西瓜遗传转化体系优化的研究

以农杆菌ＬＢＡ４４０４／ｐＢｉｎ１９－Ｃｈｉ－Ｇｌｕ为介导,从不同苗龄的外植体、不同预培养时间、不同菌液浓度和侵染时间及对菌液进行不同的预处理等方面对西瓜的遗传转化体系进行了优化。结果表明用０．１ｍＭ乙酰丁香酮和１ｍＭ脯氨酸共同预处理农杆菌菌液均可显著地提高ＫａｎＲ芽的分化频率。以西瓜子叶为材料,用苗龄２ｄ,预培养２ｄ,共培养４ｄ,菌液浓度ＯＤ６００＝０．５,侵染１０ｍｉｎ的体系较佳,ＫａｎＲ芽的分化频率可达１１．８％。     

苦丁茶树微繁殖技术的研究

以苦丁茶树腋芽为外植体进行培养，诱导腋芽萌发，产生丛芽，同时，试管内外结合法诱导生根，并大田移栽．结果表明：ａ．初代培养以Ｂ５＋ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．５ｍｇ／Ｌ固体培养基诱导腋芽萌发较好；ｂ．Ｂ５＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＺＴ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．２ｍｇ／Ｌ固体培养基能诱导大量丛芽产生；ｃ．适当剪除叶片并去掉顶芽能促进腋芽萌发；ｄ．小苗在附加ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ，ＩＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ，或ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ，ＩＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ的１／２ＭＴ，１／２Ｂ５培养基上培养１０～１５ｄ，插入蛭石上发根，成苗快；ｅ．土壤保湿、避免强光照，是小苗成活的关键．     

无籽西瓜培养基的选择及培养研究

以三倍体无籽西瓜顶芽为外植体，在ＭＳ＋ＢＡ３ｍｇ／Ｌ琼脂培养基上诱导丛芽发生，于ＭＳ＋ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ１ｍｇ／Ｌ培养基上继代培养，周期２０－３０天。平均繁殖系数，前１０代为８左右，１－２０代为５左右，１个芽在半年内可形成８－１０万株苗。丛芽最高代次为３０代。芽的分化与生长正常。将伸长芽嫁接在瓠瓜上，成活率达９０％以上，移栽成活率可达９５％以上。     

影响大白菜离体再生及基因转化的因素研究

以耐热大白菜４２号自交不亲和系的子叶为外植体再生及 研究了几种因素对大白菜植株再生的影响和农杆菌介导法转ＣｐＴＩ基因的条件,含０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ,１．０－２．０ｍｇ／ＬＣＰＰＵ,５．０－１０．０ｍｇ／ＬＡｇＮＯ３的ＭＳ培养基较适合于大白菜４２号自交不亲和系的子叶离体培养再生植株。测定了在含不同激素组合的培养基上离体２７ｄ后的子叶的内源激素含量,在不定芽诱导培养基上子叶内源ＩＡＡ、ＡＢＡ含量分别比     

农杆菌介导的长春花毛状根诱导及培养技术

研究了发根农杆菌介导下的长春花毛状根的诱导及培养。不同的菌种、外植体部位、培养基和代谢产物对毛状根诱导效果不同，最高诱导率分别为：Ａ４菌２５．３％；下胚轴２４．１％；１／２ＭＳ培养基２３．３％。农杆菌诱导转化时间１５～２０ｄ。完成了长春花毛状根的筛选克隆及培养     

大白菜外植体分化诱导及村植株再生的研究

利用大白菜的下胚轴、子叶切块和带柄子叶等外植体诱导分化和植株再生。结果表明：在ＭＳ＋１￣２ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ培养基上获得的无菌苗质量最好，分化能力最强；在ＭＳ＋５．０／ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋１．０ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ分化培养基上，直插的带柄子叶分化频率最高，接种后４０天达４１．２％，并能形成大量不定芽（多者一个外植体可达２０多外不定芽）；幼苗在ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ培养基上能正     

满天星微繁技术研究

用无病毒满天星的带芽茎段作为外植体,研究其组培试管苗生长协调性。结果表明：在起始培养中,以ＭＳ＋ＢＡ２．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０１ｍｇ／Ｌ培养基为最好,侧芽诱导率最高,平均为１８个;在增殖培养中,低世代使用ＭＳ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ培养基为最佳,增殖倍数为１８～２５倍,在高世代使用ＭＳ＋ＢＡ１．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０５ｍｇ／Ｌ培养基为最佳,增殖倍数在４０倍左右且兼顾了试管苗的粗细、节间长度和愈伤组织块的大小,使之生长协调性良好;在根的诱导中,使用１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ培养基最易诱导生根且根系发达。     

甘薯茎尖分生组织培养技术的研究

甘薯茎尖采用２％次氯酸钠水溶液消毒５～１０分钟，以ＭＳ为基本培养基，添加６—苄基氨基嘌呤（６ＢＡ）０．５ｍｇ／Ｌ，萘乙酸（ＮＡＡ）０．２ｍｇ／Ｌ腺嘌呤（Ａｄ）５ｍｇ／Ｌ，７个品种间的茎尖培养成苗率为５０～７８．１％，成苗期４３～６０天，适量的腺嘌呤可使成苗率提高５．８～２１％，成苗期缩短２０天左右。转入第二培养基的时间，以１８～２０天较好。     

叶用莴苣高频率再生体系的建立

以４份叶用莴苣栽培品种为材料,比较了激素组合、ＡｇＮＯ３及其浓度和不同外植体切段地不定芽形成的影响,结果表明,在本实验条件下ＺＴ１ｍｇ／Ｌ和ＩＡＡ１ｍｇ／Ｌ组合的出芽外植体在分率最高,平均为２０．１４％;培养基中添加ＡｇＮＯ３可明显提高植株再生频率,增加每个外植体的丛生芽数目,浓度以５ｍｇ／Ｌ为最好,具芽外植体百分率平均为４４．９０％;真叶的培养效果好于子叶,真叶柄的培养效果优于真叶其它部位,以真     

提高农杆菌基因转化率方法的研究

通过番茄转化过程中农杆菌侵染浓度、预培养时间、乙酞丁香酮、植物激素和植物组织浸提液对农杆菌和外植体的处理,研究了提高番茄基因转化率的方法。试验结果为：用过夜培养的农杆菌和稀释10倍的农杆菌侵染外植体以及用1倍马铃薯组织浸提液和1mg/L低浓度的植物生长素处理外植体和农杆菌可以明显地提高番茄的转化率;乙酰丁香酮和番茄组织浸提液对转化率元显著影响;番茄子叶不经过预培养比预培养的转化率高。     

杨树农杆菌介导遗传转化中抗生素浓度的筛选

研究头孢噻肟钠、头孢曲松钠、头孢拉啶、头孢他啶4种头孢类抗生素对根癌农杆菌LBA4404和EHA105的抑制作用;以欧美杨111和盖杨组培苗为材料,研究卡那霉素（Km）对2种杨树叶片分化及茎段生根的影响,并分析头孢噻肟钠对欧美杨111叶片分化及茎段生根的影响。结果表明,头孢噻肟钠、头孢曲松钠和头孢他啶对LBA4404具有良好的抑菌效果,使用浓度为50 mg/L,其中头孢噻肟钠对农杆菌EHA105的抑菌效果最好,头孢拉啶抑菌效果较差。不同杨树品种对卡那霉素的耐受性差异不大,欧美杨111在叶片转化筛选培养时,使用浓度为10 mg/L,抗性芽生根阶段为20 mg/L;盖杨在叶片转化筛选培养时,卡那霉素使用浓度为20 mg/L,抗性芽生根阶段为25 mg/L,头孢噻肟钠对欧美杨111叶片分化和茎段生根影响不大。     

根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化条件的优化

利用山东省广泛栽培的马铃薯品种为材料，对影响马铃薯遗传转化的抗生素浓度、农杆菌浓度、预培养时间和共培养时间等进行了研究。结果表明：（1）卡那霉素Km浓度以15－25mg/l作为马铃薯叶圆片转化时的选择压更合适；（2）羧苄青霉素（Cb）比头孢霉素Cefo更适合用于农杆菌介导的马铃薯叶圆片的遗传转化；（3）外植体预培养时间4d，共培养时间3d为最好；（4）菌液浓度以OD600＝0.5左右最好。上述条件的优化大大提高了马铃薯遗传转化效率。     

银白杨遗传转化中抗生素浓度优化的研究

该文探讨了卡那霉素、G418、羧苄青霉素和头孢霉素4种抗生素对银白杨不同培养阶段外植体生长、分化或生根的影响,确立了由农杆菌介导的银白杨遗传转化研究中抗生素种类和转化体的筛选浓度.结果表明:在叶片转化筛选阶段,卡那霉素和G418的适宜浓度分别为15和10 mg/L,羧苄青霉素和头孢霉素的适宜浓度为200～600 mg/L和200～400 mg/L;在抗性芽生根培养时,卡那霉素和G418浓度分别为20～25 mg/L和15～20 mg/L,羧苄青霉素和头孢霉素浓度为200～800 mg/L和200～600 mg/L.头孢霉素或羧苄青霉素的抑菌效果因农杆菌菌株的不同而存在差异,羧苄青霉素对农杆菌LBA4404抑制效果好,头孢霉素对农杆菌C58抑制效果理想.      

A simple and general method for transferring genes into plants

Transformed petunia, tobacco, and tomato plants have been produced by means of a novel leaf disk transformation-regeneration method. Surface-sterilized leaf disks were inoculated with an Agrobacterium tumefaciens strain containing a modified tumor-inducing plasmid (in which the phytohormone biosynthetic genes from transferred DNA had been deleted and replaced with a chimeric gene for kanamycin resistance) and cultured for 2 days. The leaf disks were then transferred to selective medium containing kanamycin. Shoot regeneration occurred within 2 to 4 weeks, and transformants were confirmed by their ability to form roots in medium containing kanamycin. This method for producing transformed plants combines gene transfer, plant regeneration, and effective selection for transformants into a single process and should be applicable to plant species that can be infected by Agrobacterium and regenerated from leaf explants.     

毛白杨85号高效遗传转化系统的建立

在建立以毛白杨85号(Populus tomentosa 85)叶片为外植体的再生系统基础上,从预培养时间、浸染菌液浓度、浸染时间、共培养时间及添加AS(乙酰丁香酮)5个方面,以卡那霉素抗性植株作为转化率的衡量指标,研究了各因素对毛白杨85号遗传转化率的影响,建立了高效的遗传转化系统。筛选的高效转化系统为:农杆菌活化菌液用MS液体培养基稀释10倍,浸染5min,共培养4d。毛白杨85号叶盘转化率可达40.0%。该研究为利用叶盘法开展毛白杨85号基因转化培育抗逆新品种奠定了良好基础。     

根癌农杆菌介导的人骨形成蛋白-3成熟肽基因向油菜转化的研究

用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)共培养法,将骨形成蛋白-3成熟肽(hBMP-3m)基因导入甘蓝型自交系油菜(BrassicanapusL.)品种秦油-3号,并获得了hBMP-3m基因整合到油菜基因组中的植株。试验所用外植体为油菜4～5d苗龄的下胚轴;根癌农杆菌为LBA4404,其Ti质粒pCAMBIA-hBMP3m含hBMP-3m基因。切取2mm左右的下胚轴侵染根癌农杆菌后在分化培养基(MS+5.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA)上共培养2d,然后转到附加25mg/L潮霉素和500mg/L羧苄青霉素的分化培养基上。切下分化出的茎芽,插入附加25mg/L潮霉素的生根培养基(MS+0.4mg/LIBA)中,形成完整的植株。经PCR检测和Southernblot分析,证实hBMP-3m基因已插入到油菜细胞基因组中。     

BcMF3反义基因植物表达载体的构建及其对拟南芥的遗传转化

根据编码白菜(Brassica rapa L. ssp. chinensis,syn B. campestris ssp. chinensis)果胶甲酯酶的BcMF3 基因cDNA 序列内部第1 343～1 797个碱基之间序列设计引物,从白菜花蕾cDNA中PCR扩增出455 bp的片段,把该片段作为反义基因连接至双元载体pBI12l上,得到了植物表达栽体pBI-B3,并用"三亲杂交"法导入农杆菌LBA4404菌株中,PCR扩增和酶切结果表明所构建的植物表达载体pBI-B3含有BcMF3 反义基因片断,并已导入了根癌农杆菌(Agrobacterinm tumefuciens)中;采用花序浸润法转化拟南芥(Arabidopsis thaliana)后,播种筛选浸润植株的种子获得了5 株卡那霉素抗性植株,PCR 扩增证明BcMF3反义片段成功整合到拟南芥基因组中;转基因拟南芥子代(T2)的抗性分离符合孟德尔分离比例,表明外源基因是单一位点插入.     

农杆菌介导的中华补血草遗传转化体系的建立

[目的]为利用转基因技术培育中华补血草新品种奠定基础。[方法]对农杆菌介导的中华补血草转化体系中的各种影响因素进行了系统研究,以构建中华补血草的遗传转化体系。[结果]中华补血草叶片对卡那霉素敏感,以50 mg/L卡那霉素作为补血草叶片转化受体较为适宜。400 mg/L特美汀能有效抑制农杆菌,而500 mg/L头孢曲松钠则不能。菌株EHA105对中华补血草的转化率达15%,远高于菌株LBA4404和GV3101。对于侵染中华补血草无菌苗叶片的重悬菌液,以OD600为0.7~1.0为宜。4 d共培养的效果较好,15.6%外植体可分化成芽。PCR检测结果表明30株卡那霉素抗性植株均为阳性,而阴性对照未扩增到条带,表明NPTⅡ外源基因已整合到受体植物基因组中。[结论]影响中华补血草转化率的关键因素是农杆菌菌株的选择。     

农杆菌介导法将fad2基因的ihpRNA表达框转入甘蓝型油菜

为获得转基因高油酸油菜新种质,以甘蓝型油菜品种宁油12号带柄子叶为转基因受体,通过与含有油酸脱饱和酶基因(fad2)ihpRNA表达载体(pCNFIRnos)的农杆菌LBA4404共培养,将油菜fad2基因的反向重复序列表达框转入宁油12号,获得转基因植株。结果表明:4日龄的带柄子叶在含有2,4-D 1 mg/L的共培养基中预培养48 h后,再进入不定芽诱导培养基中进行培养,能显著提高不定芽的诱导频率;在含20 mg/L卡那霉素的诱导培养基中抗性绿芽的频率达到5.04%;PCR检测卡那霉素抗性苗的基因组DNA,均扩增出NPTII基因和目的基因序列表达框的特定条带。初步证明目的基因序列已经整合到了油菜的基因组中。     

大豆农杆菌介导转化系统的优化研究

对大豆子叶节再生系统及其农杆菌介导转化的适宜筛选剂浓度进行了优化 ;同时以发芽 5天的大豆无菌苗的下胚轴切段为外植体 ,以抗性愈伤为指标 ,对影响农杆菌介导的大豆转化频率的因子进行了研究。结果表明 :不同大豆品种对选择剂的敏感性存在一定差异。 4种选择剂比较 ,PPT抑制效果最好 ,品种之间比较稳定 ;潮霉素次之 ;卡那霉素的有效浓度最高。 4种选择剂的适宜浓度分别为 :卡那霉素 10 0～ 2 0 0 mg· L-1;G4 185 0～ 75 mg· L-1;潮霉素 2 0～ 30 mg·L-1;PPT5 mg· L-1。农杆菌感染时间和共培养时间均对大豆的转化有明显的影响。感染时间以 8分钟左右为宜 ;共培养时间以 2～ 4天为宜。在农杆菌感染和共培养阶段的乙酰丁香酮浓度和 p H值对大豆转化频率有明显影响。p H值以 5 .4 0～ 5 .6 0为宜 ;乙酰丁香酮的适宜浓度为 10 0 μmol· L-1左右。在感染农杆菌之前 ,让外植体在高渗培养基上预培养一段时间能提高大豆下胚轴切段的转化频率。最适预培养天数为 1d。