弓形虫E/SA疫苗对小鼠抗弓形虫感染的保护作用

用细胞培养方法制备了弓形虫(GJS 株)ES 抗原(Exceted/Sereted Antigen,E/SA),用油佐剂 M206按不同剂型制备 ES 苗,随机分组免疫健康小鼠(昆明鼠,23～25 g·只~(-1)),每组5只,皮注/腹注0.3 mL·只~(-1)。其中:组1,E/SA 浓缩苗;组2,E/SA 苗;组3,E/SA-H 浓缩苗;组4,E/SA-H;组5,培养液对照;组6,M206对照.另设:组7,健康攻毒对照;组8,健康对照.先后免疫2次(间隔15 d),第28 d 用弓形虫 GJS 速殖子强毒攻毒,每鼠腹注10~2.免疫前后分别取尾血片检测弓形虫血清抗体(IHA 法).     

猪瘟综合防控措施

正一、加强免疫是预防猪瘟的有效措施首先,应选用适宜的疫苗进行有效免疫注射,并制定合理的免疫程序和免疫剂量。目前,采用的疫苗有中国的兔化弱毒、脾淋苗,牛(羊)睾丸细胞苗,兔化弱毒克隆株苗及日本的细胞弱毒苗,免疫效果均较好。(一)免疫程序猪瘟免疫程序应根据本场及本地情况进行选择,目前常用程序有:仔猪出生后吮初乳前接种疫苗,注苗后2 h吃初乳,40日龄再免疫1     

不同法氏囊病活疫苗对鸡法氏囊发育的影响和对新城疫免疫效果影响的评价

评价常用的6种IBD疫苗株对鸡法氏囊发育的影响和对新城疫免疫效果影响,为临床选用疫苗提供参考.将SPF鸡分成6个试验组和1个对照组,每组25只.7日龄时,试验组分别用A80株、D78株、B87株、KS96株、MB株和2512株滴口免疫,每只鸡各1羽份.各组分别在免疫后4 d、9 d、20 d随机抽取5只鸡计算法氏囊指数.各组于IBD免疫后14 d用La Sota株活疫苗点眼、肌肉注射La Sota株油佐剂灭活疫苗各1羽份,对照组同时进行免疫.免疫后每隔7 d检测1次NDV抗体.42日龄时各组以鸡新城疫强毒F48E9攻击,观察攻毒保护效果.结果表明:27日龄A80、D78、B87和KS96组法氏囊指数和对照组相比差异不显著(P>0.05);MB和2512与对照组之间差异极显著(P<0.01).A80、D78对ND疫苗诱生机体产生抗体的影响小(P>0.05);MB、2512对ND抗体影响大,抗体水平显著低于对照组(P<0.01);B87、KS96对ND抗体生成有一定的影响,和对照组相比低1个滴度左右,但从统计分析来看影响较小(P>0.05).用F48E9攻毒,结果显示A80、D78、B87、KS96和对照组保护率均为100%,而MB株组保护率为80%,2512株组保护率为70%.A80、D78、B87和KS96这4株疫苗株对法氏囊的发育影响很小;MB和2512对法氏囊发育有明显的抑制作用.MB和2512对新城疫的免疫保护有较大影响,而弱毒A80、D78以及中等毒力的B87、KS96对新城疫的免疫保护影响轻微.     

猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR快速鉴别检测方法的建立

【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测后发现,利用该方法可以从中分别检测出CSFV强毒和疫苗毒。【结论】建立了可鉴别检测CSFV强毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR方法,为猪瘟的早期诊断及疫苗免疫猪和野毒感染猪的鉴别提供了技术参考。     

弓形虫紫外线弱毒虫株的培育及免疫研究（第二报）

本文报道了弓形虫NT强毒虫株,经紫外线全暴露垂直连续照射,通过细胞致弱培养筛选出抗辐射变异虫株NTA-Ⅲ系。本虫对猪、兔和小鼠的毒力均明显减弱。猪安全试验116头,21头出现弱反应,占18.1％,无重病或死亡;非带虫免疫试验36头,连续测35128天,均末查到虫体和包囊。用含虫数10~5/毫升弱毒虫苗每头猪接种1毫升,6个月免疫保护力为100％。     

兔巴氏杆菌病的诊治

1 发病情况 张北县城北树儿湾李某饲养的12只法国公羊种兔、18只比利时种兔和9只新西兰种兔于9月22日全部发病,病兔呼吸急促且有啰音,常用爪挠柔鼻孔.23日死亡1只新西兰兔,初步诊断为兔巴氏杆菌病.     

猪喘气病弱毒疫苗的研究 猪肺炎霉形体兔化弱毒株的培育

 用5株猪肺炎霉形体分别人工感染乳兔，仅济南株适应于乳兔。经过长期继代，培育出1株毒力显著减弱并保持良好免疫原性的兔化弱毒株。该株对乳兔的最佳接种部位是胸腔，最小感染量为0.5×10#+（-5）克，在乳兔体内存活14天左右。在成兔体内可产生血凝抗体，其最小感染量为2×10#+（-5）至2×10#+（-6）克。扫描电镜观察表明，兔化弱毒株在乳兔支气管内繁殖，纤毛未见明显损伤。该株对猪的潜伏期的几何平均值为27.9天，对支气管纤毛损伤轻微，不发生同居感染，不影响增重，保护率为70-80%，免疫期6个月以上，最小免疫剂量为5×10#+（-2）克，气管、胸腔、滴鼻、气溶胶接种均可产生免疫力。用兔化弱毒株作种子制造大兔冻干苗15批，先后在北京、广东、福建、浙江、江西、湖南、宁夏、河北等8个省（市）自治区的30个猪场，接种20个不同品种、不同年龄的10363头猪，证明安全有效。兔化弱毒株的培养成功，为今后开展猪喘气病的预防工作创造了有利条件。     

猪瘟病毒糖基化E2蛋白和E0蛋白的协同免疫保护作用

为了研究杆状病毒表达的糖基化亚单位疫苗的协同免疫保护作用,将重组杆状病毒感染Sf9细胞制备猪瘟E2、E0重组蛋白,Western blot检测蛋白表达和糖基化情况。用重组蛋白单独或联合免疫家兔,检测血清中抗体水平变化。在首免后4周用猪瘟兔化弱毒疫苗C株攻毒家兔,监测其体温变化,并运用RT-PCR检测家兔脾脏中病毒RNA。结果表明,E2、E2+E0免疫组兔均可诱导产生高水平的抗体和中和抗体,但两组间差异不显著。攻毒后E2免疫组2/5兔出现轻热症状,1/5兔脾脏病毒阳性;E2+E0组兔均未出现发热症状,也未检测到C株病毒RNA。E0组不能诱导兔产生中和抗体,但也能提供部分保护(2/5)。可见,基于E2、E0的亚单位疫苗具有良好的免疫原性,且两者联合使用具有协同作用,有望成为新型亚单位疫苗的候选抗原。     

猪瘟病毒E2基因DNA疫苗的试验研究

用构建的E2-pcDNA4.0 DNA疫苗对Balb/c小鼠、家兔和仔猪进行免疫,经3次肌肉接种,间隔15 d免疫后,测定抗体水平.结果表明,构建的DNA疫苗能诱导小鼠产生中和性抗体,免疫家兔最少可抵抗10个最小感染剂量(M ID)的猪瘟兔化弱毒苗的攻击.攻毒试验结果表明,E2-pcDNA4.0 DNA疫苗可抵抗致死剂量的CSFV石门株强毒的攻击.     

仔猪乳前攻击猪瘟强毒免疫试验

仔猪乳前猪瘟免疫,经前一阶段试验证实,在仔猪生后即行猪瘟兔化弱毒苗注射,间隔0.5,1.5,3.5,4.5小时后令其吸吮初乳,饲养155天行兔体中和抗体测定,0.5小时组5头猪的血清对10只家兔有90%(9/10)获得中和.为进一步验证其免疫效果,应用石门系猪瘟强毒进行攻击试验.     

猪兔感染弓形体免疫机理的探索 Ⅰ.间接血凝法检测免疫血清

近年来,我们在研究猪弓形体病工作中,发现注射弓形体强毒虫株(简称NT)耐过的猪和兔血清中含有抗体,能够产生坚强的免疫力;而以弓形体弱毒虫株(简称NTA)注射猪与兔免疫后的血清中不含抗体,也有坚强的免疫力.关于弓形体病的免疫机理的解释很多,惯用抗体来解释,认为是体液免疫;有认为主要是细胞介导免疫;还有认为与变态反应有关;也有认为是细胞和体液二者兼有的免疫.众说纷纭,莫衷一是.我们用弓形体强毒(NT)和弱毒(NTA)虫株免疫猪与兔的血清,进行了一系列比较试验,探索其免疫的机理,所获的结果将陆续予以发表.现先将间接血球凝集法检测猪、兔体感染弓形体强弱毒虫株免疫血清的结果报告如下.     

蛋鸡抗IBV HI抗体效价与攻毒后产蛋性能的相关性

【目的】研究抗呼吸型IBV HI抗体水平与蛋鸡产蛋率的对应关系。【方法】将180只SPF鸡分为4组,第1组和第2组首免用鸡传染性支气管炎H120活疫苗免疫,1羽份/只,4周后采血,第2组鸡同时用3批次的鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+HN6株)分别进行加强免疫,试验同时设置攻毒对照第3组和不免疫攻毒对照第4组。灭活疫苗免疫4周后,当产蛋率稳定在80%以上时,对试验鸡采血测定抗体,同时使用M41株病毒进行攻毒,记录攻毒后4周内各组鸡的产蛋性能,分析抗IBV HI抗体水平与攻毒后产蛋性能的相关性。【结果】弱毒活疫苗和灭活疫苗联合免疫组抗IBV HI抗体水平在2-8.2~2-9.3时,免疫鸡能够耐受IBV强毒的攻击,其产蛋性能不受影响。弱毒活疫苗免疫组抗体为2-4.8,产蛋量下降了12.69%。攻毒对照组抗体水平为2-2.0,攻毒后产蛋量下降45.22%。【结论】蛋鸡抗IBV HI抗体效价与产蛋率对鸡传染性支气管炎强毒的攻毒保护之间呈正相关,可以用HI抗体检测来评价鸡传染性支气管炎灭活疫苗对产蛋鸡的免疫效果。     

猪瘟病毒石门株E2基因序列分析

经非猪瘟免疫猪增殖猪瘟病毒石门株,从抗凝血中直接提取病毒RNA进行RT-PCR,获得了猪瘟病毒石门株E2基因片段。克隆后测序,结果表明石门株的E2囊膜糖蛋白与国外报道的5株猪瘟病毒的E2囊膜糖蛋白具有相同的骨架结构,即均具有15个半胱氨酸残基和5个潜在糖基化位点,此外石门株也具有保守序列RYLASLH。同源性比较表明,石门株与日本的ALD株和GPE#+-株同源性最高,而与欧洲的Alfort株同源性最低。与国内的疫苗种毒（482代）、疫苗毒以及国外使用的中国猪瘟兔化弱毒株同源性比较表明,石门株与种毒(482代)同源性最高,其次为国外使用的中国猪瘟兔化弱毒株,而与国内使用的疫苗毒同源性最低。本研究提示国内疫苗毒的E2基因在生产中有较大变异,可能导致抗原漂移。     

鸡毒害艾美尔球虫早熟株的免疫原性研究

为制备早熟弱毒疫苗提供虫株和理论依据,对选育的毒害艾美尔球虫早熟株(P8)和亲本株(P0)的免疫原性进行了研究。试验分别用P0和P8,以每只鸡300个孢子化卵囊免疫7日龄雏鸡,免疫后14 d,分别以每只鸡1×104和10×104个P0孢子化的卵囊进行攻毒,以OPG、平均每只鸡的卵囊产量,卵囊减少率、相对增重率、病变记分减少率为指标。结果表明:(1)攻毒后每只1×104个P0孢子化的卵囊时,P8、P0免疫攻毒组的卵囊减少率分别为75.59%、84.66%;(2)攻毒后每只10×104个P0孢子化的卵囊时,P8、P0免疫攻毒组病变记分降低率分别为81.46%、76.66%。表明P8株的免疫原性与P0无明显变化,均有保护力,符合早熟株免疫原性保持不变的特点。     

狐犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑炎三联疫苗免疫试验

用CDV弱毒、FPV-A弱毒和CAV-2型弱毒研制成功了狐三联疫苗。该三联疫苗安全可靠，免疫原性强，免疫期6个月以上，该三联疫苗免疫剂量为3ml/只，CDV、FPV-A和CAV-2型弱毒疫苗效价分别为10^6.0～10^8.0，现场应用100余万只狐，抗体阳转率93%。     

猪、兔感染弓形体免疫机理的探索 Ⅱ.中和试验法检测免疫血清抗体

本研究在于应用中和试验法检测猪、兔感染弓形体强、弱毒虫株的血清中是否存在中和抗体,以期为阐明其免疫机理积累资料.材料与方法(一)试验动物 选健康白兔7只,体重3公斤左右.在每只兔背部剪去毛,然后用不褪色的彩笔划分16～20个小方格,每格约400平方毫米.每只兔供4～5份血清样品的检验.     

抗猪瘟病毒单克隆抗体的研究——Ⅱ抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用聚乙二醇沉淀浓缩纯化猪瘟兔化弱毒中国株(SFV-C)免疫 BALB/C 小鼠,取其脾脏,制备淋巴细胞,与 FO 骨髓瘤细胞融合,经 EliSA 检测和有限稀释法克隆化,最后筛选出5株对SFV 的单克隆抗体杂交瘤细胞.所制成的腹水抗体,一株只对 SFV-C 发生特异性反应,四株与SFV-S,SFV-F 及 BVDV oregon 发生微弱的交叉反应.细胞上清液的 EliSA 效价为1:800～1600,腹水效价为1:10~6～10~7.     

春季前后猪瘟免疫“十”要点

一、要使用猪瘟兔化弱毒单苗疫苗包括猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗和猪瘟兔化弱毒兔脾淋组织苗,不要使用猪瘟—猪丹毒—猪肺疫＂三联苗＂防猪瘟。重要的是用猪瘟单苗防好猪瘟,猪丹毒可以不防。在怀疑有猪肺疫的猪场,可用猪巴氏杆菌A型及B型（E0630）单苗联用,且应于猪瘟单苗免疫间隔7天后使用。另外,对猪瘟单苗的选择也有讲究,最好能选用两个不同知名品牌的产品,这叫双保险。     

犬用犬瘟热、细小病毒性肠炎、传染性肝炎和狂犬病四联疫苗研制

用CDV弱毒、CPV弱毒、CAV－2型弱毒和ERA弱研制成功了犬用四联疫苗。该四联疫苗安全可靠，免疫原性强，免疫期6个月以上。室温可保存1d，4℃可保存2周，－20℃可保存6个月。该四联疫苗免疫剂量为3ml／只，CDV、CPV、CAV－2型和ERA弱毒疫苗效价为10^6.0-10^7.5，现场应用30万只犬，抗体阳转率90％。     

50年中国农业科技成就（四）

（九）畜禽疫病防治５０年代初期，研制出安全有效的牛瘟兔化、山羊化弱毒疫苗，猪瘟兔化、绵羊化弱毒疫苗，仅用６年的时间，就消灭了牛瘟、猪瘟。１９７６年，在联合国粮农组织和西欧经济共同体召开的会议上，一致认为中国的猪瘟兔化弱毒疫苗为控制和消灭欧洲的猪瘟起了重要作用。１９６８—１９８３年，研制成功的马传染性贫血病弱毒疫苗是国际兽医科学的创举。据１９８２年底统计，全国１３个省、市、自治区已免疫注射２００万匹马次，使这种毁灭性病毒病已基本得到控制。研制出的牛肺疫兔化弱毒菌苗和兔化绵羊化适应菌苗综合防治措施，…