金黄色葡萄球菌产肠毒素规律的初步研究

为研究金黄色葡萄球菌产毒的最佳条件和规律。依国标GB/T4789-10-2003液体透析培养法培养质控金黄色葡萄球菌,采用全自动荧光/化学发光分析仪检测金黄色葡萄球菌肠毒素,利用正交试验设计得最佳工艺,应用于质控金黄色葡萄球菌和分离菌。结果显示,质控金黄色葡萄球菌培养40 h,温度为40℃,培养室空气中氧含量为15.5%时肠毒素产量最大,单个菌落肠毒素产量为59.31 mg。表明生产工艺中产毒培养温度和振荡培养时间以及空气中氧含量对肠毒素的产量影响较大。     

金黄色葡萄球菌耐药性及肠毒素分型研究

为了解从生鲜乳中分离得到的31株金黄色葡萄球菌的耐药性和肠毒素分布情况,用微量肉汤稀释法进行药敏试验,用PCR方法进行肠毒素的检测和分型。结果表明,31株金黄色葡萄球菌耐药率在50%以上的抗菌药有7种,药耐药率小于10%的有3种;敏感率大于50%的抗菌药有6种,敏感率小于10%的有5种。31株金黄色葡萄球菌毒素基因携带率为93.5%,同时携带2种及以上毒素的菌株占67.7%,有SEA基因的占38.7%,含其他传统的毒素基因类型SEB、SEC、SED和SEE基因的菌株只占40.4%,携带新发现的毒素基因SEG、SHE、SEI和SEJ的菌株占67.7%。说明本次试验中的31株金黄色葡萄球菌对6类13种抗菌药都有不同程度的耐药性,且多重耐药现象比较严重。生鲜乳中分离的金黄色葡萄球菌带毒率高,且携带新发现的肠毒素基因较多。     

产肠毒素金黄色葡萄球菌显色培养基的制备

为了研究一种用于分离与鉴别产肠毒素金黄色葡萄球菌的FS显色培养基,依据产肠毒素金黄色葡萄球菌特有的耐热核酸酶和凝固酶阳性的特点,设计对产肠毒素金黄色葡萄球菌选择性培养和耐热核酸酶联合测试的FS显色培养基。应用质控菌株,对其特异性和灵敏度进行检测。结果显示:FS显色培养基对产肠毒素金黄色葡萄球菌具较好的特异性和灵敏度,特征菌落出现时间缩短至12 h。FS显色培养基对产肠毒素金黄色葡萄球菌具较好的特异性和灵敏度,具有较高的应用价值。     

牛乳金黄色葡萄球菌分离株超抗原肠毒素基因分型研究

为研究牛乳金黄色葡萄球菌 SP-3分离株携带超抗原肠毒素的基因型,设计合成了金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素基因 SEA-SEE 及 TSST-1特异性引物,并以其固有基因 femA 和 femB 为阳性对照,以分离菌株 DNA 为模板,经 PCR 扩增菌株携带的毒素基因。结果表明,SP-3分离株和阳性对照菌株均含有femA 和 femB 基因,且牛乳分离株携带 sea、sec、sed 和 tst-14种超抗原肠毒素基因,为开展动物源超抗原毒素基因系统分型及有效防控金黄色葡萄球菌奶牛乳腺炎奠定基础。     

金黄色葡萄球菌肠毒素的研究进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种革兰氏阳性菌,约1/3人口携带,引起常见的严重疾病.这些疾病包括食物中毒、中毒性休克综合征和非感染性疾病,这是由金黄色葡萄球菌产生的外毒素引起.截止目前,在己发现的超过20种金黄色葡萄球菌肠毒素中,SEA和SEB是最具特色的,也被视为超抗原,由于它们能与MHCⅡ类分子结合,作用于抗原呈递细胞和刺激T细胞大群体共享可变区的T细胞受体β链.本文就肠毒素的致病性、致病机制及其检测方法进行了较为深入的阐述,期望能为临床治疗和食品监控提供一定的指导意义.当前,由于金黄色葡萄球菌多重耐药菌株的出现,因而对食品的危害变得越来越严重,必须尽量降低食品中金黄色葡萄球菌的含量,并防止其在食品之间的交叉污染.     

乌鲁木齐生牛乳中金黄色葡萄球菌的肠毒素检测及分离株同源性分析

探究乌鲁木齐生牛乳中金黄色葡萄球菌经典肠毒素携带情况及分离株同源性差异,为金黄色葡萄球菌的防控提供参考。对乌鲁木齐地区采集的131份生牛乳样品采用特异性选择培养基结合PCR方法分离鉴定金黄色葡萄球菌,并通过PCR方法检测金黄色葡萄球菌5种经典肠毒素(sea、seb、sec、sed、see)携带情况和根据测序结果对分离株进行同源性分析。结果显示,共分离鉴定到金黄色葡萄球菌13株,总分离率为9.92%(13/131);13株金黄色葡萄球菌经典肠毒素阳性菌株5株,阳性率为38.46%;13株金黄色葡萄球菌的同源性在93.7%～99.7%之间,遗传差异在0.3～6.6之间。研究表明,该地区生牛乳中存在一定金黄色葡萄球菌的污染,经典肠毒素阳性率较高,不同来源的分离株同源性高、差异性小。     

无毒突变肠毒素免疫对金黄色葡萄球菌乳腺感染的免疫效果研究

本研究表达并提纯了无毒诱变葡萄球菌肠毒素C与谷胱甘肽硫转移酶重组融合蛋白(GST-mSEC).用GST-mSEC作免疫抗原对小鼠进行免疫,研究其对金黄色葡萄球菌(金葡菌)经乳导管注射感染的免疫效果.试验结果表明,在小鼠乳腺感染金葡菌3 d后,免疫小鼠乳腺的眼观病理变化显著轻于未免疫的对照组,乳腺组织中的菌数也明显低于未免疫的对照组.GST-mSEC免疫小鼠可引起大量的特异性抗体产生,并对葡萄球菌超抗原刺激的炎症性细胞因子的产生具有显著的中和抑制作用.结果表明GST-mSEC融合蛋白及其诱导的特异性抗体对金葡菌引起的乳腺感染具有良好的抗感染作用.     

牛奶中金黄色葡萄球菌的耐药性及其肠毒素分型研究

为了解我国部分生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌污染状况和耐药情况,为指导奶牛场安全合理用药和保障消费者食品安全提供依据.采集3个省共6个奶牛场及挤奶站的新鲜牛奶进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定、药敏试验以及分离菌肠毒素PCR分型.结果从338份生鲜牛奶中共分离鉴定金黄色葡萄球菌共39株,分离率为11.54％;所有分离菌株都有不同程度的耐药,尤其对磺胺类药物和青霉素类的耐药性非常严重;92.3％的菌株含SEA SAJ基因肠毒素.     

金黄色葡萄球菌融合肠毒素的纯化和免疫特性分析

本研究将金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)肠毒素(B,D,E)融合表达蛋白的包涵体经过初步纯化,免疫吉戎獭兔制备血清抗体,经ELISA和琼脂扩散试验检测表明,表达的SA融合肠毒素以不同的抗体效价证明保留了天然毒素各自的抗原性,与多种非目标菌和毒素不反应,具有较好的特异性。由此说明表达产物可诱导机体产生广谱反应特性的抗体。本试验为融合肠毒素的进一步应用,以及建立食物中毒菌广谱、快速的检测方法奠定了基础。     

赤芍水提物对金黄色葡萄球菌肠毒素及蛋白A表达的影响

探讨了赤芍水提物在体外对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B及蛋白A分泌及mRNA转录的影响。试验中采用微量倍比稀释法测定赤芍对金黄色葡萄球菌ATCC29213的最小抑菌浓度(MIC);采用Western blot和实时荧光定量PCR检测亚抑菌浓度下赤芍水提物对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B及蛋白A在mRNA转录和毒素蛋白分泌表达的影响。结果表明,赤芍水提物对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MIC值为6.3mg/mL;在亚抑菌浓度下,赤芍水提物可以明显抑制肠毒素A、B及蛋白A在蛋白水平和转录水平的表达,且呈现明显的浓度依赖性。     

金黄色葡萄球菌快速检测方法的研究进展

金黄色葡萄球菌是引起人类细菌性食物中毒及奶牛乳房炎的重要细菌之一,在自然界中广泛分布。本文将重点介绍金黄色葡萄球菌的几种快速检测方法。     

盐穗木提取物对金黄色葡萄球菌抑菌效果研究

为了解盐穗木提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果,解决金黄色葡萄球菌耐药性的问题,笔者测定盐穗木乙醇提取物和正丁醇萃取物的抑菌圈直径、最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)及生长曲线。结果表明,盐穗木正丁醇萃取物的抑菌活性显著高于乙醇提取物,盐穗木乙醇提取物和盐穗木正丁醇萃取物的MIC分别为150.00 mg/mL和25.00 mg/mL,MBC分别为250.00 mg/mL和50.00 mg/mL。说明盐穗木正丁醇萃取物有良好的抑菌效果,可为新型抗菌药物的研发奠定基础。     

EMA-PCR检测金黄色葡萄球菌活菌的方法

根据金黄色葡萄球菌(SA)耐热核酸酶编码基因(nuc基因)设计特异性引物,对试验菌株进行PCR检测,结果显示,金黄色葡萄球菌扩增出大小为480 bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带.由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,从而使检测结果往往出现很高的假阳性.本试验利用EMA能穿过死细菌的细胞膜并在光激活的作用下能与基因组DNA共价结合,从而能抑制死菌DNA进行PCR扩增的特性,建立了一种快速、有效的检测金黄色葡萄球菌活菌的EMA-PCR方法,较传统PCR大大提高了检测的准确性和可靠性,该方法检测灵敏度可达15 CFU/mL.     

金银花提取物对金黄色葡萄球菌的抗菌作用研究

目的:研究金银花对金黄色葡萄球菌的抗菌作用。方法:将金银花用50%乙醇提取,石油醚萃取后取水相,采用试管二倍稀释法测定其对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),建立小鼠尾静脉注射感染金黄色葡萄球菌模型检测其对小鼠体内的保护率,并采用比色法研究其对细菌体内琥珀酸脱氢酶(SDH)比活性的影响。结果:金银花对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为15.6 mg/mL和31.2 mg/mL,能降低小鼠人工感染金黄色葡萄球菌死亡率,但差异不显著(P>0.05);金银花能极显著降低细菌体内SDH比活性(P<0.01)。结论:金银花对金黄色葡萄球菌具有抑菌作用,其抑菌作用是通过降低SDH比活性来实现的。     

The Effect of Vitamin E on The Toxicity of Cadmium in Cadmium-Sensitive Staphylococcus Aureus

The effect of vitamin E on the toxicity of cadmium (Cd) in Cd-sensitive Staphylococcus aureus 3719– was studied. The addition of vitamin E into the liquid growth medium resulted in a shortened lag phase of growth in Gd-stressed S. aureus 3719–. It is suggested that the decrease observed in the length of the lag phase is due to the antioxidative effect of vitamin E which indicates that Cd together with hydrogen peroxide produced by the bacterium may induce an oxidative damage in staphylococcal cells.     

家蚕性连锁平衡致死系雌性胚胎的组织形态学初步研究

为了调查家蚕性连锁平衡致死系中Z染色体携带致死基因l2的雌性胚子(简称l2胚子)致死的时间和原因,收集家蚕性连锁平衡致死系品种平2不同胚胎发育时期的雌性黑卵,解剖获取胚胎后用光学显微镜对不同发育时期的l2胚子进行组织形态学观察。形态观察可见l2胚子在胚胎发育早期和能正常发育的雌性胚子没有区别,但l2胚子发育至晚期的己2期,约有一半胚子的体表未能正常着色,因此推断那些仍没有正常着色的胚子即为致死的l2胚子。通过胚胎的半薄切片观察发现,己2期l2胚子的组织器官结构完整,与正常发育的雌性胚子之间无明显的差异。观察结果提示:l2胚子死亡可能不是由于胚胎组织结构异常造成的,有可能是在己2期胚子停滞发育致死。     

如何进行奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌疫苗的合理评估

奶牛乳房炎是造成全球奶业经济损失的主要原因,而金黄色葡萄球菌是最主要的病原菌。本文系统、直观地对研究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌疫苗的科研结论进行量化总结和评估,目的是为奶牛乳房炎疫苗的研发提供新思路,为设计合理的奶牛乳房炎疫苗给动物评估试验方案提供科学依据。本文在Pubmed、Science数据库和CNKI数据库对＂奶牛乳房炎疫苗＂类的文章进行了合理的电子检索,然后对细菌疫苗、细菌类毒素疫苗、DNA-重组蛋白疫苗、单一的重组蛋白疫苗等方面的科研论文从试验设计、方法、疫苗类型和研究结果 4个方面进行了全面的分析。结果表明,采用DNA、重组蛋白新技术的疫苗和传统的细菌疫苗已取得良好效果,疫苗可以成为预防和控制金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎的最好或最有前景的一种途径。但是研究方法差异和双盲试验的缺乏阻碍对疫苗效果的合理评估。     

乳粉中金黄色葡萄球菌测定不确定度评定

[目的]评估乳粉中金黄色葡萄球菌检测结果的不确定度。[方法]依照食品安全国家标准《GB 4789.10—2016 食品微生物学检测 金黄色葡萄球菌检验》中的第二法和《JJF 1059.1—2012测量不确定度评定与表示》,以标准质控品的奶粉为例,分析样品制备、稀释过程、加样过程及重复性检测引入的不确定度。[结果]乳粉中金黄色葡萄球菌检测结果的扩增不确定度U=0.108。[结论]本研究建立的方法适合类检验条件下金黄色葡萄球菌不确定的评定。     

戊二醛-癸甲溴铵复合剂对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的杀菌作用研究

为评价戊二醛-癸甲溴铵复合剂在不同条件下对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的杀菌效果,本研究通过悬液定量杀菌试验探究戊二醛-癸甲溴铵复合剂在不同环境温度（4℃、25℃、37℃）、不同作用时间（1 min,5 min,10 min）以及存在有机干扰物（3%、25%的牛血清白蛋白）等条件下对猪源大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的杀菌作用。结果显示,在没有有机物干扰时,浓度为167 mg/L的戊二醛-癸甲溴铵复合剂在4℃、25℃、 37℃下均可在5 min内完全杀灭2种受试菌（107CFU）,说明环境温度对该复合剂的杀菌作用影响不明显。当有机物浓度为3%时,该复合剂在10 min内完全杀灭大肠埃希菌的最低浓度为250 mg/L,金黄色葡萄球菌为125 mg/L;有机物浓度为25%时,作用时间不低于10 min,完全杀灭大肠埃希菌的最低浓度为1000 mg/L,金黄色葡萄球菌为1250 mg/L。有机物含量高杀灭相同数量受试菌所需复合剂的量也需要加大、作用时间延长,说明有机干扰物对复合剂的杀菌作用影响较大。本研究结果提示,为达到较好的杀菌效果,建议养殖场在使用戊二醛-癸甲溴铵复合剂时的有效浓度不低于1250 mg/L、作用时间10 min以上时杀菌效果更好。     

The Effect of Catalase on The Toxicity of Cadmium in Cadmium-Sensitive and Cadmium-Resistant Staphylococcus Aureus

The effect of catalase on the toxicity of cadmium (Cd) in Cd-resistant Staphylococcus aureus 3719+ and its plasmid-negative Cd-sensitive variant 3719– was studied. Catalase on a solid medium increased the recovery of Gd-stressed S. aureus 3719– cells, and the addition of catalase into a liquid growth medium resulted in a shortened lag phase of growth especially in S. aureus 3719–. The catalase activity of S. aureus 3719+ cell suspensions was greater than the corresponding activity of S. aureus 3719– cell suspensions. Cd did not influence the activity of beef liver catalase or the catalase production of the bacterial cells.Catalase reduced the toxicity of Cd especially for S. aureus 3719–. The greater catalase production of S. aureus 3719+ might be one factor in its resistance against the toxic effects of Cd. It is suggested that Cd together with hydrogen peroxide may induce oxidative damage to cells if there is not sufficient catalase available to decompose all the hydrogen peroxide formed.