金丝桃素对口蹄疫病毒的体外抗病毒实验

本文报道了金丝桃素体外抗口蹄疫病毒（FMDV）的研究结果。采用双抗体捕获抗原法、病毒滴度测定、MTT法、组织细胞培养等方法均检测到抗病毒作用。结果显示：金丝桃素在BHK-21细胞感染FMDV前、后及同时加入，都有明显抑制细胞病变的作用。金丝桃素使FMDV的TCID50从8．5下降到6．25。双抗体捕获抗原法检测到金丝桃素有效抑制FMDVBHK-21细胞的吸附、融合，抑制率可达59．72％。研究结果提示：金丝桃素在体外有抗口蹄疫病毒作用，抑制口蹄疫病毒与宿主细胞的吸附、融合是抗病毒的重要途径之一。     

金丝桃素的体外抗口蹄疫病毒活性

将体外培养的BHK21细胞感染FMDV后加入金丝桃素，日光灯下光活化1h，通过细胞病变观察、MTT法、透射电子显微镜观察、H^3-UR掺入试验，探讨了光活化金丝桃素对FMDV体外生长增殖的影响。结果表明，金丝桃素有明显的抑制FMDV致BHK21细胞病变效应，能抑制FMDV的增殖，抑制率可达61．82％。透射电镜观察，金丝桃素组与病毒对照组相比，BHK21细胞的FMDV颗粒明显减少。证实，金丝桃素在体外有明显的抑制FMDV增殖的作用。     

金丝桃素体外抗口蹄疫OS/99 BF13病毒作用的研究

金丝桃素属二蒽酮类,是贯叶连翘中最具生物活性的物质,为抗病毒的中草药活性单体,亦具有显著的抗肿瘤、抗抑郁及其光敏活性。本试验通过光敏活性及氧依赖性试验,发现氧气也是金丝桃素抗病毒活性的一个重要条件。氧气浓度增加时,0.5μg/mL的金丝桃素浓度即可对口蹄疫OS/99 BF13病毒起到很强的抑制作用。通过金丝桃素体外细胞毒性试验、所致细胞病变及其作用环节的研究观察,发现其对口蹄疫OS/99 BF13病毒有直接灭活作用,并对吸附于细胞表面及进入细胞内的口蹄疫OS/99 BF13病毒有抑制作用。     

金丝桃素散剂和金丝桃素络合物

金丝桃素散剂和金丝桃素络合物是中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所开发研制的新兽药。在“十五”国家重点科技攻关项目“高致病性禽流感防治技术与开发”课题的资助下，从中草药贯叶连翘（Hypericum perforatum L.）中提取分离的具有抗RNA病毒的有效成分-金丝桃素（Hypericin），尤其是对禽流感病毒和口蹄疫病毒具有强烈的抑制和杀灭作用，并与功能蛋白有效地结合为金丝桃素蛋白络合物，其疗效和稳定性得到了进一步提高。     

口蹄疫病毒突破宿主细胞天然免疫应答的机制

口蹄疫病毒(FMDV)感染宿主必须突破天然免疫应答,细胞天然免疫应答是宿主天然免疫应答最关键的组成部分。FMDV只有突破宿主细胞天然免疫才能在细胞内生长、繁殖和传播,为达到这一目的要利用多种途径来抗衡甚至破坏宿主细胞天然免疫应答。然而FMDV突破宿主细胞天然免疫应答的机制至今尚不十分清楚,深入了解FMDV突破宿主细胞天然免疫应答机制,有助于人们进一步认知FMDV致病机理,开发新型疫苗和生物治疗药物以应对口蹄疫的暴发和流行。本文从FMDV感染后宿主细胞的转录和翻译系统,病毒抗原性多肽的递呈、天然免疫细胞功能损伤和免疫病理作用四个方面对FMDV突破宿主细胞天然免疫的机制作以综述。     

光与氧对金丝桃蛋白复合物抗口蹄疫病毒的活性的影响

口蹄疫是一种由病毒（口蹄疫病毒（foot—and—mouth disease virus，FMDV）属于小RNA病毒科FMDV属，完整病毒含有单股正链RNA，衣壳蛋白，无包膜）感染引起的偶蹄动物，如牛、羊、猪、骆驼、鹿等共患的急性接触性传染病。易感染口蹄疫的偶蹄动物约有70多种，马不会感染口蹄疫，但会成为口蹄疫的被动载体。1514年意大利首次发生口蹄疫。1898年，口蹄疫被确认是由病毒引起的疾病。     

金丝桃素可溶性粉体外抗犊牛病毒性腹泻-黏膜病病毒的实验研究

为了探讨金丝桃素可溶性粉抗犊牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVD-MDV)的作用机制,试验过程中采用先给药后接毒、先接毒后给药和同时给药接毒3种不同的途径,分别在72、96、120 h观察病毒致牛肾原代细胞(MDBK)的病变(CPE)情况.结果表明,病毒的TCID50为10-6/0.1 mL,金丝桃素可溶性粉的TC0为2.5 g/L;药物质量浓度在0.3～2.5 g/L范围内同时给药和接毒组细胞生长良好,细胞单层完整,视野中未见大量圆细胞或死细胞,而其余2种给药途径细胞病变明显.结果提示,金丝桃素可溶性粉对BVD-MDV有显著的直接杀灭作用.     

金丝桃素体外抗H9N2亚型禽流感病毒活性研究

研究金丝桃素体外抗H9N2亚型禽流感病毒的活性。用MTT法观察金丝桃素预防、治疗、以及体外直接作用15 min 4种给药方式对感染H9N2亚型禽流感病毒的细胞的保护效果,以及用荧光酶标法测定金丝桃素对禽流感病毒神经氨酸酶的抑制活性。结果表明,金丝桃素的4种给药方式在体外对感染禽流感病毒的细胞的的保护率分别为6.43%、5.31%、39.89%、69.04%。金丝桃素对禽流感病毒神经氨酸酶活性的抑制,IC50为0.58 mg/mL。表明金丝桃素对感染H9N2亚型禽流感病毒的细胞有一定保护的作用,且对神经氨酸酶的活性有较显著的抑制作用。     

金丝桃素蛋白络合物体外抗H5N1亚型禽流感病毒的活性研究

用鸡胚法进行了金照桃素蛋白络合物抗HSNI亚型禽流感病毒活性研究。分别采用了感染病素同时给药、给药后接种病毒、先感染病毒后给药三种方式，通过测定鸡胚尿囊液的血凝效价和计算药物对感染鸡胚的保护率，观察金丝桃素蛋白络合物的抗H5N1亚型禽流感病毒活性。实验结果表明，①药物在体外与病毒作用一段时间后不规则将其混悬液接种鸡胚，药物浓度在0.5mg/ml以上时，对感染鸡胚的保护率达100%。同时给药组的血凝效价显著降低，与对照组相比差异极显著；②在感染病毒前给药，药物浓度在2mg/ml以上时，对感染鸡胚的保护率达100%，药物组的血凝效价显著降低，与对照组相比差异极显著；③先感染病毒后给药，药物浓度在2mg/ml以上时，对感染鸡胚的保护率达88.9%，血凝效价明显隆低，与对照组相比差异显著。同时，在此种方式下，药物对病毒的抑制作用与药物浓度有一定依赖性，适当提高药物浓度，可以增强其抗病毒活性。     

伪狂犬病病毒吉林分离株感染BHK-21细胞的超微结构变化

以猪伪狂犬病病毒(PRV)吉林分离株PRV-JL感染体外培养的BHK-21细胞为模型,通过透射电镜对PRV的形态发生学和宿主细胞超微结构的动态变化规律进行研究。结果显示,PRV能导致BHK-21细胞圆缩,并发生细胞融合,形成合胞体;电镜观察到的病毒粒子呈球形或椭圆形,成熟的病毒粒子直径大小为140~210 nm,未成熟病毒粒子直径为90~150 nm,多呈中空状,部分呈致密核芯。病毒吸附于细胞后以膜融合的方式进入细胞,在胞核内复制,装配好的病毒粒子以出芽的方式离开细胞核,获得最初的囊膜,进入胞浆;在胞浆内的病毒粒子又利用高尔基体的膜结构合成第2层囊膜,形成完整的病毒粒子;最后包裹有完整病毒粒子的高尔基囊泡与细胞膜发生融合,将病毒粒子释放到细胞外。感染细胞超微结构变化主要表现为:细胞胞浆空泡增多,内质网扩张,线粒体增生、嵴肿胀、脱落,最后空泡化,整个细胞裂解、破碎。     

双倍盐MEM和传统MEM对BHK-21细胞生长和FMDV增殖的影响

采用双倍盐MEM细胞培养基与传统培养基进行了BHK-21细胞生长和FMDV增殖对比实验,实验结果表明两种培养基无明显差异,双倍盐MEM培养基工艺简单,易于质量控制,是细胞培养基选择的一个方向。     

不同浓度葡萄糖和谷氨酰胺对BHK-21细胞凋亡的影响

研究葡萄糖和谷氨酰胺两种重要营养物质对BHK-21细胞凋亡的影响,在BHK-21细胞体外培养过程中,加入不同浓度的葡萄糖和谷氨酰胺,每隔24 h取样细胞计数,活性分析和细胞凋亡率的测定.结果发现,当葡萄糖浓度降至0 mmol/L～4 mmol/L,谷氨酰胺浓度降至0 mmol/L～1 mmol/L时,细胞生长速率降低,...     

复方环丙沙星乳剂的研制及体外抑茵试验

为了充分发挥环丙沙星在兽医临床上的效果,克服其半衰期短和连续用药导致的不良反应,研制了一种复方环丙沙星乳剂.采用油乳剂灭活疫苗抗原缓释技术与药物乳剂制备技术相结合,将环丙沙星和乳酸TMP按5∶1比例制备成一种油乳剂,并对其性状及稳定性进行研究.用复方环丙沙星注射液作为对照,进行了该乳剂对5种细菌的体外抑菌试验.结果表明:复方环丙沙星乳剂为淡黄色、油乳状,pH值为6.3～6.6,颗粒平均大小为7.6μm,稳定性良好;复方环丙沙星乳剂对5种细菌的MIC值和MBC值显著强于复方环丙沙星注射液(P＜0.01).     

利用SUMO表达系统高效表达猪O型口蹄疫病毒VP0、VP1、VP3基因

根据GenBank中公布的猪O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)全基因合成了FMDV结构蛋白前体蛋白P1基因,同时设计了扩增FMDV结构蛋白VP0、VP1和VP3基因的引物。以P1基因为模板,分别经PCR扩增获得FMDV VP0、VP1和VP3基因。扩增产物克隆于Blunt载体中,酶切后将目的片段连接到原核表达载体SUMO中,构建重组表达质粒SUMO-VP0、SUMO-VP1和SUMO-VP3,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳可见融合蛋白均获得高效表达,融合蛋白表观分子质量分别约为55、48和40 ku。在IPTG浓度为1.0 mmol/L,温度为37 ℃,诱导5 h时融合蛋白表达量最大。Western blotting结果表明,融合蛋白均可被FMDV阳性血清识别,反应原性良好。     

伪狂犬病病毒Ra株对不同细胞增殖特性及致病性研究

本研究以伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)Ra株体外感染不同的细胞系为模型,研究PRV Ra株最适细胞系。试验采用ST细胞、PK-15细胞、Vero细胞、F81细胞、DF1细胞、MDCK细胞和CEF细胞7种细胞作为该毒株的接种对象,观察毒株在这几种细胞上病变特点、细胞病变时间及病毒增殖规律等并进行比较。观察结果发现,受试的各种细胞在PRV感染期间均能表现明显的细胞病变,但不同细胞在病变时间上存在较大差异,其中PK-15和ST细胞在感染后24 h内出现明显细胞病变,时间最早。TCID₅₀测定病毒增殖力结果表明,ST细胞在病毒增殖传代中毒力保持最好,与原毒株毒力相当,为10^6.9 TCID₅₀/0.1 mL。本试验结果表明,ST细胞是较适合于PRV Ra株体外研究的细胞系。     

元江县2018-2021年生猪O型口蹄疫免疫效果评价与分析

为了解元江县生猪O型口蹄疫（FMD O）疫苗免疫状况,并评估免疫效果,2018-2021年在全县10个乡镇的规模场和散养户中,随机采集生猪血清样品,采用ELISA方法进行免疫抗体检测。结果显示：不同年份FMD O免疫抗体合格率平均为64.94%;不同区域FMD O免疫抗体合格率平均为64.01%;不同养殖方式规模场FMD O的免疫抗体合格率（66.23%）与散养户（64.61%）相比,相差1.62个百分点,差异不显著（P＞0.05）。结果表明,近年来元江县生猪FMD O整体免疫效果不是很理想,出现免疫不达标的年份、区域及养殖方式,应引起高度重视,检测结果可为元江县生猪FMD O的潜在风险点控制、疫苗选择及防控提供参考。