用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７℃孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗、进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２Ｏ、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＩＬＴＶ、ＥＤＳＶ均为阴性。结果表明、用此法检测鸡胚尿囊液中ＩＢＶ．具有快速、敏感、特异的优点。     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性喉气管炎病毒，减蛋综合症病毒等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７Ｃ孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗，进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＴＢＤＶ、ＩＬＴ     

以免疫荧光染色法快速诊断鸡传染性支气管炎病毒

以免疫荧光染色法快速诊断鸡传染性支气管炎病毒利用鸡胚气管环培养（ＴＯＣ）是分离临诊材料中传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）最有效的方法。利用免疫荧光（ＩＦ）染色确定ＴＯＣ中的ＩＢＶ，以１９－２０日龄ＳＰＦ鸡胚气管切成６００μｍ厚的环，ＩＢＶ在ＴＯＣ传代多次...     

犬瘟热,猫细小病毒,犬腺病毒弱毒株的理化特性及生物学试验

以鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）、猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）、狗肾传代细胞（ＭＤＣＫ）从引进的疫苗中分别分离到犬瘟热ＣＤＶ－Ａ株、猫细小病毒ＦＰＶ株、犬腺病毒ＣＡＶ１株。对三个弱毒株的细胞病变规律,形态特征,病毒滴度,理化特性,核酸型,血清学交叉反应,本动物的安全性及免疫原性等内容进行了试验。鉴定结果表明,３个弱毒株均可作为制苗用毒种     

3种ELISA试剂盒检测火鸡鼻气管炎病毒抗体效果的比较

本文对３种ＥＬＩＳＡ试剂盒（Ｐａｔｈａｓｕｒｅ,Ｓｖａｎｏｖｉｒ和Ｆｌｏｃｋｓｃｒｅｅｎ）检测火鸡鼻气管炎病毒（ＴＲＴＶ）抗体的效果进行了比较。用活ＴＲＴＶ疫苗和灭活疫苗免疫ＳＰＦ鸡后定期取血清进行检测。所用疫苗株为英国Ｉｎｔｅｒｖｅｔ和法国Ｒｈｏｎ...     

鸽新城疫病毒的分离及其生物学特性测定

用ＳＰＦ鸡胚从疑似鸽新城疫（鸽ＮＤ）病鸽群中分离到一株病毒ＱＬ株,该病毒株能凝集鸡红细胞（ＲＢＣ）,这种凝集作用能被抗新城疫病毒（ＮＤＶ）阳性血清抑制;用抗ＮＤＶ单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ测定分离株为阳性。分离株经肌肉注射能使鸽发病和死亡,出现与自然发病鸽一致的症状和病变,但肌注ＳＰＦ鸡只感染,不见临床症状。对该分离株作进一步生物学特性鉴定,按照国际上规定的ＮＤＶ毒力判定标准,测定了该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间（ＭＤＴ）、１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）,结果ＭＤＴ为１０５小时、ＩＣＰＩ为１．３３、ＩＶＰＩ为１．０。试验结果表明本分离株为鸽新城疫病毒。     

传染性支气管炎病毒在鸡胚成纤维细胞中适应及复制的生物学特性研究

将传染性支气管郯病毒ＩＢＶ－ＮＨ、Ｔ、Ｈ５２、Ｍ４１适应鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）,连续传代获得毒价稳定细胞适应毒并对其生物学特性进行研究。观察了ＩＢＶ致ＣＥＦ细胞病变效应的特征,测定ＴＣＩＤ５０滴度为１０６．０～１０６．０。细胞培养病毒提纯后负染置电镜下进行形态学观察,见到典型的冠状病毒粒子。病毒经胰酶处理显示出血凝特性,该血凝性能被特异性血清所抑制。表明ＣＥＦ细胞病变（ＣＰＥ）确为ＩＢＶ所致。通过对４株ＩＢＶ在ＣＥＦ细胞中最佳培养时间及繁殖量关系的摸索,证实了３６～７２ｈ释放到培养液中有活性的病毒粒子达高峰,ＴＣＩＤ５０最高可达１０７．０／ｍｌ。     

鸡肾病变型传染性支气管炎病毒分离及免疫的研究

对自然发生的鸡肾病变型传染性支气管炎病例,进行了流行病学及病理化方面的检验。以新鲜病死鸡肾脏为材料,通过接种易感发育鸡胚尿囊腔的途径,进行病毒的分离与传代,分离到５株病毒（分别记作ＩＶＢ－ＨＱＣ９６０１、ＩＢＶ－ＨＱＣ８６０４、ＩＢＶ－ＨＱＬ９６０６、ＩＢＶ－ＨＱＣ９６１０、ＩＢＶ－ＨＴＬ９６１１）,经初步检验及对易感鸡的感染发病试验,表明为鸡肾病变型传染性气管炎病毒。用鸡肾病变型传染性气管炎Ｔ毒株分离毒株,制备灭活疫苗,初步试验表明具有良好的特异免疫保护效果。     

肾型传染性支气管炎病毒理化特性的鉴定

气管环组织培养（ＴＯＣ）是用于传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分离、鉴定和血清学检查的有效方法〔１〕。Ｊｏｈｎｓｏｎ（１９７５）应用ＴＯＣ中和试验将分离的ＩＢＶ分为１０个血清型〔２〕;吕化广（１９８９）采用ＴＯＣ、鸡胚接种增殖和血清学鉴定的联合方法诊断Ｉ...     

从疑似IBD病鸡的法氏囊组织中分离到1株ARV

从暴发类似传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的江苏省某鸡场采集病鸡法氏囊组织制成组织悬液，接种鸡胚卵黄囊，部分鸡胚３～５ｄ死亡，部分鸡胚不死亡但有病变。用感染胚卵黄囊和绒尿膜混合物，接种鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），盲传３代后，发现以合胞体为特征的细胞病变（ＣＰＥ）。感染细胞做超薄切片电镜观察，可见细胞浆内病毒粒子呈整齐的晶格状排列。用免疫沉淀法提取病毒抽提核酸，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，可见规律排列的１０条带，呈３－３－１－３排列。与禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）参考毒株Ｓ１１３３株的核酸谱带的数目和位置相同。血清学试验与ＡＲＶ呈阳性反应，与传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）呈阴性反应。证明分离病毒为ＡＲＶ     

鸡人工混合感染后引起的肿头性病变

鸡肿头综合征（ＳＨＳ）的主要特征是精神沉郁和颜面肿胀。在日本，自１９８９年在兵库县发现本病后，现已蔓延全国。其病因过去认为是由火鸡鼻气管炎病毒（ＴＲＴＶ）和传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）与大肠杆菌的混合感染所致，但用分离的ＴＲＴＶ感染鸡后，又不能复制出...     

传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB在重组鸡痘病毒中的表达

本试验首先用ＰＣＲ方法扩增出ＩＬＴＶ ｇＢ基因,将其克隆到质粒ｐＵＣ１１９中,并进行了序列分析。将克隆的ｇＢ基因再亚克隆到禽痘病毒转移载体质粒中,然后,通过质脂体方法转染由禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）中,筛选蓝色的重组病毒,并对其进行了６轮蚀斑纯化。该重组病毒通过ＰＣＲ方法鉴定证明其基因组中含有完整的鸡传染性喉气管炎ｇＢ基因,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ实验证明了该重组鸡痘病毒表达了鸡传染性喉气管炎ｇＢ糖蛋白。     

一日龄雏鸡感染鸡盆血病病毒及鸡呼肠病毒的协同作用

１日龄ＳＰＦ来航鸡经口双重感染鸡贫血病病毒（ＣＡＶ）Ｃｕｘ－１株及鸡呼肠病毒（ＲＥＯＶ）Ｓ１１３３或Ｕｃｈｉｄａ株。于接种后第１４天，检查血细胞压积（ＰＣＶ）、称体重、观察骨髓、胸腺及法氏囊病变。结果，双重感染ＣＡＶ及Ｓ１１３３株ＲＥＯＶ的雏鸡与感染其中之一病毒的雏鸡相比，其体重增重少，病变重，而且比仅感染ＣＡＶ的雏鸡在平均ＰＣＶ上也明显低。双重感染ＣＡＶ及Ｕｃｈｉｄａ株ＲＥＯＶ的雏鸡，不加重发病     

免疫鸡羽毛根中火鸡疱疹病毒的分离与鉴定

用常规剂量的商用火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）冻干苗经腹腔免疫１日龄非免疫鸡，于第３周采集羽毛根，分别采取直接法和间接法（即经过滤获取脱细胞的游离物）接种次代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），以进行病毒的分离。结果显示，在免疫后第３、４、５、６周，２种方法都分离到病毒，第７周仅直接法分离到病毒，而第８周２种方法都没有分离到。根据分离到病毒的细胞病变（ＣＰＥ）特征，结合地高辛标记的Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ－１）核酸探针检测结果，表明ＨＶＴ免疫鸡羽毛根中含有可脱离细胞的、具有感染性的疫苗株ＨＶＴ粒子，且其可检出时间具有阶段性。     

鸡传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定

本试验采用自然感染患鸡的气管粘膜及分泌物为材料，以鸡胚接种分离出一株病毒ＣＬ９４．通过接种鸡胚的病变特点、回归本动物试验、琼脂免疫扩散试验、毒价测定、中和试验以及有机溶剂的敏感试验等证明ＣＬ９４株分离毒是鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）．为证实ＩＬＴＶ在安徽存在提供了可靠的依据。     

PCR检测鸡减蛋综合征病毒

根据已报道的鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒ＤＮＡ序列，设计合成了１对引物，建立了ＥＤＳ－７６病毒的双温式聚合酶链反应（ＰＣＲ）诊断方法。该方法对ＥＤＳ－７６病毒长春株、河南株和广东株扩增结果均为阳性；而对致死鸡胚孤儿病毒（ＣＥＬＯＶ）、鸡病毒性关节炎病毒（ＶＡＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）和鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）的扩增结果均为阴性。可检测ＥＤＳ－７６病毒ＤＮＡ为０．３×１０－４ｐｇ。结果表明该方法特异且敏感。此外，将常规的三温式ＰＣＲ的操作规程改为双温式，反应体积由常规５０～１００μＬ改为２０μＬ，使其更加快速、简便、经济     

鸡,鸭体内传染性法氏囊病病毒的分离及理化性质比较

从疑似传染性法氏囊病（ＩＢＤ）病鸡及同群饲养的鸭体内各分离到１株病毒，用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ试验证明两病毒均为ＩＢＤＶ，病毒血清型为Ⅰ型。病毒可致死鸡胚，适应于鸡胚成纤维细胞并产生细胞病变（ＣＰＥ）。理化性质比较表明，两病毒为同源ＩＢＤＶ。研究表明，鸭可成为ＩＢＤＶ的携带者或传染源。     

鸡传染性喉气管炎病毒的分离鉴定

采用自然感染鸡的气管粘膜及分泌物为材料，以鸡胚接种分离出一株病毒ＣＬ９４。通过接种鸡胚的病变特点、回归本动物试验、琼脂免疫扩散试验、毒价测定、中和试验以及对有机溶剂的敏感试验等证明ＣＬ９４分离株是鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）。为证实ＩＬＴ在安徽存在提供了可靠的依据。     

鸡肾型传染性支气管炎病毒BK株的分离与鉴定

通过ＳＰＦ鸡胚传代培养、ＳＰＦ鸡胚气管环组织培养和鸡胚肾原代细胞培养,从一起有明显呼吸症状且又表现严重肾病变的鸡传染性支气管炎病例中分离到一株肾型传支病毒ＢＫ株。电镜观察表明,病毒粒子呈球状,直径９０～１００ｎｍ,纤突长１５ｎｍ,为典型冠状病毒。在ＳＰＦ鸡胚上盲传至５代,在ＴＯＣ上测其ＣＤ５０为１０－６．２。动物回归试验结果,试验鸡出现典型“花斑肾”,表明ＢＫ株具有较强嗜肾脏致病性。     

应用反转录多聚酶链反应（RT－PCR）对鸡传染性法氏囊病毒的基因检测研究

参考Ｃｕｌ株核酸序列自行设计一对２０ｂｐ序列为引物，经反转录和ＰＣＲ扩增传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）核酸高度保守的Ｖｐ４编码区中１５０ｂｐ的片段，用于检测ＩＢＤＶ。对德国Ｃｕｌ株、美国标准强毒ＳＴＣ和变异株１０８４Ｅ、中国ｑ８０１以及７个国内野外分离株分别进行扩增，同时对新城疫病毒（ＮＤＶ）、马立克氏病毒（ＭＤＶ）、禽呼肠孤病毒（ＲＥＯＶ）、禽腺病毒（ＨＡＡ）、Ｖｅｒｏ细胞、ＳＰＦ鸡法氏囊组织进行扩增后，２％琼脂糖凝胶电泳分析，１１株ＩＢＤＶ都出现分子量大小与设计相符合的ＤＮＡ扩增带，４种其他病毒、囊组织和Ｖｅｒｏ细胞都未出现任何扩增带。建立了直接采用细胞毒或组织毒进行ＰＣＲ的快速简便的核酸提取方法，应用二级ＰＣＲ扩增出了与一级ＰＣＲ相符的更加清晰的扩增带。