哺乳动物胚胎冷冻保存研究进展

哺乳动物胚胎冷冻保存效果受冷冻保护剂、冷冻方法、解冻方法等多种因素影响,其中冷冻方法是一个关键性因素.目前胚胎冷冻方法主要有常规慢速冷冻法和玻璃化冷冻法两种.常规慢速冷冻法是指利用甘油、乙二醇等做冷冻保护剂通过缓慢降温的方式进行胚胎冷冻;玻璃化冷冻法是指利用高浓度的冷冻保护剂通过快速降温的方式进行胚胎冷冻.与常规慢速冷冻法相比,玻璃化冷冻法简化了操作过程,大大缩短了操作时间,不需昂贵的程序控制冷冻仪.     

哺乳动物胚胎冷冻保存技术的研究进展

哺乳动物胚胎冷冻保存效果受冷冻保护剂、冷冻方法、解冻方法等多种因素的影响,其中冷冻方法是一个关键因素.这项技术的应用需要保证胚胎在冷冻和解冻后具有较高的成活率.自1972年小鼠胚胎冷冻保存获得成功以来,许多学者在简化冷冻程序、缩短冷冻时间等方面进行了深入研究.胚胎冷冻保存技术的应用更加广泛,对胚胎生物工程和其他生物技术产生了推动作用.文章对胚胎冷冻保护剂、冷冻方法及冷冻胚胎的解冻等进行了综述.     

牛胚胎冷冻技术的实用化研究

采用不同的冷冻程序，不同的植冰温度，不同的冷冻保护剂，不同的解冻液及不同的解冻方式对牛胚胎冷冻及解冻技术的各个环节进行研究，目的是选择简便，高效的牛胚胎冷冻方法，综合冷冻过程，减少冷冻，解冻中对胚胎的损伤，提高胚胎解冻成活率和移植妊娠率。     

家畜胚胎冷冻保存研究现状

本文对家畜胚胎冷冻保存的原理、冷冻方法、冷冻保护液的成分、胚胎解冻方法与冷冻保护剂的脱除等研究现状进行了综述。     

牛胚胎冷冻技术的研究

本文采用不同的冷冻程序，不同的植冰温度，不同的冷冻保护剂，不同的解冻液及不同的解冻方式对牛胚胎 冷冻及解冻技术的各个环节进行了研究，目的是选择简便，高效的牛胚胎 冷冻方法，缩短冷冻过程，减少岭冻，解冻中对胚胎的损伤，提高胚胎解冻成活率和移植妊娠率。     

简单而有效的哺乳动物胚胎玻璃化冷冻方法

简单而有效的哺乳动物胚胎玻璃化冷冻方法王海彦朱士恩译１前言如果胚胎可以有效地进行冷冻保存，那么这项技术将可应用在多种哺乳动物如家畜、实验动物、野生动物以及人。然而，在胚胎冷冻和解冻过程中都存在好多会使胚胎受到损伤的因素。如：抗冻保护剂的毒性；冷冻损伤...     

牛胚胎玻璃化冷冻保存技术及国内近期研究进展

本文就胚胎玻璃化冷冻保存的原理、冷冻保护剂的作用和冷冻方法及近期国内牛胚胎玻璃化冷冻的研究进展情况进行了详细的综述.     

动物胚胎冷冻保存技术的研究进展

自 2 0世纪 70年代小鼠的胚胎成功冷冻以来 ,在动物胚胎冷冻保存方面进行了广泛的研究。目前 ,胚胎的冷冻保存已成为胚胎移植的常规技术环节之一。本文就动物的胚胎冷冻保存的原理、冷冻保护剂的选择和主要的冷冻方法及影响冷冻效果的因素等方面进行了详细的综述。并就各冷冻方法的优缺点进行了探讨 ,旨在使胚胎冷冻保存技术在畜牧业生产中得到更为广泛的应用和推广。     

ε-聚赖氨酸在牛胚胎玻璃化冷冻中的保护作用

通过研究ε-聚赖氨酸(ε-PL)对牛胚胎玻璃化冷冻的影响,探讨ε-PL在牛胚胎玻璃化冷冻中的保护作用,为优化牛胚胎玻璃化冷冻技术提供依据。单独以ε-PL作为冷冻保护剂,其质量浓度为20、35、50g/L,分别进行胚胎冷冻,结果均不能取得成活胚胎,说明ε-PL不能单独作为冷冻保护剂使用。在传统玻璃化冷冻剂中分别添加质量浓度为10、20、30g/L的ε-PL进行胚胎冷冻,结果发现添加ε-PL之后的冷冻保护液具有更好的保护效果,且ε-PL质量浓度为20g/L时效果最好,囊胚解冻孵化率可达42.37%。进一步探索了用该冷冻保护剂,缓冲时间分别为5、7.5、10min进行胚胎冷冻的效果,结果发现缓冲时间为7.5 min取得最高孵化率,孵化率为46.58%。结果表明,ε-PL对牛胚胎玻璃化冷冻具有一定的保护作用,且适当延长缓冲时间可取得更好的冷冻效果。     

猪胚胎冷冻技术研究现状与分析

本文论述了猪胚胎冷冻技术发展过程，并分析了胚胎冷冻的可能性原理、猪胚胎对低温的敏感性与影响胚胎冷冻成功率的因素等，得出如下结论：（１）猪胚胎对低温较其它畜种敏感的原因是其胚胎内脂肪含量高于其它畜种。（２）目前适于冷冻的胚胎仅限于孵化前后胚胎。（３）慢速冷冻已基本成功，选用１．５Ｍ甘油作冷冻保护剂，－６￣－７℃植冰，植冰前降温速度１℃／ｍｉｎ，植冰后０．３℃／ｍｉｎ，投氮温度－３５￣－３８℃。（４）     

奶牛冷冻胚胎分割和分割后半胚冷冻技术

用简易分割方法,分割奶牛冷冻胚胎16枚,获得半胚32枚,分割成功率为100％(16/16),可移植半胚29枚,移植于16头受体牛,到第3个情期未返情者经直肠检查有6头妊娠,妊娠率为37.5％(6/16)。其中,在分割前或者分割后经恢复培养0.5～2h再移植的10头受体牛,5头妊娠;而未经恢复培养,分割后直接移植的6头受体牛中,只有1头妊娠。移植后3个月,直肠检查确定2头流产。已有1头受体黄牛生出1头奶牛牛犊(母)和1头受体奶牛产1头奶牛牛犊。其余的2头妊娠受体牛将于9月份产犊。此外,用简易分割法分割奶牛胚胎5枚,得到半胚10枚,裸半胚直接冷冻,解冻后回收可移植半胚5枚,移植于4头受体牛,无一头妊娠。结果表明,冷冻胚胎的分割半胚优于分割后冷冻半胚移植效果;冷冻胚胎分割前或者分割后恢复培养移植优于未经恢复培养而直接移植;简易分割法可应用于冷冻胚胎的分割。     

影响水牛体细胞克隆胚胎移植的因素

从不同发情方式、不同胚胎类型、不同胚龄以及不同季节来探讨影响水牛体细胞克隆胚胎移植的效率。结果显示,自然发情与同期发情方法对水牛体细胞克隆胚胎的移植受胎率有显著影响。鲜胚和冻胚移植后受胎率没有显著差异,其受胎率分别是9.79%、14.5%。在移植中,不论是鲜胚还是冻胚,6日龄胚胎移植受胎率最高。而且不同日龄(5、6、7、8～10d)克隆胚胎移植受胎率差异不显著(鲜胚P=0.260 7,冻胚P=0。065 2)。克隆胚胎在秋季移植时受胎率最高,受胎率是16.06%,比其他季节高,且差异显著(P<00.05).其次是春季,但夏季和冬季克隆胚胎移植后受胎率差异不显著(P>0.05)。结果表明,水牛体细胞克隆胚胎在胚胎移植中是可行的,但效率比较低。     

胚胎分割技术在肉牛繁育中的研究与应用

本试验采用弗莱维赫肉牛和日本和牛作为供体,本地黄牛为受体,进行同期发情和超数排卵,共得到可用胚胎234枚,分为4个处理:新鲜全胚113枚、新鲜双半胚55枚、冷冻全胚56枚和冷冻双半胚10枚,进行移植。结果表明,新鲜双半胚的妊娠率为65.45%,略高于新鲜全胚移植的妊娠率(63.72%),差异不显著(P＞0.05)。冷冻双半胚产犊率为20.00%,低于冷冻全胚移植的妊娠率(39.29%),差异不显著(P＞0.05),而冷冻组的妊娠率均显著低于新鲜组(P＜0.05)。新鲜双半胚的产犊率为95.56%,双犊率为35.55%,犊牛存活率为72.09%。新鲜全胚组的产犊率为63.16%,显著低于新鲜双半胚组(P＜0.05),但犊牛存活率却显著高于新鲜半胚组(90.00%和72.09%)(P＜0.05)。此外,全胚与双半胚移植后产生的犊牛初生重之间并无显著差异(P＞0.05)。     

小鼠胚胎冷冻保存及复苏的试验研究

为探讨提高人胚胎冷冻的操作技术水平及进行冷冻实验室质量控制的有效方法，采用慢速冷冻及快速融解复苏的方法对小鼠2－细胞胚胎进行冷冻，复苏后培养72h，通过胚胎的囊胚率来评价冷冻技术和进行质量控制。结果表明，本实验在人胚胎冷冻、复苏条件下，共冷冻小鼠胚胎140个，复苏存活率为89.29%，囊胚率为78.57%，获得较为理想的冷冻复苏效果。因此认为应用小鼠2－细胞胚胎进行程序冷冻及复苏是提高人胚胎冷冻技术水平及进行质量控制的良好方法。     

娟姗牛与荷斯坦牛X-性控冷冻精液试验研究效果分析

采用娟姗牛与荷斯坦牛X-性控冷冻精液,给娟姗母牛、荷斯坦母牛及胚胎移植供体进行人工授精,以探索两种冷冻精液人工授精受胎效果及供体牛生产胚胎效果。研究结果表明,人工输精试验牛情期受胎率及供体母牛的平均可用胚胎数和可用胚胎率受公牛X-性控冷冻精液的影响;人工输精试验牛的受胎率青年牛优于经产牛,而荷斯坦牛的优于娟珊牛;生产胚胎的供体牛,综合可用胚胎数和可用胚胎率,在同一品种上青年牛的效果优于经产牛,在不同品种而同一年龄上的荷斯坦牛优于娟珊牛。     

Cryosurvival and pregnancy rates: One‐step protocol for freezing–thawing Shangri‐la Yak (Bos grunniens) Embryos

The yak is one of the most important and economically useful animals for highlanders. The decline in the yak population requires effective measures for the conservation and multiplication of elite germplasm. A standardized protocol will simplify the freezing and warming of yak embryos in straw and facilitate embryo transfer. In this work, we investigated a one‐step protocol that uses a stable basal medium, which comprised a warming medium (1.08 M sucrose) and a freezing medium (EFS40). We also assessed the effects of the new transfer method on embryo survival. A total of 145 yak frozen embryos were thawed in a standard medium system. The one‐step protocol led to a high recovery percentage (84.93) of yak embryos that survived vitrification and warming. The in vitro survival rates of these embryos significantly different from those of embryos frozen–thawed via the conventional method. The 95 embryos frozen–thawed via our one‐step protocol were then implanted in selected recipients. Thirty‐six singleton pregnancies were established. In conclusion, the proposed one‐step method is a simple, safe, and standardized freezing–thawing protocol that ensures embryo survival and quality under field conditions. This study establishes new possibilities for the widespread use of embryo transfer in yaks.     

小鼠胚胎的玻璃化冷冻研究

用不同冷冻载体(玻璃管、塑料管和0.25 mL细管)及不同冷冻方法(程序化冷冻和玻璃化冷冻)对小鼠3.5 d~4 d桑椹胚和囊胚进行冷冻保存,并与不做任何冷冻保存处理直接培养进行对比。结果表明,使用玻璃管、塑料管和0.25 mL细管作为胚胎的承载材料进行玻璃化冷冻,效果差异不显著;采用程序化冷冻与OPS玻璃化冷冻法,对小鼠胚胎进行冷冻保存可以取得较好的结果。从而得出,用不同材质的冷冻载体进行玻璃化冷冻,可以获得与程序化冷冻相同的良好效果。     

不同胎牛血清对动物细胞体外培养的影响

本研究针对血清在细胞库构建中的基础性作用,以中国农业科学院北京畜牧兽医研究所的20枚京星矮脚鸡的7日龄蛋胚为试验材料,利用2 种不同的胎牛血清,采用贴壁培养方法,对细胞进行培养、传代及冻存。观察细胞原代及传代后的生长个体数、生长瓶数,细胞形态、冻存前形态及细胞生长曲线。结果表明,不同血清对细胞培养有一定的影响,血清B培养的细胞各方面都优于血清A培养的细胞。本研究结果为细胞体外培养中的血清选择提供了依据。     

非繁殖季节胚胎移植受体绵羊妊娠效果影响因素的研究

在非繁殖季节应用CIDR法和Progestagen Sponge法对受体绵羊进行同期发情处理后,进行冷冻胚胎移植,研究不同同期发情处理方法、卵巢状况、胚龄、移植方法和移植时间对冷冻胚胎移植妊娠率的影响,以期为当地实现绵羊胚胎移植产业化提供理论依据和技术参考。结果表明:经同期发情处理后,绵羊在去栓后24~72 h集中发情,在去栓后36~48 h发情最为集中;CIDR法和Progestagen Sponge法的同期发情率分别为91.11%和87.78%(P>0.05),同期发情绵羊移植利用率分别为82.93%和78.48%(P>0.05);单侧卵巢上含有1个和2个黄体其妊娠率分别为46.07%和48.78%(P>0.05);桑椹胚和囊胚的妊娠率分别为49.25%和42.11%(P>0.05);腹腔镜法和手术法的妊娠率分别为45.16%和48.52%(P>0.05);11月和12月进行冷冻胚胎移植的妊娠率分别为50.76%和43.08%(P>0.05),该试验的绵羊冻胚移植妊娠率为46.92%,基本接近国内冻胚移植水平,但低于目前国内羊鲜胚移植妊娠率(50%~60%)。由此可以得出,不同同期发情处理方法、卵巢状况、胚龄、移植方法和移植时间对胚胎移植妊娠率的影响均无显著性差异(P>0.05),大规模群体羊同期发情时,可选价格便宜的Progestagen Sponge法;只要受体绵羊黄体质量好即可移植胚胎;为了减轻受体绵羊的应激反应,降低术后子宫粘连的发病率,可广泛应用腹腔镜法进行胚胎移植;该试验的绵羊冻胚移植妊娠率低于目前国内羊鲜胚移植妊娠率,通过筛选高效低毒的抗冻保护剂,以及提高基层技术人员操作水平,则有望进一步提高绵羊冷冻胚胎移植妊娠率。     

应用LAMP法鉴定牛早期胚胎性别试验

使用LAMP法对12枚牛体外受精胚胎的基因扩增,通过使用不同的引物,对牛胚胎中的雄性特异性核酸序列和雌雄共有的核酸序列进行扩增,鉴定胚胎的性别,结果7枚为雌性,5枚雄性。