斜纹夜蛾核型多角体病毒安徽和县株系细胞凋亡抑制相关基因的克隆与遗传变异

为分析核型多角体病毒(NPV)分离株内细胞凋亡抑制相关基因的多态性,从安徽和县采集感染病毒的斜纹夜蛾病虫,分离出斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus,Splt NPV)15个活体克隆株系,研究其细胞凋亡抑制基因(IAP)和P49基因多态性。发现15个Splt NPV安徽和县克隆株系中的IAP基因序列均无差异,且与已报道的Splt NPV中国G2株的同源性达100%;Splt NPV各克隆株系中的P49基因序列也无差异,且与Splt NPV中国G2株的P49基因同源性达99%。表明Splt NPV安徽和县株系IAP和P49基因均较为保守,没有表现出遗传变异。     

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒对东方粘虫痘病毒的增效作用

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrosisvirus,AcMNPV)能够增强粘虫痘病毒(Pseudaletia separata entomopoxvirus,PsEPV)的侵染力。将两种病毒的混合悬液滴于50mg的饲料上,接入3龄末东方粘虫(Mythimna separata)的幼虫进行生物测定。当每头幼虫接入1.0×10~4 OBs的AcMNPV和1.0×10~7 OBs的PsEPV的混合液时,幼虫的死亡率为95.00%,而单独用1.0×10~7 OBs·虫~(-1)AcMNPV处理时,则幼虫不感染;单独用1.0×10~7 OBs·头~(-1)PsEPV处理时,只获得46.33%的死亡率。将AcMNPV多角体蛋白与病毒粒子分离,进一步测定,单独用1.0×10~6 OBs·虫~(-1) PsEPV侵染3龄末幼虫时,幼虫不被感染,而用同样浓度再混以AcM- NPV多角体蛋白或病毒粒子时,则会有41.67%和36.67%的死亡率,说明多角体蛋白或是病毒粒子的包涵体蛋白是产生增效作用的重要因子。     

6种日本核型多角体病毒对斜纹夜蛾幼虫致病性的研究

从日本引进6种核型多角体病毒(NPV),保存5年后仍对斜纹夜蛾幼虫持有致病性。其中斜纹夜蛾核型多角体病毒(福山株)、甘蓝夜蛾核型多角体病毒(芸北株)、粘虫核型多角体病毒(芸北株)、八字地老虎核型多角体病毒(那须株)均保持较强的致病力,其剩余侵染力在1/1.34~1/2.50间。甘蓝夜蛾核型多角体病毒(东京株)的致病力下降最大,剩余侵染力为1/17.5、其次为海灰翅夜蛾核型多角体病毒(埃及株),剩余侵染力为1/7.01。     

异源多角体蛋白包装对重组家蚕核型多角体病毒感染性的影响

 将 Ac MNPV的 polh基因克隆到缺失 polh基因的 Bm NPV(API4)基因组中 ,得到被 Ac MNPV多角体蛋白包埋并可表达慈菇蛋白酶抑制剂的重组病毒 Bm NPV(OAc- API4)。发现它的芽生型病毒能感染家蚕细胞和经皮下注射感染家蚕幼虫 ,但包埋型病毒不能经口感染家蚕幼虫。     

棉铃虫核型多角体病毒(NPV)防治制种玉米棉铃虫幼虫田间药效试验

在甘肃省临泽县沙河镇花园村进行了棉铃虫核型多角体病毒(NPV)防治制种玉米棉铃虫幼虫田间药效试验。结果表明:棉铃虫核型多角体病毒(NPV)以1 000～1 200 ml/hm2喷雾防治制种玉米棉铃虫幼虫,防效在86%以上。     

豆天蛾核型多角体病毒和雀纹天蛾核型多角体病毒光解酶基因的功能鉴定

为研究豆天蛾核型多角体病毒(Clbi NPV)和雀纹天蛾核型多角体病毒(Thja NPV)的光解酶是否具有修复由紫外线辐射引起的DNA损伤的功能,本试验分析了2种光解酶基因对大肠杆菌和家蚕(Bm)细胞抵御紫外线能力的影响。结果显示,来源于Thja NPV的野生型光解酶基因(Thjaphr)的表达显著提高了大肠杆菌的光修复能力,而来源于Clbi NPV的突变型光解酶基因(Clbiphr)没有光修复功能。在紫外线处理的Bm细胞中,野生型及突变型光解酶基因均没有表现出光修复活性。亚细胞定位结果显示,Thjaphr及Clbi NPV光解酶基因大的开放阅读框(Clbiphr2)定位于家蚕细胞的细胞核,小的开放阅读框(Clbiphr1)仅在细胞质中积累。     

甘蓝夜蛾核型多角体病毒(MbNPV)侵染宿主细胞的电镜观察

本文介绍了用电子显微镜观察甘蓝夜蛾核型多角体病毒(Mamestra brassicae L.NPV)感染宿主幼虫的组织病变和病毒复制过程.发现脂肪、体壁、气管组织对MbNPV最敏感.核仁膨大,染色质单个或多个在其中产生并在核膜附近获得囊膜,装配成病毒粒子和病毒束.具有囊膜的核衣壳随机地嵌入多角体蛋白中,形成完整的多角体.细胞核膨大,核膜内陷,核解体,整个细胞充满多角体.而中肠、神经节、马氏管和肌肉组织对MbNPV敏感性差,于感病后期形成小而不规则的多角体.     

天幕毛虫核型多角体病毒对天幕毛虫幼虫的致病机理

用天幕毛虫核型多角体病毒(Nucleus polyhedrosis virus,NPV)感染天幕毛虫(Malacosoma neustriatestacea Motschulsky)幼虫,对其致病机理的研究表明:该病毒可以侵染和破坏天幕毛虫的中肠细胞,在中肠组织细胞中均能观察到形成的多角体。幼虫取食核型多角体病毒100 h后,在光学显微镜下可见细胞核内出现多角体形成,细胞核开始增大;取食130 h后,中肠组织细胞间出现缝隙,细胞核内多角体数量增多;取食160 h后,中肠细胞的细胞核进一步增大,个别细胞核增大至整个细胞的1/3以上,与正常天幕毛虫幼虫相比,整个虫体出现软化;取食190 h后,中肠细胞受到严重破坏,细胞结构模糊不清,中肠内食物极少并有许多游离的核型多角体存在;取食220 h后,天幕毛虫幼虫的中肠和其他组织完全受到破坏。     

基因重组核型多角体病毒AcMNPV对东方粘虫的毒力作用

采用小滴饮下法，研究了基因重组核型多角体病毒AcMNPVAaIT和野生型核型多角体病毒AcMNPV-C6对东方粘虫(Pseudaletia separata)的病原性，并添加感染增效物质，研究其增效作用。结果表明，AcMNPVAaIT比AcMNPV-C6具有更强的病原性，被感染昆虫死亡率高，致死时间短；添加的感染增效物质Fluorescent brightener28具有较强的感染增效作用。     

粘虫核型多角体病毒的研究——I.毒力的生物测定

<正> 利用病毒防治害虫,已成为综合防治中有发展前途的方法之一.粘虫核多角体病毒已成功地用于大田防治,病毒的应用效果,主要决定于它的生物活性.而其生物活性受各种因素的影响,只凭多角体的数量来估计病毒的活性是不准确的,必须进行生物测定.我们用本所分离的粘虫核多角体病毒涂在天然饲料上饲养各龄幼虫使受感染,然后测定1—6龄粘虫的幼虫敏感性.并根据不同虫龄的敏感性,将病毒稀释成五种浓度,梯度为各相距两倍,对一龄幼虫进行了毒力的生物测定.现将生物测定方法和结果报道如下.     

Use of Ultrastructuke and DNA Hybridization to Detect Replication of the Nuclear Polyhedrosis Virus in Midgut Cells of Homologous Host

It was controversial issue if nuclear polyhedrosis virus(NPV)could replicate in idgut cells of host larvare from Lepidoptera by now.The replication of Mythimna separata NPV(MsNPV)in M.separata larvae midgut cells was studied by ultrastructural and DNA hybridized techniques.The paper demonstrated that the MsNPV could neither infect midgut cell nor replicate in midgut cell of homologous host.Therefore MsNPV virions released from the virial occlusion bodies were considered as direct penetration though the intercellular spaces of midgut cells to hemocoel of the host larvae.     

高产能源植物绿玉树品系间差异研究Ⅰ品系间生长速度差异

为揭示绿玉树品系间生长速度的差异,选择快速生长的品系,对海南岛绿玉树天涯海角等7个品系扦插后的单株鲜重增长率和单株分枝数增长率进行了研究.结果表明:扦插后86 d,绿玉树的单株鲜重增长率品系间存在显著或极显著差异,其中以海大4号的单株鲜重增长率最高、达403.2%,且极显著高于天涯海角、显著高于海大2号;品系间的单株分枝数增长率也存在显著或极显著差异,其中以海大3号的单株分枝数增长率(970.3%)最高,其次为海大2号(856.3%),两者均极显著高于天涯海角、显著高于昆明,而单株分枝数增长率居第3位的是海大5号(739.2%)也极显著高于天涯海角.     

不同类型油菜品种(系)光合生理指标与产量之间关系的研究

[目的]对不同类型油菜(Brassica L.)品种(系)的光合生理指标与产量的关系进行研究,揭示不同油菜品种的光合特性。[方法]选择青海省主栽油菜品种(系),甘蓝型油菜(Brassica napus L.)杂交种为青杂7号、青杂5号、青杂3号、青杂2号,白菜型油菜(Brassicacampestris L.)为青油241,甘蓝型油菜为青油14和No.46,芥菜型油菜(Brassica juncea L.)为青海芥菜。[结果]不同类型油菜品种(系)各生育期净光合速率均与单株产量呈极显著或显著正相关。苗期时甘蓝型常规种青油14、白菜型油菜青油241和芥菜型油菜青海芥菜蒸腾速率与单株产量之间呈现极显著相关;盛花期时只有白菜型油菜青油241的蒸腾速率与单株产量之间呈现极显著相关;而在角果期各品种(系)油菜的蒸腾速率与产量之间均无相关性。单位面积叶片的净光合速率对产量的影响大于蒸腾速率。[结论]在油菜品种选育中可把净光合速率作为一个重要的选择指标。     

粘虫核型多角体病毒感染特性的研究

对东北农业大学昆虫学教研室分离出来的粘虫核型多角体病毒Ｖ－Ｍｓ－４毒株进行初步研究，结果表明，病毒多角体呈近圆形、四角形、六角形和不规则形，大小在１．１６～２．８６μｍ之间，病毒粒子为３８９～４６７μｍ×４０～６８μｍ，为多粒包埋，病毒在粘虫消化液作用下，１０ｍｉｎ失去折光性，３０ｍｉｎ内完全被溶解，释放出病毒粒子；消化液能使释放出的病毒粒子在１５ｍｉｎ内失活；寄主的脂肪、气管基质及表皮组织为感染病毒的敏感组织，感染后脂肪和血淋巴蛋白的含量比健康幼虫明显降低，未见病毒侵染中肠的现象。     

鸡新城疫病毒感染不同细胞的病变特性研究

为了探讨鸡新城疫病毒(Newscastle disease virus,NDV)感染不同细胞的病变特性,选用NDV强、弱毒株感染鸡胚成纤维细胞(DF-1)、仓鼠肾细胞(BHK-21)和人宫颈癌细胞(HeLa).结果表明:NDV强毒株在DF-1、BHK-21、HeLa上均能增殖,在DF-1、BHK-21、HeLa上产生的细胞病变(cytopathic effect,CPE)以发生细胞融合和形成合胞体为主要特征,在DF-1上增殖速度较快,HA效价也高;NDV弱毒株含10μg/mL胰蛋白酶的DMEM培养基上,DF-1、BHK-21、HeLa可引起细胞变圆、脱落,没有典型的CPE,盲传15代CPE特征未发生改变,血球凝集(HA)效价较低.可见,NDV在其种属来源相同的DF-1中更适宜增殖,DF-1可用作NDV感染的最佳细胞模型.     

Experimental Researches on Carcinogenesis or Tumorigenicity of MDCK Canine Kidney Cell(CKC) Lines and Analysis of Their Chromosome Karyotypes

The chromosomal number variations & structural aberrations of the MDCK cell line, primary feline or canine kidney cell(FKC or CKC) and Hela cell line were investigated and their karyotypes of conventional chromosome bands were analyzed. The carcinogenesis or tumorigenicity testing of these cell lines in about 232 nude mice and for colony formation in soft agarose and for haemagglutination under different concentration of plant lectins of these cells were carried out. Under the prerequisite that the incidence of cancer or tumor in negative-control nude mice inoculated subcutaneously with primary feline or canine kidney cell cultures purified in vitro at passage 3 was 0 (0/22) and 0 (0/10), respectively. The incidence of the progressively-growing malignant tumor(MT) in positive-control nude mice inoculated subcutaneously with Hela cell cultures of KB, X, or NM20/X strain was 10/10, 25/25 and 5/51, respectively. The results showed that the incidence of tumor in nude mice with tetrapioid YA strain of MDCK cell during 20 - 45 passages, with hypodiploid JB strain of MDCK cell on passage 25, with di-and hypoploid JC strain of MDCK cell during 2 - 15passages or with hypoploid M strain of MDCK cell during 9 - 27 passages was 28/58, 1/5, 4/18 and 0/31,respectively. The chromosomal analysis results showed that the ratio of difference in the rate of modal chromosome number between high (mcs + n) and lowest (mcs)passages was not more than 5 % - 15 % and the structure aberrations was generally 0 - 3%. These results proved that the genetic characteristics of chromosomal number of cell lines determines their tumorigenicity, but it is species-specific. MDCK line has tumorigenicity no matter what its chromosome karyotype is, at least it has very low tumorigenicity even when its modal chromosome number is hypoploid. The repeatedly frozen, thawed and split controls of tumorigenicity-positive cell lines(X strain of Hela, M strain of BHK-21, JA strain of Vero, YA strain of MDCK) have much lower tumorigenicity or are even non-carcinogenesis, and the repeatedly frozen, thawed and split controls of very low tumorigenicity cell lines (M or JC strain of MDCK) are certainly non-carcinogenic and never have increased tumorigenicity.It is thus evident that MDCK cell of M, JB or JC strain can be approved as substrate for the preparation of attenuated viral vaccines, but MDCK cell of YA strain can not be approved as substrate for the preparation of comattenuated viral vaccines. In summary, all strains of MDCK cell line have tunorigenicity, at least have low tumorigencity, never have non-cancinogenic MDCK, but very low tumorigenicity MDCK cell strains can certainly be used for the approval production of canine viral vaccines if the DNA content in viral cell cultures was remarkably decreased through conventional means in manufacturing process. Therefore, the master cell stock and working cell bank of MDCK line used for vaccine manufacture were established in China, which are free of infectious agents, and described with respect to cytogenetic characteristics and tumorigenicity. Tests showed that there were correlations among cell line chromosome number variations, anchorage independence in soft agarose, haemagglutination under plant lectins, and tumor-forming ability in nude mice, thus all the in vitro tests are economic, simple and reliable means for monitoring the tumor-forming ability of MDCK line in nude mice.     

水稻高代回交导入系优良株系抽穗扬花期耐冷性鉴定

[目的]从水稻高代回交导入系优良株系中筛选在抽穗扬花期耐冷性强或极强的株系,为抽穗扬花期耐冷水稻品种的育成打下基础.[方法]利用人工气候室控制的低温条件,测定146份水稻高代回交导入系优良株系在抽穗扬花期经平均温度18℃低温连续处理5d后的结实率,以相对结实率为鉴定指标进行耐冷性评价.[结果]从146份高代回交导入系优良株系中鉴定出在抽穗扬花期耐冷性极强(1级)、强(3级)、中(5级)和弱(7级)的株系材料分别有3、19、89和35份,分别占供试株系材料的2.06%、13.01%、60.96%和23.97%,无耐冷性极弱(9级)的株系材料.供试材料中,以籼稻优异种质为供体的高代回交导入系材料蕴含更多抽穗扬花期耐冷基因,以桂649为背景的株系材料耐冷性强于以测253为背景的株系材料,以中农127、中农128、中农139、中农143、中农145和中农146为供体的高代回交导入系出现耐冷性强或极强株系材料的频率较高.[结论]筛选出22份具有强恢复系遗传背景且耐冷性强或极强的优良株系,可作为优良耐冷亲本在水稻耐冷育种中应用.     

不同杂种优势群玉米籽粒灌浆速率分析

【目的】研究不同杂种优势群玉米自交系籽粒灌浆速率的特性,筛选灌浆速率快的自交系,为高产玉米杂交种的选育提供借鉴。【方法】采用烘干法测定173份玉米自交系在授粉后10、20、30和40 d籽粒灌浆速率以及6个相关性状。应用SAS软件对灌浆速率在年际、自交系、取样时间、重复、年际×自交系、自交系×取样时间、年际×自交系×取样时间进行联合方差分析。应用SPSS软件对灌浆速率及其相关性状如10、20、30和40 d苞叶的含水率、苞叶数、40 d穗轴含水率、穗轴长、穗轴粗及40 d籽粒含水率进行相关分析。利用均匀覆盖玉米全基因组的210对SSR标记对试验材料进行全基因组扫描,通过Structure V2.3.4软件分析其群体结构。对不同杂种优势群平均籽粒灌浆速率进行方差分析,并筛选出各个群中籽粒灌浆速率快的自交系。【结果】表型分析结果表明,在P=0.01水平上,籽粒灌浆速率在不同年际、自交系、取样时间、自交系×取样时间、年际×自交系×取样时间上存在极显著差异,而重复、年际×自交系间差异不显著。通过对不同自交系籽粒灌浆速率与其相关性状间相关分析,发现10 d籽粒的灌浆速率与20 d的灌浆速率在0.01水平上达到了极显著的正相关（0.515）,与40 d的灌浆速率和籽粒的含水率在0.01水平上达到了极显著的负相关（-0.198,-0.228）;20 d的籽粒灌浆速率只与40 d籽粒含水率在0.05水平上达到了显著的负相关;在授粉后30和40 d,籽粒的灌浆速率与40 d穗轴的含水率、穗轴粗以及40 d籽粒的含水率、30和40 d苞叶含水率在0.01水平上达到了极显著正相关,30 d籽粒的灌浆速率与10 d苞叶含水率达到了显著正相关;40 d籽粒的灌浆速率与20 d苞叶的含水率达到了显著地正相关。群体结构分析表明,参试自交系分成P、旅大红骨、瑞德、兰卡斯特和塘四平头5个杂种优势群。兰卡斯特和塘四平头群在0.05水平上没有显著差异;瑞德、P群和旅大红骨群间同样不存在显著差异（P=0.05）;而兰卡斯特、塘四平头群与瑞德、P群、旅大红骨群间则存在显著差异。对各群内自交系间进行多重比较,各群内自交系间灌浆速率在0.05水平上差异均不显著。试验共筛选到33个灌浆速率高于0.8 g•100 grain-1•d-1的自交系,其中瑞德群有13个,P群、旅大红骨、兰卡斯特、塘四平头群分别有9、6、3、2个自交系。【结论】不同玉米自交系籽粒灌浆速率存在较大差异,杂种优势群间的灌浆速率变化节奏不同,P群、旅大红骨、瑞德的表现快-快-慢的节奏,兰卡斯特、塘四平头的表现快-慢-慢的节奏。     

水稻细胞悬浮系及其单细胞培养的研究

以水稻的不同遗传型材料的幼穗为外植体诱导愈伤组织,通过继代培养,最终筛选出了来自于品系“１４５”的胚性愈伤组织．在附加１．５～２．０ｍｇ／ｌ２,４—Ｄ的ＮＭＢ固体培养基上继代７次后,转入同种液体培养基上进行悬浮继代培养,由此形成的悬浮系是由单细胞和小细胞团组成的．倒置显微镜下几乎观察不到管形细胞,细胞的成活率达９０％以上．未发现酵母抽提物对细胞悬浮培养具有促进作用．在液体培养基中附加６００ｍｇ／ｌ的肌醇能够大大提高愈伤组织的分散程度,从中分离出的单细胞经初步培养再生了愈伤组织．     

生育期冷水灌溉对寒地水稻主要农艺性状的影响

应用75个水稻品种(系),研究了生育期冷水灌溉对寒地水稻主要农艺性状的影响.结果表明,在主要农艺性状中,结实率的冷水反应指数(CRI)值相对较小,受低温冷害程度较大,穗粒数和秆长的CRI值相对较大,低温冷害对其影响较小;相关分析表明:穗颈长和结实率的CRI值与秆长的CRI值均呈极显著正相关,穗长的CRI值与秆长的CRI值呈显著正相关;穗颈长的CRI值与结实率的CRI值呈极显著正相关;穗粒数的CRI值与穗长的CRI值呈显著正相关.