不同培养条件对茯苓产孢量的影响

通过比较培养基组成、培养温度、培养基初始pH、光照对茯苓(Wolfiporia cocos)产孢的影响,探讨产孢量较大的培养基组成和培养条件。结果表明:装有60 mL茯苓PDA培养基(200 g马铃薯,20 g葡萄糖,1 g KH_2PO_4,0.5 g MgSO_4·7H_2O,10 mg维生素B_1,18 g琼脂,pH自然,加蒸馏水补足至1000 mL)的350 mL组培瓶,培养基初始pH为6.5,28℃暗培养7 d,12 h光暗交替培养为最优产孢条件,在此条件下,茯苓培养38 d产孢量为(8.12±0.11)×10~9个/瓶。     

甜瓜蔓枯病菌子实体法分离及A型菌株产孢条件研究

为解决甜瓜蔓枯病菌(Didymellabryoniae)组织分离法中枯萎病菌污染和单孢分离法操作复杂的问题,采用挑取单个子实体分离纯化获得甜瓜蔓枯病菌A型菌株。该菌株在12h荧光/12h黑暗的常规光照条件下,不能形成分生孢子器,但经过一定时间的暗处理和间歇紫外灯(12h紫外灯/12h黑暗)照射后则能够产生大量分生孢子。研究了光照、温度、pH值、培养基、碳源、氮源对产孢量的影响。综合各种因素,A型菌株产生分生孢子的最佳条件为:7d暗培养和4d间歇紫外灯处理的光照条件下,只含有磷酸二氢氨的马铃薯平板培养基,25℃时产生的分生孢子量最多。     

白兰瓜果腐病优势病菌鉴定及其产孢条件研究

危害白兰瓜果腐病的镰刀菌经鉴定为砖红镰孢(Fusarium lateritium Nees)。碳、氮源对产孢量的影响较大,以乳糖、氯化铵产孢最好,棉子糖、甘氨酸不利于产孢。F.lateritium在pH4.98-9.18均能产孢,但以pH6.24产孢最多。在培养条件和培养基种类的组合试验中,F.lateritium产生孢子的最佳条件为:植物组织(配方2:muskmclon seed 50g,agar 20g,distil water 1000mL)培养基,紫外光处理2h后于20-25℃暗培养。     

深绿木霉P3.9生防菌株固体发酵条件优化筛选

以分离自枇杷主干韧皮部的深绿木霉(Trichoderma atroviride)P3.9菌株为试材,以产孢量为指标,通过单因素试验和正交实验,研究固体发酵培养底物基质、碳源、氮源、磷酸盐及其浓度,含水量、接种量、温度和时间等培养条件组合,筛选P3.9菌株固体发酵最佳组合条件。结果表明:最佳底物基质为米糠,碳源为葡萄糖或D-果糖,氮源为磷酸二氢铵或硝酸钠,磷酸盐为磷酸氢二钠,温度为28℃,含水量为40%,接种量为9%;正交实验表明,其孢子生产的最佳培养基为以米糠为底物基质,在其中添加0.5%葡萄糖、0.5%D-果糖、0.5%磷酸二氢铵、0.05%磷酸氢二钠,其最佳培养条件为40%含水量、5%接种量、光暗交替28℃静止培养9d;按优化后的培养条件培养,最高产孢量可达7.5×109孢子/g培养物质;此结论为其生防菌剂的固体发酵提供理论依据。     

一株棘孢木霉生防效果及固体发酵条件探索

棘孢木霉菌株GX004(Trchoderma asperellum)是一株分离于土壤中的具有生防潜力的木霉菌株,研究了该菌株的基本生物学特性,采用平板对峙法、对扣培养法研究其拮抗尖孢镰刀菌4号生理小种(FOC4)的效果,并利用水稻和菜籽饼作为固体发酵基质,探究不同条件下其产孢量。结果表明,不同温度、pH值及光照条件均对该菌的菌丝和产孢量产生显著影响,培养温度28℃时产孢量最大,产孢对数值约为9.20;pH值5～6比较适合生长,pH值6时产孢量最大,产孢对数值约为9.07;光照条件能够促进菌株生长和产孢,光照24 h下平均产孢对数值约为9.17。在PDA平板中GX004通过空间营养竞争等作用抑制FOC4生长,平均抑制率达85.2%;产生的挥发性物质对FOC4生长抑制率为39.5%。当木霉孢子浓度为1.65×10~2、1.65×10~3、1.65×10~4、1.65×10~5个/mL时,不同孢子浓度木霉孢子培养基对FOC4抑制率分别为74.0%、76.9%、82.7%、85.6%,当木霉孢子浓度为1.65×10~6个/mL时FOC4几乎无法生长。在实验室条件下,水稻秸秆与菜籽饼按质量比1∶1配比,经过121℃灭菌30 min,接种量8%～12%,调节水分使初始含水量达到70%,培养箱28℃下培养5 d,此条件下产孢量可达2.0×10~9个/g以上。     

木耳漆酶高产菌株筛选及其发酵条件的研究

通过运用不同检测方法对木耳属中的三个种的 2 7个菌株的产过氧化物酶、漆酶能力的检测 ,筛选得到一漆酶高产菌株毛木耳 (Auriculariapolytricha)AP4。并且对AP4的产漆酶的发酵条件进行了初步研究。摇瓶实验产漆酶的最佳培养基的成分为 :碳源羧甲基纤维素(CMC) 5g/L ,氮源NH4NO3 L -天冬酰胺 (L -As paragine) 2 4mmol/L ,培养基的初始pH4 0 ,培养温度2 5℃。     

蛹虫草液体培养产纤溶酶条件优化研究

利用蛋白纤维平板法对1株蛹虫草(Cordyceps militaris)菌株液体发酵产生纤溶酶的碳氮条件进行系统优化;通过单因素试验筛选最佳碳源和氮源,再根据单因素试验结果进行正交设计实验优化该菌株产纤溶酶的最佳配方。结果表明:产纤溶酶的最佳碳源为乳糖,纤溶酶活性达118.69U/mL,其次是不加碳源的空白对照,活性为109.12U/mL;蚕蛹粉是该菌株产纤溶酶的最佳氮源,活性可达118.69U/mL,其次是酵母浸膏,活性为29.10U/mL;纤溶酶产量与菌丝体生物量之间无必然相关性;产纤溶酶的最佳培养基为乳糖10g/L、蚕蛹粉10g/L、酵母浸膏5g/L,获得的纤溶酶活性高达142.26U/mL。     

柑桔粉虱寄生性真菌渐狭蜡蚧菌TN002菌株培养条件探究

以产孢量、菌落生长速率、菌丝干重等为指标,设计单因素试验和正交试验,对重庆地区柑桔粉虱上的渐狭蜡蚧菌TN002菌株的培养条件进行研究。结果表明,在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上,10~35℃范围内TN002菌株均可生长,25℃条件下产孢量和菌落生长速率最大。pH值(4.5~8.0)对TN002菌株生长无显著影响,pH值5.5时产孢量最大。与无机氮相比,有机氮更利于TN002菌株生长和产孢,以酵母浸粉为氮源时菌落生长速率最大,以蛋白胨为氮源时产孢量最大。在不同碳源中,蔗糖和葡萄糖比较利于TN002菌株生长和产孢。在摇瓶培养的各液体培养基中,以葡萄糖酵母浸粉液体培养基的产孢量和菌丝干重较大。摇瓶培养时间为60h时产孢量和菌丝干重较大。TN002菌株产孢发酵培养优选方案为500mL锥形瓶中葡萄糖酵母浸粉液体培养基装量100mL、接种量4%(孢子悬液浓度4×107个孢子/mL)、摇床转速190r/min。     

香菇单孢杂交育种研究

一、材料与方法(一)亲本的筛选 供试菌种CrO_2、HO_3等14个品种,菌袋生产,荫棚下出菇,记录菌丝长速、产质量.(二)培养基制备 袋栽培养基为木屑55%,棉子壳、麦麸各20%,糖1%,磷肥、石膏粉各2%,多菌灵0.1%.单孢分离用PDA培养基和GMY培养基(葡萄糖、麦芽糖各10g,酵母膏4g.琼脂20g,水1000ml).拮抗试验用PDA培养基.单孢出菇用杏实促成培养基(杏实50g,菇木碎屑50g,蔗糖20g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁0.5g,琼脂20g,VB_1微量,水1000ml,PH5.4～5,6).     

洋葱紫斑病病原菌鉴定及生物学特性

以黑龙江省3个地区洋葱紫斑病植株为试材,采用组织分离法分离洋葱紫斑病病原菌,对获得菌株进行致病性测定、形态学鉴定以及16srDNA ITS序列分析,并研究其生物学特性。结果表明:该致病菌为葱链格孢菌(Alternaria porri(Ell.)Cifferri),该菌株在以葡萄糖为碳源时产孢量最高,但菌丝生长量最低;在以氯化铵为氮源时菌丝生长量和产孢量都达到最高。32℃,pH 7,光照条件为12h光照/12h黑暗交替培养菌丝生长量最高;24℃,pH 8,连续黑暗条件下产孢量最高。     

蛹虫草液体菌种培养基的优化

通过正交实验优化蛹虫草液体菌种培养基,以干菌体得率为指标,选择出蛹虫草液体发酵的最适培养基。结果表明:最适液体培养基配方为:葡萄糖30 g/L,蛋白胨16 g/L,磷酸二氢钾6 g/L,硫酸镁2 g/L,水1 000 mL,pH自然,干菌体得率为46.5 g/L,与其它试验组结果的差异显著,说明碳源和氮源为其生长的最重要营养因素。     

黄皮胚培养研究

对黄皮[Clausenalansium(Lour.)Skeels.]3个品种(郁南无核黄皮、鸡心黄皮和甜黄皮)开花后10～60d的幼胚进行了离体培养。结果表明,在WPM+CH0.50g/L+PVP1g/L(或AC0.3%)+AgNO310mg/L+GA30.25mg/L+BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L上,花后10～23d的幼胚只形成愈伤组织,但以花后20d的幼胚愈伤组织形成率最高、褐化率低、生长较旺盛;花后30d的幼胚有11%～26%已能发育成苗,此后幼胚的成苗率随胚龄增加而升高,花后60d幼胚的成苗率在50%～73%。鸡心黄皮的愈伤组织诱导率最高,其次是甜黄皮,无核黄皮最低;无核黄皮愈伤组织褐化率最高,其次是鸡心黄皮,而甜黄皮的最低。在适宜的培养基(WPM+CH0.50g/L+AC0.3%+AgNO310mg/L+GA30.25mg/L+BA1.5mg/L+NAA或IBA1mg/L)上,黄皮愈伤组织能正常继代和增殖,生长调节剂是促进增殖的主要因素,但褐化、生长缓慢、很难分化仍是黄皮组织培养的主要难题。     

中国樱桃抗病毒选系试管苗生根的研究

AIM:To investigate the injurious effects of oxidized low-density(OLDL) on human endothelial cells(ECs) and protective effects of Angelica Sinensis in vitro. METHODS: The effect of OLDL on nitric oxide (NO) release from EC and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) expression on EC surface were studied, and the protective effects of Angelica Sinensis on normal and abnormal EC were investigated using cultured EC with or without OLDL and immunocytochemical staining technique.RESULTS: OLDL led to a decrease of NO release and an increase of ICANI一1 expression, which can be reversed by Angelica Sinensis and atropine can block this role of Angelica Sinensis. RESULTS: CONCLUSION: Angelica Sinensis has antagonistic effect on OLDL-induced decreasing of NO released from ECs and increasing of ICAM-1 expression on ECs surface. These effects of Angelica Sinensis may be exerted by the excitation of muscarinic receptor.     

枣胚培养影响因素研究

以枣优良品种冬枣、金丝丰等为试材,对坐果后10～70d幼胚进行了培养,结果表明,胚龄是影响胚培养成功的关键性因素,暗处理对生根有利,低温处理(2～4℃,44d)能缩短成苗时间并提高成苗率,但成苗质量受到影响。20～40d幼胚成苗最适培养基为BA0.1mg/L+IBA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖50mg/L+LH500mg/L的MS培养基,成苗时间超过80d。55～70d幼胚在无激素培养基中亦能获得良好效果。无根苗转到添加BA0.1mg/L+IBA0.5mg/L+IAA0.1mg/L+蔗糖30g/L的MS培养基中可促进生根。生根苗转至无激素+蔗糖30g/L的MS培养基可获得健壮苗。     

云芝菌丝体产SOD的深层发酵培养基的优化

通过设计L16(42)正交实验,确定了可提高云芝菌丝体中SOD活性的深层发酵培养基的最优组分,实验结果表明,培养基各组分对菌丝体生物量的影响顺序依次为黄豆粉>(NH4)2SO4>土豆>葡萄糖>麦麸,而对SOD总活力的影响顺序为(NH4)2SO4>黄豆粉>麦麸>葡萄糖>土豆.综合考虑试验结果及成本因素,确定云芝菌丝体产SOD的最适培养基为马铃薯160 g·L-1、葡萄糖16 g·L-1、麦麸10 g·L-1、黄豆粉18 g·L-1,不添加硫酸铵,pH自然.     

茄子体细胞杂种游离小孢子培养获得再生植株

 应用游离小孢子培养技术，培养茄子体细胞融合杂种DSa不同株系的小孢子。结果表明：对花药进行36 ℃高温6 d预处理，能显著提高小孢子脱分化能力；小孢子离体培养的最佳发育时期是单核期；小孢子培养的适宜培养基为KM附加PEG 250 mg/L、2，4-D 0.2 mg/L、ZT 0.5 mg/L、NAA 1 mg/L及6.5%的葡萄糖；再生植株适宜培养基为Ms附加ZT 2 mg/L、IAA 0.1 mg/L、2%蔗糖和7 g/L琼脂。     

蛹虫草固体发酵生产虫草素的条件优化

用直径6 cm,高10 cm聚乙烯培养罐固体发酵蛹虫草(Cordyceps militaris),以固体发酵产物中虫草素含量为指标,从16个蛹虫草菌株中筛选出虫草素含量最高的菌株,考察固体发酵该菌株的培养基组成、培养时间、培养基装量、料液比、培养温度、接种量和添加物对虫草素含量的影响,得到了有利于蛹虫草固体发酵产虫草素的培养条件:培养罐装20 g小麦,按小麦干重6％的量分别加入玉米粉和黄豆粉,按料液比1∶1.4(w∶v,以小麦干重为基准)加入营养液(g/L:2.0 K2HPO4·3H2O,0.5 MgSO4·7H2O,16甘氨酸),培养温度为26℃,时间46 d,接种量10％.     

辣椒花药培养影响因子初步研究

为研究辣椒花药培养诱导胚状体的影响因素,以3个不同辣椒品种为材料,从基因型的选择、预处理的温度和时间、不同激素浓度、高温热激时间以及活性炭浓度等方面开展试验.结果表明:3个不同辣椒基因型中,有2个基因型获得了胚状体,其中胚状体诱导率较好的是L3,达21.7％;综合看来,以4℃低温预处理2 d的诱导效果较好;添加合适浓度...     

甜菜转基因体系的相关影响因素研究

以16种基因型的二倍体甜菜（Beta vulgarisl L．）为材料,建立并优化了甜菜的植株再生体系;对影响甜菜转基因的相关因素进行了比较分析,确定了抗生素标记基因的适宜筛选浓度为200mg／L;菌液适宜浸染浓度OD600为0．3;浸染最适时间为10min;外植体与农杆菌适宜共培养时间为4d;添加乙酰丁香酮的适宜浓度为100μmol／L。研究结果的获得,为完善甜菜的遗传工程以及甜菜基因组学的相关研究奠定基础。     

The culture and differentiation of adult bone marrow-derived pluripotential mesenchymal stem cells into insulin-producing cells

AIM: To study the culture and characteristics of mouse adult bone marrow-derived pluripotential mesenchymal stem cells and its potential to differentiate into insulin secretion cells. METHODS: Cells were plated on 60% DMEM-LG and 40% MCDB-201 medium supplemented with 2% fetal calf serum and 10 μg/L PDGF-BB, 10 μg/L EGF and 1×106 U/L LIF. The proliferation rate, phenotype and oct-4 mRNA were tested. After it was plated on serum-free medium DMEM/F12 with GLP-1 and nicotinamide, the nkx2.2 ngn3, pdx-1 and insulin 2 mRNA were tested. RESULTS: The cells were round with large nucleus and scant cytoplasma. They were CD13+, CD44-, CD45- and MHCⅡ-. Oct-4 mRNA were present. The nkx2.2 pdx-1 and insulin 2 mRNA were presented in cells plated on the inducing medium at 14 days. CONCLUSION: The adult bone marrow-derived pluripotent stem cells were cultured and they has the possibilities to be induced into insulin-secreting cells.