猪CD205特性的研究

CD205是树突状细胞(DCs)表达的一种细胞表面受体,在抗原捕获和递呈给内吞途径的过程中起重要作用。CD205除在DCs中表达外,还在胸腺上皮细胞中高表达,但在B细胞、巨噬细胞和T细胞中很少表达或几乎不表达。CD205在大多数动物中均有研究,但在猪中却鲜有报道。本试验对猪CD205及其在参与免疫反应的不同细胞和组织中mRNA的表达进行了研究。运用染色体步移扩增获得猪CD205的完整cDNA序列,长5175 bp,编码1723个氨基酸。Multi-domain structure分析发现,猪CD205与小鼠、人和牛的氨基酸同源性分别为74%、81%和85%。运用定量RT-PCR检测猪的正常组织和细胞,结果发现,CD205 mRNA在猪胸腺和郎格汉氏细胞中高表达。进一步研究猪CD205的特性,将有助于更好地了解该受体的作用,为深入研究抗原定向猪DCs提供参考依据。     

猪CD205单克隆抗体的制备和特性研究

本试验旨在研制猪CD205单克隆抗体,并对猪CD205蛋白在淋巴组织、单核细胞来源的树突状细胞(DC)及分离自猪皮肤的DC中的表达进行比较分析。本研究制备了针对猪CD205C型凝集素样结构域5的单克隆抗体1.F6F6,Western blotting结果显示其能识别肠系膜淋巴结细胞中约200ku的蛋白质条带。流式细胞仪分析结果表明,单克隆抗体1.F6F6能分别识别28.5%、28.1%、34.1%和6%的细胞扁桃体、腹股沟和肠系膜淋巴结和胸腺细胞。约20%单核细胞来源的DC呈阳性,而LPS激活的细胞阳性率增加至36%。约70%猪皮肤中分离的DC表达CD205受体。识别CD205受体的单克隆抗体的制备为应用抗针对DC靶抗原的CD205抗体增强免疫应答的启动新策略提供了可能。     

典型猪瘟病毒通过调节单核细胞衍生的树突状细胞抑制细胞的成熟未激活NF-κB

典型猪瘟病毒（CSFV）损害宿主的免疫系统，导致猪只发病。树突状细胞（DCs）是最强的免疫反应的发起者。此试验研究了典型猪瘟病毒对猪单核细胞衍生的树突状细胞（Mo-DCs）的影响。结果显示DCs表面标志的表达没有被削弱，例如MHC—II、CDSO、CD83和CD86，但是在感染典型猪瘟病毒后的48小时DCs表达CD172a明显增加。培养的Mo—DCs在不同处理后48小时，通过Q—RT—PCR检测细胞因子表达．细胞因子表达的剖面图被描绘出来。     

枯草芽孢杆菌芽孢对猪扁桃体内树突状细胞的影响

拟研究滴鼻给予猪鼻枯草芽孢杆菌芽孢对咽鼓管扁桃体和软腭扁桃体内树突状细胞数量的影响。10头2月龄杜长大三元杂交仔猪随机分为2组,分别用枯草芽孢杆菌芽孢和PBS进行鼻腔滴鼻,3h后打开鼻腔取出咽鼓管扁桃体和软腭扁桃体。选用MHCII、CD11b和CD16三种猪树突状细胞(DCs)抗体,对咽鼓管扁桃体和软腭扁桃体内DCs进行标记,通过共聚焦显微镜观察滴鼻前后DCs的变化情况。结果表明:应用枯草芽孢杆菌芽孢滴鼻后,咽鼓管扁桃体固有层和淋巴小结内CD11b+CD16+DCs和CD11b+MHCII+DCs的数量显著增加(P0.05),是正常对照的2~3倍;软腭扁桃体固有层和淋巴小结内CD11b+CD16+DCs和CD11b+MHCII+DCs的数量也显著增加(P0.05);并且CD11b+MHCII+DCs数量比CD11b+CD16+DCs多,但差异不显著。笔者的研究提示枯草芽孢杆菌芽孢滴鼻能够诱导树突状细胞在扁桃体内聚集,并促进树突状细胞成熟,从而有效提高扁桃体抵抗病原微生物入侵的能力。     

猪CD8β基因的克隆、表达及其结构与功能分析

本研究应用RT-PCR技术,从猪胸腺细胞总RNA中扩增、克隆了猪CD8β基因,序列分析表明CD8β含621 bp的开放阅读框,编码207个氨基酸,与NCBI/GeneBank已发表的参考基因的核苷酸及推导氨基酸序列的同源性分别为97.8%和96.8%,与人、小鼠和鸡CD8B蛋白的氨基酸同源性分别为75.7%、67.9%和33.3%.根据大肠杆菌密码子偏嗜性改造目的基因,构建了pET28a/PCD8 β原核表达系统,并经诱导获得高效表达的分子量为24 ku的重组蛋白(rPCD8 β),表达量占菌体蛋白总量的30%.利用生物信息学和分子生物学软件对猪CD8 β基因编码的蛋白进行结构预测,表明猪CD8 β成熟蛋白为跨膜蛋白,其中172aa在胞外区,22aa在跨膜区,10aa在胞内区;蛋白骨架内含有较多的柔性区域,而且分布不均匀.能形成结构松散的球状蛋白;猪CD8 β分子V区三维结构与鼠的具有非常相似的空间结构,与人的差别较大,这为猪CD8B蛋白结构与功能的进一步研究奠定了基础.     

姜平教授团队发现猪蓝耳病病毒免疫抑制作用的关键基因位点

正7月5日讯,2017年6月,国际病毒学顶级期刊《Journal of Virology》在线发表了南京农业大学动物医学院姜平教授团队陈曦博士生在PRRSV领域所取得的突破性成果,该研究首次提出并且阐明了PRRSV上调CD83表达的分子机制。CD83是树突细胞(DCs)分泌蛋白,是DCs发挥其激发免疫应答作用不可或缺的功能性分子,但分泌性CD83(sCD83)具有强大的抑制混合淋巴细胞反应和DCs细胞介导的同种异体T淋巴细胞增殖反应。     

猪CD3∈分子的cDNA克隆与序列分析

应用RT-PCR和3′RACE技术,本研究从猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增克隆了猪CD3ε基因并进行了序列分析。序列分析结果表明,猪CD3εcDNA序列长1241nt,其中5′非翻译区80nt,3′非翻译区570nt,开放阅读框591nt,该开放阅读框编码196个氨基酸残基的CD3ε前体蛋白(无糖基化位点);在猪CD3ε蛋白的胞外区,Cys49、Cys91、Cys108和Cys111为保守性氨基酸残基,它们与CD3ε免疫球蛋白样结构的形成有关。在猪CD3ε蛋白胞浆区,存在免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)、内质网潴留基序和1个SH3结合基序,其中ITAM基序含有2个SH2结合基序和2个潜在酪氨酸磷酸化位点Tyr177和Tyr188,这些基序是猪CD3分子参与T细胞活化信号转导和TCR-CD3复合体装配的结构基础。推导氨基酸序列分析结果表明,猪与人、鼠、狗、牛和绵羊CD3ε蛋白的氨基酸同源性分别为61.2%、58.7%、58.7%、65.1%和65.6%。     

猪CD74基因克隆、分子特性及其功能区结构研究

为研究猪CD74分子特性和功能,应用RT-PCR和RACE(rapid amplification of cDNA Ends)技术从猪脾脏细胞中克隆了完整的猪CD74基因。根据已知的部分CD74基因保守区序列,自行设计1对简并引物,扩增CD74较为保守的部分基因片段,根据测序结果设计系列引物扩增CD74基因,最后根据全基因测序结果设计1对特异性引物扩增猪CD74全长基因。分析和比对测序结果显示,完整的猪CD74基因全长存在1 145、1 337nt 2种类型,对应编码阅读框为651、843nt,分别编码217和281个氨基酸,提示猪CD74存在2种异构体结构。氨基酸序列研究表明,猪CD74与其他物种的CD74分子存在类似的胞浆区、跨膜区、内质网区和甲状腺区等功能区,存在L7I8和P15M16L17两个内体定位基元,内质网区包含CLIP区和三聚体区等结构域,异构体1 337nt较1 145nt多了编码64个氨基酸的Tg区。遗传进化分析显示,猪CD74与哺乳类物种间存在较高同源性,可达57%~82%,与禽类的CD74同源性为45%~51%,与鱼类、爬行类物种同源性最低仅为25%~34%。3D模拟结构显示,猪CD74与小鼠、人及禽类CD74存在类似的结构域,其中在一些关键部位氨基酸基本相同。     

猪CD58分子基因克隆、表达及其结构功能预测

CD58在机体免疫系统中具有重要作用,本研究通过对人、绵羊CD58 mRNA序列比对,设计兼并引物,应用反转录PCR技术克隆猪CD58基因,并在大肠杆菌中进行原核表达,同时运用生物信息学方法对其核苷酸序列、编码的氨基酸序列以及蛋白结构进行预测。结果表明:克隆的猪CD58 cDNA全长800 bp,ORF为735 bp;将其在大肠杆菌中进行表达,产物可被CD58抗血清识别;序列比对结果显示猪、羊和人的CD58核苷酸序列及氨基酸序列同源性并不高,但蛋白结构预测表明三者蛋白结构非常相似,尤其是V区三维结构,这是异种动物淋巴细胞和红细胞发生黏附的分子基础。该研究为CD58作为疫苗佐剂或免疫调节药物在临床中的应用、进一步研究CD58分子结构及CD2-CD58复合物激活免疫系统的机理奠定了基础。     

猪CD4分子的全长cDNA克隆与序列分析

CD4分子为动物辅助性T细胞（TH）和部分胸腺细胞的共受体与信号传导分子，参与TCR介导的TH细胞活化和胸腺细胞分化过程。本研究应用RT-PCR和RACE技术从猪胸腺细胞总RNA中扩增克隆了猪CD4全长cDNA序列，并进行了序列特性分析。序列分析结果表明，在猪胸腺细胞和外周血淋巴细胞中存在2种方式剪接的CD4 mRNA转录本，其中一种mRNA转录本缺失编码40个氨基酸残基的120nt序列，提示该转录本可能编码猪分泌型CD4分子；猪CD4全长cDNA序列为2715nt。其中5′非编码区159nt，3′非编码区1183nt，1374nt的开放阅读框编码457个氨基酸的猪CD4前体蛋白（含4个糖基化住点）；猪CD4分子的7个Cys残基（Cys^43、Cys^122、Cys^327、Cys^418、Cys^421、Cys^444和Cys^446）和2个Ser残基（Ser^432和Ser^439）在动物种间保守；在猪CD4分子胞浆区．存在高度保守的Src家族蛋白酪氨酸激酶p56^kk。识别位点KKTCQC和内化相关双亮氨酸基序。推导氨基酸序列分析结果显示，猪与人、免、猫、狗和鼠CD4蛋白的氨基酸同源性分别为56．0％，54．5％。56．9％，56．5％和44．9％。     

猪骨髓源树突状细胞与单核细胞源树突状细胞体外培养和功能鉴别

为比较来源于猪骨髓来源和外周血单核细胞来源的两种树突状细胞的生物学特性,本研究分别从猪骨髓和外周血中分离前体细胞,经重组猪粒细胞集落刺激因子（GM-CSF）和重组猪白细胞介素-4(IL-4)诱导分化为猪骨髓来源树突状细胞（BMDC）和猪单核细胞衍生树突状细胞（MoDC）,对这两种来源的树突状细胞进行形态学观察,细胞表型鉴定以及功能检测,并进行比较。结果显示：BMDC和MoDC均具有典型的树突状细胞形态和基本功能;BMDC和MoDC的分子表型为CD172a+MHC II+,经LPS刺激后表达升高;BMDC和Mo DC均具有吞噬功能,BMDC吞噬能力较强;在TranswellTM迁移实验中,Mo DC具有更好的迁移能力;BMDC和MoDC均可刺激淋巴细胞增殖,BMDC刺激淋巴细胞增殖率高于MoDC。本研究可为不同体外模型中DCs的选择提供依据。     

猪JHDM2A基因的克隆及表达分析

试验旨在克隆猪JHDM2A基因,并研究其在猪卵巢组织中的表达情况。首先克隆猪JHDM2A基因,并构建pLVX-IRES-ZsGreen1-JHDM2A真核表达载体,同时对JHDM2A基因在猪卵泡发育过程中的表达情况进行分析。结果显示,克隆得到的猪JHDM2A基因编码区长度为3 945 bp,编码1 315个氨基酸。通过多重氨基酸序列比对发现,猪JHDM2A基因与黄牛、水牛、绵羊和人相应氨基酸序列的同源性分别为93.5%、94.7%、94.7%和93.8%。蛋白质分子系统进化树分析结果表明,JHDM2A基因在物种进化过程中高度保守。通过脂质体转染法将构建的pLVX-IRES-ZsGreen1-JHDM2A真核表达载体导入HEK293T细胞,可观察到清晰的绿色荧光蛋白表达。免疫组化结果显示,JHDM2A蛋白在不同发育阶段猪卵泡中均有表达。本试验通过克隆获得猪JHDM2A基因序列,JHDM2A蛋白在猪卵巢中高度表达,表明其功能可能与猪卵泡发育密切相关。     

马身猪CD63基因CDS区的克隆、表达及生物信息学分析

为了克隆马身猪CD63基因的CDS区,检测其在不同组织中的表达规律,预测编码蛋白的结构与功能,该研究对山西省地方品种马身猪CD63基因CDS区进行扩增和克隆,采用qRT-PCR技术检测CD63基因在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、腰大肌、背部皮下脂肪等组织中的表达规律,采用生物信息学方法分析CD63蛋白的生物学特性。结果表明,该研究成功克隆出猪CD63基因的CDS区,全长714 bp,已上传NCBI数据库,登录号为MN082631。该基因在所检测的组织中均有表达,且在不同组织中的表达量有显著差异(P0.05),脂肪组织中表达量最高,其次是肝脏、肌肉、脾脏,肾脏中的表达量最低。经生物信息学预测,该基因编码的蛋白质含237个氨基酸,属于中性稳定四跨膜蛋白,有3个可能的N-糖基化位点,其中2个位点位于第3个与第4个跨膜结构域之间的胞外区内,另一个在第1个与第2个跨膜结构域之间的胞外区内;可能存在Ser磷酸化位点6个,Thr磷酸化位点4个,Tyr磷酸化位点1个;CD63蛋白为疏水性蛋白,α-螺旋、延伸、β-折叠和无规则卷曲分别占58.23%、11.39%、5.49%和24.89%。猪CD63蛋白氨基酸序列与野骆驼的相似性最高,其次是羊驼、长江江豚和抹香鲸,同时与骆驼科的野骆驼和羊驼的遗传距离最近,符合生物进化规律。该试验成功克隆了马身猪CD63基因CDS区,并进行了生物信息学分析,为深入探讨CD63基因生物学功能提供参考。     

猪带绦虫AgB与猪CD58或IFN-γ共表达质粒的构建及其在BHK-21细胞中的表达

猪囊尾蚴病是一种重要的人畜共患病,研制有效、安全、廉价的疫苗是当前主要的研究方向之一。本试验通过PCR方法,从含猪囊尾蚴B抗原（AgB）、猪CD58和猪IFN-γ的重组克隆质粒中扩增出AgB、CD58和IFN-γ基因,然后将其克隆到真核表达载体pBudCE4.1中。重组表达质粒鉴定后,在脂质体作用下转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光（IFA）或直接免疫荧光试验分别检测AgB、CD58和IFN-γ在BHK-21中的表达。结果显示,AgB、CD58和IFN-γ在BHK-21细胞中都成功表达,这为研制抗猪囊尾蚴DNA疫苗奠定了坚实基础。     

原头蚴外泌体对树突状细胞活化和细胞因子分泌的影响

为分析囊型包虫原头蚴(PSC)分泌的外泌体(Exosome)对树突状细胞(DCs)活化和分泌细胞因子的影响,本研究采用高速离心法结合外泌体提取试剂盒分离原头蚴分泌的外泌体(PE),收集的PE沉淀中加入去离子水低渗裂解离心,提取超滤后的蛋白浓缩液即为原头蚴外泌体超滤裂解物(PEL)。利用免疫磁珠从健康ICR小鼠脾脏中分选DCs,分别加入PE、LPS、PEL、PBS进行刺激培养,24 h后收集培养细胞及培养上清,利用流式细胞术检测DCs表面活化分子的表达水平及细胞因子分泌情况。结果显示:4组DCs表面表达CD40、CD80、CD86、MHCⅡ的比例相比,PEL组结果明显高于PE组,这两组较PBS组均显著升高(p<0.05),但3组均低于LPS组。PE、PEL组DCs培养上清中IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α均显著高于PBS组,且PEL组IL-12、TNF-α高于PE组,IL-6、IL-10水平低于PE组。以上结果初步证实PE能刺激DCs活化和释放细胞因子,低渗裂解超滤提纯外泌体蛋白并去除miRNA成分的PEL能够更有效激活DCs活化和促进细胞因子释放,表明外泌体蛋白可诱导抗感染免疫应答,exosomal miRNA成分可能参与虫体免疫逃逸。本研究为后续进一步探索包虫感染及抗感染免疫应答机理提供实验依据。     

猪CD151基因的克隆及过表达细胞系的构建

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)主要感染猪肺泡巨噬细胞,但对猪源的其他细胞系不易感。本试验通过构建PK15-CD151和3D4/21-CD151过表达细胞系,为深入研究PRRSV感染宿主细胞的机制奠定基础。应用分子生物学方法、实时荧光定量PCR和荧光显微镜技术,对基因CD151在组织中的分布情况进行检测、基因克隆、真核表达载体的构建、对CD151在PK15和3D4/21细胞内的过表达情况,以及对细胞生长增殖的影响进行了研究。结果显示:CD151基因在不同组织内均有表达,但表达量有差异;PB真核表达载体构建成功,荧光显微镜下可见转染PB载体和CD151基因共转染的PK15和3D4/21细胞表达强烈的绿色荧光,实时荧光定量PCR分析结果进一步证实,CD151在转染后的细胞中获得超表达,并且对细胞的生长增殖无影响。本试验成功构建了PK15-CD151和3D4/21-CD151过表达细胞系,过表达细胞系的成功构建为进一步探索CD151在PRRSV感染细胞过程中的协同作用提供了细胞模型,特别是对深入研究PRRSV的入侵及宿主识别具有重要意义。     

猪肽聚糖识别蛋白3和4的分子克隆、组织表达和亚细胞定位

肽聚糖识别蛋白(PGRPs)是是存在于大多数无脊椎动物和脊椎动物的先天性免疫分子。哺乳动物有4个PGRPs,PGLYRP1-4。本研究从成年猪食道中克隆了编码猪PGLYRP3和4的cDNA。猪PGLYRP3和4的完整开放阅读框长度相同,均为1125bp,编码374个氨基酸残基。相对于其与小鼠直系同源蛋白同源性(PGLYRP3为71.3%和PGLYRP4为67.9%),这两个蛋白质的氨基酸序列更接近于其人直系同源蛋白(PGLYRP3同源性为78.9%,PGLYRP4同源性为73.9%)。表达分析显示,在仔猪和成年猪中PGLYRP3和4在消化道,尤其是食道中的表达都强于脾脏或肠系膜淋巴结等免疫器官。本研究构建了转染细胞株来分析猪PGLYRP1-4的亚细胞分布。Western blot-ting和流式细胞仪分析结果表明,不同于PGLYRP1和2,猪PGLYRP3和4不仅能分泌表达,还能在细胞表面表达。本研究结果有助于促进对PGLYRP3和4通过识别仔猪和成年猪肠道微生物所介导的免疫反应的理解。     

仔猪小肠黏膜淋巴细胞的分离及表型鉴定

对小肠不同解剖位点分离得到的淋巴细胞进行表型鉴定,将有助于我们掌握猪黏膜免疫系统区分共生菌和致病菌的机理。我们的研究描述了分离空肠和回肠的上皮内淋巴细胞(IELs)和黏膜固有层淋巴细胞(LPLs)以及派伊氏结(PP)淋巴细胞的方法,并对表达CD3、CD4、CD8的淋巴细胞进行三色流式细胞分析。研究结果表明,分离的淋巴细胞活性高达90%以上。IELs和LPLs大部分是CD3+T细胞(67.90%⁸2.44%),少数是CD3-CD4-CD8+NK细胞(<5%)。IELs以CD4-CD8+细胞毒性T细胞(CTLs)占主导(43.61%82.44%),少数是CD3-CD4-CD8+NK细胞(<5%)。IELs以CD4-CD8+细胞毒性T细胞(CTLs)占主导(43.61%⁴8.49%),CD4+CD8-辅助性T细胞(TH)细胞只占10%左右。相反,LPLs中TH细胞占多数,为40%左右,而CTLs细胞占了16.97%48.49%),CD4+CD8-辅助性T细胞(TH)细胞只占10%左右。相反,LPLs中TH细胞占多数,为40%左右,而CTLs细胞占了16.97%¹9.24%。由于解剖位点不同,淋巴细胞的表型分布也不相同,最明显的是空肠和回肠PP结的淋巴细胞。空肠PP结CD3+T细胞的数量(54.08%)明显要多于回肠的PP结(15.26%)。小肠淋巴细胞中也可检测到CD4+CD8+双阳性细胞(DP)以及CD4-CD8-双阴性细胞(主要为γδT细胞),其中7.85%19.24%。由于解剖位点不同,淋巴细胞的表型分布也不相同,最明显的是空肠和回肠PP结的淋巴细胞。空肠PP结CD3+T细胞的数量(54.08%)明显要多于回肠的PP结(15.26%)。小肠淋巴细胞中也可检测到CD4+CD8+双阳性细胞(DP)以及CD4-CD8-双阴性细胞(主要为γδT细胞),其中7.85%²1.50%的肠黏膜淋巴细胞表达CD4-CD8-,但只有0.51%21.50%的肠黏膜淋巴细胞表达CD4-CD8-,但只有0.51%².06%的细胞表达CD4+CD8+。IELs表达CD4-CD8-的细胞要比LPLs多。本试验为研究黏膜免疫反应提供了细胞分离技术以及相关基础知识。     

猪肺脏气道上皮干细胞的特异抗体筛选与抗原表达研究

猪肺脏气道上皮主要由基底细胞,克拉拉细胞,纤毛细胞,杯状细胞等上皮细胞类型组成,筛选猪气道上皮干细胞的相关特异性抗体,观察其特异抗原的表达,将有助于对猪气道上皮干细胞的分离、鉴定和生物学特性的研究.试验中,制备远端气道上皮细胞的冰冻切片与细胞爬片,利用免疫荧光染色法,分析不同物种来源的抗体对猪气道上皮细胞的免疫染色反应;同时利用Oct3/4、Sox2、CD133和SSEA-1等10种上皮干细胞相关抗体分析猪气道上皮干细胞表面抗原表达情况.通过试验,筛选出在猪气道上皮干细胞相关抗体,并发现气道组织冰冻切片未检测到这10种抗体相关的阳性细胞,而在细胞爬片中观察到CD49f和CD117阳性细胞数量较多.免疫荧光共染发现这些CD49f和CD117阳性细胞同时也表达基底细胞表面标记Keratin 14.这可能是正常情况下猪气道上皮干细胞数量极为稀少,表面抗原表达量低而不易检测到,在肺脏气道上皮受到外环境刺激时(如消化),上皮干细胞开始增殖以完成损伤修复作用发生数量上的增殖.综上所述,利用Keratin 14和CD49f或CD117(c-kit)双标染色法可以鉴定猪肺脏气道上皮干细胞的候选亚群来用于其生物学特性与功能的研究.     

梅花鹿MMP-2催化域的基因克隆及原核表达

为了研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)与鹿茸生长发育之间的关系,构建MMP-2催化域原核表达载体,采用RT-PCR方法从鹿茸c DNA中扩增MMP-2的催化域基因,使用NdeⅠ和NotⅠ酶切位点连入原核表达载体p ET30a并进行诱导表达。结果显示:梅花鹿MMP-2的催化域与牛、山羊、大鼠、人、马、猪和绵羊等多个物种的MMP-2催化域进化上较为保守,氨基酸同源性分别为98.4%、99.5%、94.0%、96.2%、95.9%、96.4%和99.2%;重组表达的MMP-2 CD带有His标签,蛋白共有377个氨基酸,预测大小为42.04 ku,理论等电点为4.95;通过转化BL21感受态细胞和IPTG诱导,成功表达了目的蛋白,约占菌体蛋白的80%;经过SDS-PAGE检测和免疫印迹分析,发现目的蛋白主要表达在包涵体中。本试验为后续蛋白纯化及活性检测,进一步研究MMP-2在鹿茸生长中的作用提供了理论依据。