草莓叶片再生体系的建立

以广西草莓的主栽品种丰香无菌苗的叶片为外植体，接种在一系列改良MS培养基上进行培养。实验结果表明：丰香在MS TDZ 2．0mg／L IAA 0．25mg／L培养基培养时，叶片再生频率达到88％以上，适合于进行遗传转化研究。     

108杨叶片再生体系的建立

[目的]研究欧美杨108离体叶片再生技术,为遗传转化研究提供科学依据。[方法]研究了外植体的消毒方法和不同激素组合对叶片再生和不定芽生根的诱导效果。[结果]茎段外植体消毒的最佳处理为：75%乙醇溶液消毒10s＋0.1%升汞消毒10min,污染率和褐化率均低,成活率较高;叶片诱导分化培养基以MS＋6-BA0.6mg/L＋NAA0.2mg/L效果最好,诱导率100%,平均不定芽诱导数为26.43个;最佳生根培养基为1/2MS＋IBA0.3mg/L或1/2MS＋IAA0.3mg/L,生根率可达100%,生根数分别为4.83条和5.20条。[结论]以108杨叶片为外植体,建立了108杨的高效再生体系。     

菊花叶片离体高效再生体系的建立

本文报道了以菊花叶片为外植体，诱导植株再生，建立高效植株再生体系。获得诱导愈伤组织、芽和根的最佳培养基。在有6-BA、NAA的MS培养基上获得较高的愈伤组织诱导率，在有2，4-D的培养基上其愈伤组织诱导率很低。带有愈伤组织的外植体转移到有6-BA、NAA的MS培养基上催化芽的产生，并筛选出能直接诱导芽再生的培养基(MS 6-BA(3mg／L) NAA(1mg／L))。AgNO3可明显提高芽的再生率。茎段在1／2MS和有IBA或NAA的1／2MS培养基上诱导生根。生根的小苗在温室里生长良好。     

甜瓜叶片高效再生体系的建立

为了建立高效稳定的甜瓜植株再生体系,为甜瓜的转基因技术提供受体材料,以薄皮甜瓜品种"西甜一号"叶片为外植体,通过器官发生途径诱导形成不定芽,研究了不同的激素组合、外植体放置方式、暗培养时间等条件对其再生的影响。结果表明,以新梢顶端展开的第2~3片叶在MS 6-BA1.0 mg/L的诱导培养基上,外植体远轴面向下接触培养基,直接转入正常光周期下培养再生频率可达100%,平均每个外植体上可诱导出11株健壮植株。在MS 6-BA 0.05 mg/L不定芽伸长培养基上,分化的不定芽(丛)能够伸长。在1/2MS IAA 0.2 mg/L的生根培养基上无根苗生根,生根率可达100%。     

真梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片再生体系的初步建立

【目的】初步建立真梅系梅花叶片的再生体系,为真梅系梅花良种培育及叶盘法基因转化等研究奠定基础。【方法】以真梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片为试验材料,通过正交试验对外植体处理方法以及愈伤组织诱导、分化和生根培养基进行筛选,探讨真梅系梅花叶片再生的影响因素。【结果】选用梅花‘三轮玉蝶’1年生枝条基部的叶片,背面向上接种并黑暗培养,有益于愈伤组织形成。在培养基1/2MS+TDZ 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L中,叶片愈伤组织诱导率可以达到85.04%;愈伤组织转接在培养基1/2 MS+TDZ 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L中,分化率可达46.44%;分化出的不定芽在添加6-BA 0.5mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA 0.3mg/L的1/2MS培养基上诱导生根效果较好,生根率达88.29%。【结论】明确了处理方法和部分外源激素对梅花‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织形成的影响,初步建立了梅花‘三轮玉蝶’叶片再生体系。     

盖杨叶片高频植株再生体系建立

[目的]利用生物技术手段提高盖杨抗寒性并扩大其栽培区域。[方法]以盖杨叶片为外植体,研究不同激素组合对盖杨叶片分化及生根的影响,建立盖杨叶片高频植株再生体系。[结果]盖杨不定芽分化最适培养基配方为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.20 mg/L+蔗糖25 g/L+琼脂6.0 g/L,p H 6.5,不定芽再生频率为96.67%,平均分化芽数20.3个;最适生根培养基配方为1/2MS+IBA0.3 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂6.0 g/L,p H 6.0,生根率可达100%,平均生根数15.8条。[结论]该研究建立了盖杨高效组织培养再生系统,为该杨树品种的快速无性繁殖和基因的遗传转化提供了依据。     

油柿叶片离体再生体系的建立

 以油柿叶片为材料开展了离体培养研究，旨在建立其再生体系，为转基因操作奠定基础。结果表明，油柿叶盘在MS（1/2N）+IBA0.1mg/L+ ZT3.0mg/L培养基上，经前期暗处理3周后移至正常光照下培养的再生效果最好，其不定芽再生率和外植体平均不定芽数最高，分别为80.5%和（4.1±0.8）个。再生苗接种于添加IAA和IBA各0.5mg/L的MS(1/2N)培养基上，4周时生根率可达92%，成功地建立了油柿叶片的离体再生体系。     

光皮桦木质部cDNA-AFLP 技术体系的建立及应用

为了挖掘光皮桦材性相关基因,本研究以光皮桦木质部为材料,通过对RNA 的提取、cDNA 的反转录及纯化 的对比分析,以及选扩体系优化等,建立了相应的cDNA-AFLP 体系。结果表明:采用CTAB 和RNAiso 试剂相结合 的方法得到的RNA 质量较好,cDNA 经纯化后选扩效果明显变好。选扩体系为:4.0 μL 预扩产物(稀释40 倍)、1.6 μL 的引物(10.0 mmol/ L)、0.2 μL 的dNTP(2.5 mmol/ L)、0.4 μL 的Mg2 + (25.0 mmol/ L),以及0.2 μL 的Taq DNA 聚合酶(5 U/ μL)。进一步以来自不同木质化茎段的cDNA 为模板,筛选出31 对扩增效果较好的引物组合,同时分 离出一些差异表达的基因片段,经测序后探讨了其在木质化发育过程中可能的功能。      

光皮桦EST-SSRPCR反应体系的优化

为获得稳定的聚合酶链式反应（PCR）产物,采用正交设计L25（56）对光皮桦Betula luminifera表达序列标签一简单重复序列聚合酶链式反应（EST-SSR PCR）反应体系中的5个因素：DNA模板浓度,引物浓度,镁离子（Mg2＋）浓度．三磷酸碱基脱氧核苷酸（dNTPs）浓度和DNA聚合酶量进行优化,每个因素设计5个水平。优化试验结果表明：光皮桦EST-SSR最佳PCR反应体系：4．0mg·L-1DNA模板,0．500μmol·L-1引物,1．250mmol·L-1Mg2＋,0．250mm01·L-1dNTPs．0．0725×16．67mkat·L-1 rTaq酶。通过梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度。对优化出的EST—SSRPCR反应体系进行稳定性检测．结果均能获得稳定、清晰可辨的DNA谱带。图6表3参15     

英国薰衣草叶片再生体系的建立

为开展薰衣草转基因研究工作,本试验以英国薰衣草（Lavandula angustifolia Mill.）为材料,建立了以叶片为外植体的不定芽再生体系.研究了叶片消毒时间、生理状态、不同浓度6-BA 0.5,1.0,1.5,2.0 mg/L和不同浓度IAA 0,0.5,1.0 mg/L等因素对叶片再生的影响,结果表明：以顶部成熟叶片为外植体,经0.1%升汞消毒2 min后置于分化培养基1/3MS ＋6-BA 1.0 mg/L上,15 d后芽分化率达80.0%以上.待小芽长至1～2 cm后将其转到1/2MS ＋IAA1.0 mg/L培养基上生根,得到完整再生植株.     

川北白云山地区不同密度下亮叶桦人工林群落结构和物种多样性

【目的】对川北白云山地区20年生亮叶桦Betule luminifera不同密度人工林群落结构及物种多样性进行探究,以期为该区亮叶桦人工林可持续经营提供依据。【方法】采用典型样地法,分别选择川北白云山地区现存的低密度(1 050~1 150株·hm~(-2))、中密度(1 450~1 550株·hm~(-2))及高密度(2 150~2 250株·hm~(-2))亮叶桦人工林群落作为研究对象,研究川北白云山地区不同密度下亮叶桦人工林群落结构和物种多样性特征。【结果】共记录到植物110种,隶属于52科91属。高、中和低密度下群落的物种数依次为59、42和57种;从群落结构来看,中、高密度下群落物种多集中于中径级,即胸径为[5,11)cm,低密度下群落物种多集中于高径级,即胸径为[11,17)cm,3种密度下群落物种的高度级结构相似,物种多集中于中高度级,即高度为[9,13)m;不同密度下群落各层次物种丰富度指数(D)、Shannon-wiener指数(H)和Simpson优势度指数(H')等均表现为乔木层灌木层草本层;在乔木层中,群落各物种多样性指数在中密度下最高,低密度次之,高密度最低;草本、灌木层D和H均表现为:低密度中密度高密度。【结论】中等密度(1 450~1 550株·hm~(-2))更利于川北白云山地区亮叶桦人工林多样性的维持及树种的自然更新。     

小叶桦种子萌发特性

对小叶桦种子萌发特性的研究表明，小叶桦种子千粒质量为（0.335±0.030）g，质量含水量为（10.34±0.02）%，活力为（87.2±5.9）%；天然种子有4个类型，其中健康种子（类型Ⅰ）所占比例为28.75%，其发芽率可达96.69%，其他类型种子均无萌发；种子萌发最适昼夜温度为25 ℃/20 ℃；每皿给水3、5、10 mL条件下，种子萌发率较高；去果皮有利于种子萌发，深埋或覆盖物均导致种子萌发率下降，泥炭土较适宜种子萌发。     

箭杆杨组织培养再生体系的建立

【目的】探讨常温下适宜箭杆杨试管苗腋芽增殖、生根的最佳培养条件。【方法】以MS培养为基本培养基,附加不同浓度的吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)以及6-氨苄基腺嘌呤(6-BA)组成试验培养基,对箭杆杨组织进行培养,观察其生根情况和愈伤组织诱导情况。【结果】箭杆杨脱分化最佳培养基为:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA,该条件下的愈伤组织诱导率为90%;不定芽分化诱导培养基为:1/2MS+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L6-BA,该条件下的诱导分化率为67.1%;芽增殖培养基为:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA,该条件下的增殖数为5.8;最佳生根培养基为:1/2MS+1.0 mg/L IBA,该条件下的生根率为81.3%。【结论】建立了箭杆杨组织培养再生体系,为其种质资源的试管保存奠定了基础。     

秦岭中段红桦次生林更新特征研究

【目的】研究秦岭中段红桦(Betula albo-sinensis)次生林的更新特征,为红桦林的近自然恢复提供理论依据。【方法】应用典型样地法,调查红桦次生林的更新状况,分析林下木本植物更新特征及生物和非生物因子对其的影响。【结果】更新层共有木本植物59种,其中乔木树种有25种,占所有木本植物总数的42.4%。更新的木本植物中以灌木种居多,优势种有箭竹(Fargesia spathacea)、悬钩子(Rubus corchorifolius)等,红桦在群落更新层中的优势地位不明显。红桦次生林木本植物幼苗在40～60cm高度级内数量最多,0～20cm高度级内分布很少。林下木本植物的更新方式以萌生为主。林分密度对木本植物幼苗、幼树更新密度的影响相似,即其更新密度均随着林分密度的增加呈先增加后减少的趋势。阳坡(南偏西40°)利于幼树生长,随着坡向转为阴坡,幼苗密度逐渐增加,而幼树密度呈不同程度的减少。海拔对红桦次生林林下木本植物的更新也有明显影响,当海拔从1 825m增加到2 449m时,幼苗密度下降,幼树密度增大;但当海拔增加到2 467m时,幼苗密度增加,幼树密度减少。【结论】秦岭中段的红桦次生林处于演替后期,林分更新能力较差。     

甘蓝根系再生植株技术研究

【目的】研究甘蓝根系再生植株技术,为小孢子单胚再生双单倍体(DH)植株当年快速扩繁提供参考。【方法】以甘蓝DH15-1A的根段为外植体,设置预培养后再进行共培养和直接共培养2种培养方式,共培养的培养基为MS+4.5mg/L 6-BA+6mg/L AgNO_3,再向其中添加不同质量浓度(0.045,0.03,0.025,0.018和0.015mg/L)的NAA,筛选适宜的培养方式和NAA质量浓度;选择根龄分别为15,20和25d的DH15-1A的根段在适宜培养基上培养,比较根龄的诱导效果;以DH15-1A、DH15-2B和DH15-3C无菌植株苗的须根作为外植体,分析基因型对植株再生的影响。【结果】采用直接共培养并选用MS+0.030mg/L NAA+4.5mg/L 6-BA+6mg/L AgNO_3培养基可获得甘蓝根段诱导培养的最佳效果,其中愈伤诱导率、外植体诱导率和不定芽诱导率均最高,分别达100.0%,90.0%和430.0%,培养3周后分化芽生长健壮,叶片翠绿;根龄20d外植体的愈伤诱导率最高,达96.0%,并且愈伤分化芽点多,芽点周围褐化少,外植体诱导率和不定芽诱导率均最高,分别为84.0%和420.0%。DH植株基因型是决定根系再生植株效果的一个主要因素,3个供试基因型中,以DH15-2B根段的再生效果最好,愈伤诱导率、外植体诱导率和不定芽诱导率分别为83.3%,76.7%和430.0%。【结论】选用DH15-2B基因型甘蓝20d的根段在MS+0.03mg/LNAA+4.5mg/L 6-BA+6mg/L AgNO_3培养基上培养,最有利于根段再生植株形成,植株再生率高达100%。     

黄瓜高频再生体系的建立

【目的】建立黄瓜的高频再生体系,为黄瓜种质的遗传转化奠定基础。【方法】分别以华北型黄瓜种质26号、欧洲型黄瓜种质14-1为材料,研究不同激素组合、AgNO3质量浓度、苗龄、子叶切割方式及外植体接种方式对黄瓜子叶节不定芽诱导的影响。【结果】华北型黄瓜种质26号再生的最适激素组合为4.0mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA+1.0mg/L AgNO3,再生率与再生系数分别可达85.00%和2.51;欧洲型黄瓜种质14-1再生的最适激素组合为3.0mg/L 6-BA+2.0mg/L ABA+1.0mg/L AgNO3,再生率与再生系数分别可达86.70%和2.77;5d苗龄的黄瓜子叶作为外植体时诱导不定芽的状态最佳;切除子叶端部2/3且基部附带有1mm子叶柄、以叶背向下子叶柄微插入的方式进行接种再生效率最高。【结论】建立了黄瓜种质14-1和26号材料的高频再生体系,再生率均可达85%以上。     

福建柏组织培养体系的建立及优化

【目的】探究福建柏不同外植体再生过程中最适激素配比,为建立福建柏组织培养体系提供技术支持。【方法】以福建柏鳞叶和茎段作为外植体,在饱和洗衣粉液浸泡20 min和体积分数75%酒精浸泡30 s条件下,研究体积分数0.1% HgCl₂浸泡不同时间(5,8,10,12,15 min)后的消毒效果;以福建柏鳞叶和茎段为材料,通过单因素试验,研究生长素（NAA和2,4-D）对不同外植体愈伤组织诱导的影响,再通过正交试验研究NAA、2,4-D、6-BA不同配比对外植体愈伤组织诱导的影响;以福建柏愈伤组织为材料,采用正交试验研究NAA、2,4-D、6-BA、KT对愈伤组织继代增殖的影响;以福建柏带芽茎段为材料,研究细胞分裂素6-BA对芽诱导和萌发的影响;以福建柏分化苗为材料,采用正交试验研究6-BA、2,4-D、KT对分化苗继代生长的影响;以福建柏无根苗为材料,研究无根苗扩增繁殖的效果。【结果】（1）福建柏鳞叶最适消毒配方为体积分数75%酒精30 s+体积分数0.1% HgCl₂ 10 min,污染率为16.67%;茎段为体积分数75%酒精30 s+体积分数0.1% HgCl₂ 15 min,污染率为23.33%。（2）鳞叶愈伤组织诱导最适配方为MS培养基+NAA 2.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,诱导率为81.67%;诱导出的愈伤组织白色近透明,长势良好。而茎段为MS培养基+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L,诱导率为78.33%,诱导出的愈伤组织淡绿色,长势良好。（3）愈伤组织最适增殖配方为MS基本培养基+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 2.0 mg/L+KT 0.5 mg/L,增殖质量为1.984 g,褐化率23.33%。（4）芽诱导萌发最适配方为MS基本培养基+6-BA 2.0 mg/L,平均诱导芽数2.05个,平均萌动数1.70个,分化率100%。（5）分化苗生长和扩繁的最适配方为1/2MS基本培养基+2,4-D 0.5 mg/L+KT 1.0 mg/L,平均生长长度为2.241 cm,无褐化,扩繁成活率为95.50%,扩繁系数为3.18。【结论】福建柏以带芽茎段作为芽增殖再生途径外植体,鳞叶作为愈伤组织再生途径的外植体进行组织培养效果最佳,长势好且稳定。     

大白菜真叶高频再生体系的建立

【目的】建立大白菜真叶高效再生体系。【方法】选择‘06J28’、‘92S105’、‘06J30’、‘06J31’4种不同基因型大白菜作为试验材料,以刚长出第2片真叶的大白菜幼苗的第1片真叶为外植体,研究不同激素(6-BA、NAA、TDZ)组合、外植体切割与接种方式以及不同基因型对真叶不定芽再生的影响。【结果】在MS+4.0mg/L 6-BA+0.14mg/L NAA培养基上培养时,‘06J28’真叶不定芽再生率和再生系数达到最大分别为87.63%和2.62;在MS+0.3mg/L TDZ+0.14mg/L NAA培养基上培养时,‘06J28’真叶不定芽的再生率和再生系数分别为80.73%和1.89,表明TDZ的作用与6-BA相似。在真叶柄基部和下胚轴交接处横切,保留完整真叶作为外植体为最佳切割方式,以真叶柄的下端竖直向下插入培养基为最佳接种方式。在供试的4种基因型材料中,‘06J28’真叶的再生率最高,达87.63%;‘92S105’的再生系数最高,达3.76。【结论】建立了大白菜真叶高效再生体系,为大白菜转基因研究奠定了基础。     

西南桦幼林生长与枝条发育对光环境的响应

目的 模拟系列密度西南桦Betula alnoides林分冠层光环境开展树冠遮阴试验,探究光环境对西南桦林木生长和枝条发育的影响,为合理配置造林密度进而实现西南桦优质大径材高效培育提供理论依据。方法 在系列造林密度试验基础上,以5年生、造林密度为4 m×4 m西南桦试验林的优势木和亚优势木为对象,设置3个遮阴梯度处理：遮阴率40%~45%、55%~60%和80%~90%,以无遮阴作对照(CK),依据西南桦物候期,于10月中上旬开始对下部2/3树冠进行遮阴处理,每隔3个月(或半年)调查参试单株的生长和枝条发育情况。结果 西南桦各处理间的树高和胸径在各调查时间段和整个试验期内的增量均差异不显著 (P≥0.05),胸径在1—4月份生长最快,各处理的胸径增量均超过0.73 cm。除2018年4—7月份期间枝条长度增量外,枝条发育在各时间段和整个试验期内均受遮阴显著影响(P<0.05),表现出随遮阴率的增加枝条直径、长度增量呈显著降低趋势,在生长旺季(1—4月份)差异更加明显,CK组的枝条直径和长度增量分别为遮阴率80%~90%处理的1.74和1.78倍,达到1.197 mm和0.135 m。此外,西南桦幼林自然整枝率亦表现出随遮阴率增加而明显增大的趋势,其自然整枝集中发生在4—7月份,整枝率增量均超过47%。结论 适宜的高造林密度形成的弱光环境对西南桦幼林单株生长影响较小,但是可以显著控制枝条发育,促进自然整枝。生产上适当提高西南桦造林密度有利于其优质大径级无节材的高效培育。     

小麦条锈菌MFLP分子标记体系的建立与优化

【目的】建立并优化小麦条锈菌的MFLP技术体系。【方法】以小麦条锈菌混合菌种为材料,通过对DNA提取、限制性内切酶2次酶切、PCR双重扩增等试验因素的选择优化,建立适用于小麦条锈菌的MFLP分析体系。【结果】改良的CTAB/SDS法有较好的破壁效果,所提取的DNA品质良好,完全符合MFLP的操作要求。优化确定的最佳MseⅠ酶切反应时间为4h,预扩增最适退火温度为55℃,选择性扩增使用的模板为预扩增产物的100倍稀释物,其最适退火温度为58℃。【结论】建立的MFLP技术体系可提供清晰、稳定的MFLP指纹图谱,为小麦条锈菌等专性寄生菌的群体遗传学与流行学研究提供了新的技术手段和方法。