金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎调查及菌株耐药性和毒力分析

为了研究金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎发病情况，及相应菌株的耐药性和毒力基因分布情况，从新疆乌鲁木齐、伊犁、昌吉地区的7个奶牛场随机采集患乳房炎奶牛乳汁样本，用绵羊血平板和Baird-Parker琼脂平板初筛，利用生化试验、16S rDNA序列分析鉴定金黄色葡萄球菌。先用K-B纸片扩散法对分离株进行药物敏感性检测，再用PCR方法检测其12种毒力基因，用小鼠攻毒试验检测其致病性。结果从142份乳汁样本中共分离出5株金黄色葡萄球菌，7个奶牛场有2个牛场检出并分离到金黄色葡萄球菌，分离率分别为7.14%(2/28)和8.82%(3/34)；药敏试验结果显示这些金黄色葡萄球菌对青霉素G、氨苄西林、链霉素、头孢他啶和阿莫西林的耐药率为60%~80%，对红霉素的耐药率为20%，所有菌株最少对1种药物耐受，最多耐5种药物；分离株中共检出nuc、clfa、fnbB、eta、sea 5种主要毒力基因，所有分离菌对小鼠均有很强的致病性。综上所述，所检牛场由金黄色葡萄球菌导致的奶牛乳房炎感染情况较为严重，分离菌耐药性不强，许多菌株携带多个毒力基因且具有很强的致病性。     

上海地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌基因分型与耐药性研究

通过对分离自上海4个规模化奶牛场的63株奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌进行基因分型和耐药性分析,研究金黄色葡萄球菌基因型在上海地区的分布情况及其耐药情况,并分析基因型和耐药性两者之间的相关性。结果显示,利用RAPD技术对63株金黄色葡萄球菌进行基因分型,共分为9个基因型,其中以Ⅵ型为主,占总数的47.62%。各个奶牛场的基因型分布差异显著,Z奶牛场和D奶牛场基因型分布较平均,而W奶牛场和X奶牛场基因型分布较集中。63株金黄色葡萄球菌对各种常用抗生素均产生不同程度的耐药性,尤其对氨苄西林和阿莫西林已完全耐药,各个奶牛场的菌株对不同抗生素的耐药性差异较大。对金黄色葡萄球菌的基因型和耐药性进行比较发现两者之间没有显著的相关性。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌凝固酶基因型研究

 【目的】了解上海和贵州地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌凝固酶基因型情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】利用16S rRNA保守序列设计引物,PCR扩增鉴定金黄色葡萄球菌,并利用凝固酶基因及其酶切产物多态性对分离鉴定出的金黄色葡萄球菌进行了凝固酶基因分型。【结果】共鉴定出78株金黄色葡萄球菌,有74株金黄色葡萄球菌扩增凝固酶基因片段,分为5个基因型和两个亚型。PCR 1型为贵州地区优势基因型,PCR 3型为上海地区优势基因型。【结论】两地区各基因型菌株分布比例有显著的地域性差异,这与两地区地理环境和养殖水平差异对病原流行传播的影响有关。     

奶牛乳房炎主要致病菌在牛奶中的分布

[目的]观察奶牛乳房炎主要致病菌在牛奶中的分布情况。[方法]在牛奶中添加一定量的乳房炎致病菌金黄色葡萄球菌或大肠杆菌,于4℃分别静置8、12和24 h,牛奶被分割成上、中、下3等份。采用平板菌落计数法测定各部分牛奶中的细菌数。[结果]两种致病菌菌落数在牛奶中从下到上呈现上升趋势,且上部牛奶中的菌落数显著高于中、下部（P〈0.001）,中部与下部差异不显著。[结论]奶牛乳房炎致病菌经乳头管侵入后可以随牛奶中的脂肪滴上浮,进而侵入到乳腺的深层组织。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌毒力因子检测与基因分型

用PCR方法对新疆乌鲁木齐周边3个奶牛场奶牛乳汁中分离到的49株金黄色葡萄球菌的entA、tsst-1、nuc、clfA、fnbA、fnbB、hla、hlb 8种毒力基因进行分子流行病学调查,并用肠道细菌基因间重复序列-PCR(ERIC-PCR)法对这49株金黄色葡萄球菌进行基因分型.结果: tsst-1、nuc、clfA、fnbA、fnbB、hla、hlb、entA毒力基因的检出率分别为4%、59.2%、63.3%、69.4%、22.5%、46.9%、53.1%、0,且以clfA、fnbA为主要检出毒力基因.ERIC-PCR分型结果显示:49株金黄色葡萄球菌可扩增出3～7条带,共分为4个聚类群,在同一牛场中的分离株存在不同基因型;而不同牛场中的分离株也可属于同一基因型.这种结果提示,在不同环境下同一种病原菌的基因型存在一定差异,可能存在多个金黄色葡萄球菌的流行株.     

奶牛乳房炎葡萄球菌的分离鉴定及耐药性检测

【目的】了解引起奶牛乳房炎的最主要病原菌葡萄球菌的耐药性,为奶牛乳房炎的防治提供参考依据。【方法】于2006~2007年在泰安地区5个规模化奶牛场,采集128份临床乳房炎奶牛乳样,用传统的细菌分离、培养和生化鉴定方法,对其中的葡萄球菌进行了分离,用K-B纸片扩散法对葡萄球菌的耐药性进行了检测调查。【结果】本次调查中共分离到29株葡萄球菌,其中金黄色葡萄球菌14株(14/29,47.4%),产色葡萄球菌3株(3/29,10.3%),木糖葡萄球菌、腐生葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、表皮葡萄球菌和人葡萄球菌各2株(2/29,6.9%),头葡萄球菌和模仿葡萄球菌各1株(1/29,3.3%);葡萄球菌对头孢拉定和阿米卡星高度敏感,对临床上常用的林可霉素、红霉素、四环素、复合磺胺均存在不同程度的耐药性。金黄色葡萄球菌对万古霉素的平均抑菌圈直径为19.1 mm,凝固酶阴性葡萄球菌对万古霉素的平均抑菌圈直径为20.3 mm。【结论】金黄色葡萄球菌在分离葡萄球菌中仍占主导地位,万古霉素对葡萄球菌具有较强的体外抗菌活性,未发现耐药株。     

奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌分离株N_2的耐药性分析及其基因特征

以乳房炎源性金黄色葡萄球菌分离株N2为研究对象,采用纸片扩散法分析了耐药性,应用刚果红法检测了生物被膜形成能力,利用PCR法扩增了8种生物被膜形成基因和9种肠毒素基因。结果表明,金黄色葡萄球菌分离株N2具有广泛的耐药性,仅对苯唑西林高度敏感,具有较强的生物被膜形成能力,携带除bap外所有的被测生物被膜相关基因和sea、sec、seg、sei 4种肠毒素基因。结果表示金黄色葡萄球菌分离株N2可能存在多种侵袭方式,在临床上难以防治,为进一步以该菌株为研究材料进行相关研究奠定了基础。     

奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌分离株N_2的耐药性分析及其基因特征

以乳房炎源性金黄色葡萄球菌分离株N2为研究对象,采用纸片扩散法分析了耐药性,应用刚果红法检测了生物被膜形成能力,利用PCR法扩增了8种生物被膜形成基因和9种肠毒素基因。结果表明,金黄色葡萄球菌分离株N2具有广泛的耐药性,仅对苯唑西林高度敏感,具有较强的生物被膜形成能力,携带除bap外所有的被测生物被膜相关基因和sea、sec、seg、sei 4种肠毒素基因。结果表示金黄色葡萄球菌分离株N2可能存在多种侵袭方式,在临床上难以防治,为进一步以该菌株为研究材料进行相关研究奠定了基础。     

紫花地丁对奶牛乳房炎主要病原菌体外抑菌试验

采用中药常规的煎煮法提取紫花地丁的有效成份,对筛选出的耐药大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行敏感性试验。结果显示:紫花地丁提取物对奶牛乳房炎大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制和杀灭作用,耐药的大肠杆菌中最大的抑菌圈是18mm,金黄色葡萄球菌中最大的抑菌圈是19mm,这2种病原菌的最小抑菌浓度(MIC)均为31.25mg·mL-1,最小杀菌浓度(MBC)均为62.5mg·mL-1,表明紫花地丁对耐抗生素的乳房炎大肠杆菌和金黄色葡萄球菌能够起到较佳的抑制效果;比较春、秋两季采集的紫花地丁的抑菌效果结果显示春季效果强于秋季。由此,紫花地丁可在临床上应用于奶牛乳房炎的防治。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌基因工程疫苗研究进展

针对金黄色葡萄球菌易引起奶牛乳房炎的问题,综述了金黄色葡萄球菌表面蛋白的种类及其在基因工程疫苗研制方面的进展。试验表明,其主要通过其表面蛋白(黏附素)与宿主的细胞外基质结合感染宿主,研究金黄色葡萄球菌黏附素对预防由金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳房炎具有广阔的前景。     

牛源金黄色葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测

【目的】了解内蒙古地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染的情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】采用K-B纸片扩散法,检测分离自内蒙古地区38株金黄色葡萄球菌对17种药物的敏感性,同时用琼脂稀释法检测苯唑西林、万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC）;再用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林盐琼脂筛选法和PCR方法扩增mecA耐药基因对分离菌株进行全面MRSA检测。【结果】分离菌株对每种抗生素都有不同程度抗性,对氨苄西林、头孢拉丁、青霉素、复方新诺明、新生霉素和链霉素的耐药率都高于45%,而对氧氟沙星、丁胺卡那霉素、万古霉素、环丙沙星、庆大霉素和头孢唑林的敏感性高于90%,2株细菌的万古霉素MIC≥16 μg•mL-1;其中8株细菌的苯唑西林MIC≥8 μg•mL-1,而其它菌株的苯唑西林MIC≤2 μg•mL-1;分离菌株多重耐药情况严重,耐受3种及3种以上药物的菌株占84.21%,其中4株细菌能同时耐受9种不同抗菌药物;16（42.11%）株细菌被检测携带mecA耐药基因,而仅有其中7株的苯唑西林MIC≥4 μg•mL-1;头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐琼脂筛选法分别检出7株、10株和7株表型为MRSA的菌株。【结论】分离菌株的耐药性和多重耐药现象较为严重,被调查地区奶牛场中已经存在MRSA和OS-MRSA感染情况,且感染率高。     

新疆牛源金黄色葡萄球菌抗菌素敏感性调查

[目的]了解新疆奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌的药物敏感性情况,为该病治疗的临床用药提供参考。[方法]2009年以来对乌鲁木齐市、昌吉、呼图壁、奎屯、伊犁和库尔勒6地区16个奶牛养殖场乳房炎奶样分离金黄色葡萄球菌,用纸片扩散法进行抗菌素敏感性检测。[结果]共分离143株金黄色葡萄球菌,临床药敏试验显示,新疆70%以上分离株对红霉素、青霉素、复方新诺明、多西环素、四环素耐药,40%的菌株对氯霉素、环丙沙星和庆大霉素耐药;并且67.1%菌株同时对5种以上抗菌素耐药,10.5%的菌株对所测试的10种抗菌素耐药。此外,发现了19.6%的牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。[结论]新疆奶牛乳房炎病例中的金黄色葡萄球菌对当前临床上允许使用的多种类型的抗菌素呈现严重的多重耐药,使用抗菌素进行奶牛乳房炎的防治难以取得理想的疗效。这类菌株的存在和蔓延将对新疆奶牛养殖业的健康发展和奶制品的安全构成威胁,建议在选择奶牛乳房炎治疗的抗生素时,应以流行菌株的耐药性为依据。     

不同地区致奶牛乳房炎金葡菌毒力因子的分布

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)是引起奶牛乳房炎的重要病原,该致病菌主要通过毒力因子刺激乳腺组织引起炎症反应。为研究金黄色葡萄球菌重要毒力因子分布的地域性差异,本试验从上海以及云南的3个奶牛场采集奶样和环境污水,利用PCR技术对70株分离菌株和2株标准菌株进行检测。结果显示,在上海地区分离的18株金黄色葡萄球菌中,有7种毒力基因nuc(94.4%)、FnBPA(77.8%)、Hla(88.9%)、Hlb(94.4%)、ClfA(88.9%)、spa(61.1%)和coa(94.4%)的检出率超过50%;在云南分离到的19株金黄色葡萄球菌中,有8种毒力基因nuc(84.2%)、FnBPA(78.9%)、Hla(100%)、Hlb(78.9%)、ClfA(52.6%)、spa(78.9%)、set1 (57.9%)和coa(84.2%)的检出率超过50%,这说明该8种毒力因子可能是致奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌中主要的毒力因子。     

金黄色葡萄球菌诱发小鼠实验性乳腺炎研究

为建立小鼠乳腺炎模型,本试验选用35只泌乳期BALB/C雌鼠随机分成7组,其中6组于产后8~10 d分别用灭菌生理盐水和不同浓度的金黄色葡萄球菌悬液50μL经乳头管注入到小鼠的第4对(腹部)乳腺内,观察小鼠体温、组织病理学、间质宽度、腺泡壁厚度的变化以及乳腺组织中CFU、TNF-α和IFN-γ含量变化。结果表明:试验组小鼠体温呈现先下降后上升的趋势,以T3组明显;组织病理学显示乳腺上皮脱落,腺泡腔内大量炎性细胞浸润,以嗜中性粒细胞为主,腺泡内空泡减少,间隔增宽,炎症明显。而随着金黄色葡萄球菌用量的加大,乳腺组织的炎症程度加剧。T3组间质宽度高于其他组。与对照组相比,T3组小鼠乳腺组织中腺泡壁厚度、CFU、TNF-α及IFN-γ含量极显著升高(P<0.01)。结果表明金黄色葡萄球菌诱发小鼠试验性乳腺炎模型与炎症的免疫病理过程和炎性反应一致,可用作病理模型使用。     

Detection of antimicrobial resistance and virulence-related genes in Streptococcus uberis and Streptococcus parauberis isolated from clinical bovine mastitis cases in northwestern China

The objectives of this study were to investigate antimicrobial resistance of Streptococcus uberis and Streptococcus parauberis isolated from cows with bovine clinical mastitis in China and to examine the distribution of resistance- and virulence-related gene patterns. Antimicrobial susceptibility was determined by the E-test. Genes encoding antimicrobial resistance and invasiveness factors were examined by PCR. A total of 27 strains were obtained from 326 mastitis milk samples. Streptococcus parauberis isolates (n=11) showed high resistance to erythromycin (90.9%), followed by tetracycline (45.5%), chloramphenicol (36.4%) and clindamycin (27.3%). Streptococcus uberis isolates (n=16) were highly resistant to tetracycline (81.3%) and clindamycin (62.5%). Both species were susceptible to ampicillin. The most prevalent resistance gene in S. uberis was tetM (80.0%), followed by blaZ (62.5%) and ermB (62.5%). However, tetM, blaZ, and ermB genes were only found in 27.3, 45.5, and 27.3%, respectively, of S. parauberis. In addition, all of the isolates carried at least one selected virulence-related gene. The most prevalent virulence-associated gene pattern in the current study was sua+pauA/skc+gapC+hasC detected in 22.2% of the strains. One S. uberis strain carried 7 virulence-associated genes and belonged to the sua+pauA/skc+gapC+cfu+hasA+hasB+hasC pattern. More than 59.3% of analysed strains carried 4 to 7 virulence-related genes. Our findings demonstrated that S. parauberis and S. uberis isolated from clinical bovine mastitis cases in China exhibited diverse molecular ecology, and that the strains were highly resistant to antibiotics commonly used in the dairy cow industry. The data obtained in the current study contribute to a better understanding of the pathogenesis of bacteria in mastitis caused by these pathogens, and the findings are relevant to the development of multivalent vaccines and targeted prevention procedures.     

鸡源金黄色葡萄球菌耐药性分析

采用药敏纸片扩散法,测定48株鸡源金黄色葡萄球菌对常用的19种抗菌药物的耐药性,检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).结果表明:所有菌株除对万古霉素、头孢西丁和头孢唑啉100%敏感以外,对其他16种药物均产生不同程度的耐药性,其中耐药率较高的有四环素、强力霉素、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星及克林霉素,耐药率最低的为头孢噻肟、阿米卡星、复方新诺明及利福平.100%的菌株呈多重耐药,分离菌株最少耐受4种药物,最多耐受12种药物,未检测出耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌.     

食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布与时序性表达

【目的】研究食源性金黄色葡萄球菌各血清型肠毒素基因的分布,并进一步分析其时序性表达规律。【方法】针对51株各类食品中分离的金黄色葡萄球菌菌株,应用PCR技术对11种葡萄球菌肠毒素进行基因分型;提取细菌总RNA,以ftsZ和ropB作为内标基因,使用反转录荧光定量PCR研究各肠毒素基因在细菌生长周期中的表达水平变化。【结果】除see、ses和set外,其余8种肠毒素基因在51株食源性金黄色葡萄球菌菌株中均有检出,且sei和seg的检出率最高（27.45%）。各肠毒素基因在mRNA水平的时序性表达规律基本一致,均在对数后期达到峰值,随后快速下降。以内标基因为参照,同一菌株中不同肠毒素基因的相对表达量以及不同菌株中同一肠毒素基因的相对表达量均差异较大。【结论】本文系统研究了肠毒素基因在食源性金黄色葡萄球菌中的分布,并探究了肠毒素基因的时序性表达规律,对金黄色葡萄球菌毒力机制研究与食品质量安全控制具有参考意义。