鲜血清样品均呈现明显的凝集反应;与标准阴性血清和临床示感染ＰＲＶ的猪血清均泌 反应;与猪瘟阳性血清、衣原体病阳性血清的呈阴性反应。证产所建立的乳胶凝集试验具有微量、简便、快速、敏感性高、特异性强的优点,     

规模化养殖场猪繁殖障碍性疫病的实验室诊断

为对发生在贵阳市某规模化养猪场的一起猪繁殖障碍性疫病进行确定性诊断，采集病死猪的血清和病料样本进行实验室诊断。结果：猪细小病毒、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病病毒PCR阳性检出率依次为45.45%(5/11)、45.45%(5/11)和54.55%(6/11)。结果表明，本次疫病是由猪细小病毒、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病病毒混合感染所致。     

应用ELISA检测猪伪狂犬病病毒抗体

应用 ELISA 对广西八个地区25个养猪点的380头份猪血清进行了猪伪狂犬病血清学调查.结果,在六个地区检出阳性22头份,阳性率为5.3%。从而证明了广西一些地区有伪狂犬病存在.用血清中和试验(SN)与 ELISA 对抽检的24份血清作了比较。结果,SN 和 ELISA 的阳性数分别为14份(58.3%)和20份(83.3%),ELISA 的敏感性高于 SN,且快速、简便.     

猪伪狂犬病的血清学调查

采用Dot-ELISA诊断试剂盒检测了青海省的大通、湟中种猪场103份血清中的猪伪狂犬病病毒抗体，对该病的流行情况进行了血清学调查，结果检出阳性血清6份，阳性率为5.82%(6/103)，进一步证明该病在青海省猪场存在。     

猪细小病毒、圆环病毒感染和伪狂犬病血清学调查

通过对遵义地区7个县(市)规模养殖场和散养户271份猪血清样本进行猪细小病毒(PPV)感染、圆环病毒(PCV)感染、伪狂犬病(PR)的血清学检测.抗体阳性检出率分别为4.80%(13/271)、4.06%(11/271)、4.43%(12/271),规模化养殖场抗体阳性率明显高于散养户,表明该地区猪存在着PPV、PCV和PRV的感染,应认真做好监测和防控工作.     

猪伪狂犬病-传染性胃肠炎二联高免血清最佳免疫程序及保存条件的初步筛选

为了获得高效价的猪伪狂犬病-传染性胃肠炎二联高免血清,试验采用冻融法制备猪免疫血清,ELISA阻断法、血凝试验及血凝抑制试验分别检测各组猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒血清抗体效价,比较试验组及空白对照组两种病原的血清抗体效价。将两种病原抗体效价最高组血清分别置不同温度保存不同时间检测其抗体效价,探讨最适保存条件。结果表明:S6组的两种病原血清抗体效价最高,猪伪犬病病毒血清OD630值为0.352、猪传染胃肠炎病毒血清抗体效价为1∶64;试验组与空白对照组之间、S6组与其他试验组之间抗体效价差异显著。说明S6组为此次探讨的猪伪狂犬病-传染性胃肠炎二联高免血清的最佳免疫程序,通过30 d的基础免疫及10~15 d的强化免疫能获得较高效价的猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒血清抗体。-20℃和4℃分别适合猪伪狂犬病-传染性胃肠炎二联高免血清抗体液的长期和短期保存。     

一起猪伪狂犬病的诊断与分析

为了查找云南曲靖区某猪场发生怀孕母猪流产和产木乃伊胎儿增多的原因,采集流产胎儿脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结等组织器官和母猪血清、全血。试验对胎儿组织器官进行猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征的病原核酸检测,对母猪血清进行猪伪狂犬野毒感染gI抗体检测。检测结果表明胎儿猪伪狂犬病毒核酸阳性,猪血清伪狂犬野毒感染gI抗体阳性。诊断该场引起母猪流产和产木乃伊胎儿增多的病因是猪伪狂犬病毒感染所致。     

猪伪狂犬病病毒PCR检测方法的优化建立及初步应用

为了建立敏感性高、特异性高、重复性好的猪伪狂犬病病原的PCR检测方法,试验根据初步建立的猪伪狂犬病病毒(PRV)聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,对其PCR反应条件进行了优化,并对25个猪场210份可疑猪伪狂犬病病毒感染的病料进行了检测。结果表明:25个猪场有24个检出PR阳性,猪场检出率为96%;猪伪狂犬病病毒总体感染阳性率达60.5%(127/210),感染阳性率最高为100%,最低为0。     

达州市猪伪狂犬病的流行病学调查

为掌握达州市各地猪伪狂犬病的野毒流行情况,采用g E-ELISA方法随机抽检来自8个县122个场点的540份猪血清样本,共检出5个阳性县,30份猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus,PRV)阳性血清,阳性率为5.56%;检出14个阳性场,场点阳性率为11.48%,其中散养户场点阳性率最高,为15.15%。结果显示,达州市内大部分地区以及不同抽样群均存在不同程度的猪伪狂犬病野毒感染,提示应该进一步加强猪伪狂犬病的防控工作。     

猪伪狂犬病的血清学诊断

在国内,猪伪狂犬病危害猪群是严重的,仔猪有高发病率,成年猪隐性经过,症状较轻微,为潜在的隐性传染源。用血清学方法检测猪血清中伪狂犬病病毒抗体,在有效诊断此症方面有着极为重要的现实意义。文章应用间接ELISA方法检测猪伪狂犬病病毒抗体,调查了解猪伪狂犬病的流行病学特点,就科学防治此病做技术指导。     

酒泉市猪场主要病毒性疾病的检测与分析

为了解2023年酒泉市几种主要猪病毒病的流行情况,本研究采用荧光定量RT-PCR方法,对酒泉市630份猪血清、270份猪组织进行了病原学检测。结果显示：检出阳性血清107份,样本个体阳性率由高到低依次为猪繁殖与呼吸综合征病毒(7.78%)、猪伪狂犬病病毒(4.92%)、猪细小病毒(4.29%)、非洲猪瘟病毒(未检出)、猪瘟病毒(未检出)、口蹄疫病毒(未检出);样本混合感染率为3.80%,猪繁殖与呼吸综合征病毒混合猪伪狂犬病病毒感染率最高(1.90%)。本次病原学检测可为酒泉市猪场疫病综合防控提供参考。     

伪狂犬病间接ELISA方法的探索

伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由疱疹病毒科的伪狂犬病毒引起的一种急性传染病,在世界各地广泛流行.在我国,本病对猪的危害很严重,引起仔猪的高发病率,成年猪症状轻微,常呈现隐性带毒,成为新的传染源,用血清学方法检测动物血清中伪狂犬病病毒抗体,在伪狂犬病的诊断和流行病学调查及疫苗的免疫效果上有一定意义.为了有效控制和消灭此病,急需快速、准确、敏感性高、特异性强、便于广泛推广应用的诊断方法和疫苗免疫效果的检测方法.本实验试图建立一种以ELISA试剂盒形式能检查出猪血清中伪狂犬病病毒抗体的方法,以便进一步调查猪伪狂犬病的流行情况和疫苗的免疫效果.