枫泾和长白母猪发情期促卵泡素、促黄体素含量动态变化研究

促卵泡素（FSH）和促黄体素（LH）对卵泡生长发育、成熟和排卵有重要生理作用。本研究对5头8月龄枫泾（FJ）和6头10-12月龄长白（L）青年母猪,用同源双抗放射免疫法测定血清中FSH和LH含量。结果是FJ和L猪组LH和FSH含量分泌范型基本相同。FJ和L猪排卵前LH最高峰值无差异显著性（P＞0.05）。发情期间FJ和L猪FSH分泌呈现两个明显的峰,第一次FSH峰与其排卵前LH峰并存,第二次FSH峰出现在发情后的2或3天。整个实验期间FJ猪FSH含量在高水平上波动,FSH首次峰、二次峰均值及实验期间FSH总平均含量均分别显著、极显著地高于L猪相应的FSH值（P＜0.05、P＜0.001、P＜0.001)。在实验的下个发情周期,FJ猪组平均每头排卵16.4±1.0个,显著高于L猪组的平均排卵数11.2±1.0（P＜0.005）。本结果提示FJ猪FSH含量高很可能就是制约其高排卵率的重要因素之一。     

促卵泡素(FSH)对山羊卵巢卵泡群生长发育的影响

试验研究了促卵泡素对山羊卵巢卵泡群生长发育的影响。６只母羊在发情周期的１３～１６ｄ用激素处理,处理前摘取左卵巢,处理后３ｄ摘取右卵巢,组织切片,检测卵泡数。结果显示：当卵母细胞由２层卵泡细胞包围时,开始形成透明带;当达５层以上时,开始形成腔隙。超排和未超排（对照）卵巢上小卵泡数差异不显著（Ｐ＞０．０５）,分别为３７２１±１１２个和３６８５±１５６个;而带有５层以上卵泡细胞的卵泡数差异显著（Ｐ＜０．０５）,分别为１４０±２０．３个和１１０．０±９．１个;卵泡腔形成后的卵泡数差异非常显著（Ｐ＜０．０１）,分别为７５．０±２０．２个和３２．０±１０．１个。带有１～２层卵泡细胞时期的卵泡直径大约３１．６±１．７μｍ,带有３～４层卵泡细胞的卵泡直径大约为５２．３±５．０μｍ,带有５层以上卵泡细胞的卵泡直径为１５１．２±７２．１μｍ,卵泡腔形成后的卵泡直径为０．４～３ｍｍ。     

二次盐析法提取猪脑垂体促卵泡素（FSH）的试验研究

脑垂体,俗称脑仁,是动物最小的内分泌器官之一,分前、中、后三叶,分别为独立的腺体,各自可制造特有的激素。促卵泡素(FSH)是垂体前叶分泌的一种糖蛋白类促性腺激素。在雌性动物中,FSH可刺激卵巢滤泡的生长和成熟,成熟的滤泡产生雌激素,再作用于子宫内膜促进其生长。滤泡生长后期,促黄体素(LH)必需在FSH协同下才能激发滤泡最后成熟,诱导排卵,使颗粒细胞变成黄体细胞,最后形成黄体。所以,FSH既可以刺激卵巢滤泡生长成熟,又可增强LH的排卵效应。由于FSH具有如此重要     

文昌鸡促卵泡素受体基因多态性分析

以促卵泡素受体(FSHR)基因作为影响鸡繁殖性状的候选基因,采用PCR-SSCP技术结合测序对编码FSHR胞外区部分的第1外显子(exon1)至第9外显子(exon9)共9个外显子区域进行单核苷酸多态性(SNPs)分析,寻找与鸡繁殖性能相关的遗传标记,为高繁殖力的标记辅助选择提供科学依据。结果表明:在exon2、exon4、exon6、exon8区域存在SNPs位点,分别在exon2片段中编码区5′端-49 bp处的C→T突变;exon4片段中编码区43 bp处的T→C突变,但未引起氨基酸的改变;exon6片段中编码区3′端+12 bp处的A→G突变;距exon8编码区3′端+38 bp处的G→T突变。经适合性检验,各基因的基因频率在群体内的分布均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05)。FSHR是促卵泡素的特异性受体,这些位点的多态为进一步研究FSHR基因多态性对文昌鸡繁殖性能的遗传效应奠定了基础。     

超数排卵效果不同绵羊卵巢卵泡促卵泡素受体的分布

 【目的】探讨在具有不同超数排卵效果的绵羊品种中,进行超排处理后其卵巢上促卵泡素受体(FSH receptor,FSHR)的分布情况,为进一步研究二者的相关性及据此改进超排效果奠定基础。【方法】根据超数排卵效果优劣依次选择3个中国地方品种的绵羊：小尾寒羊、白滩羊和乌珠穆沁羊。在常规超排最后一次注射FSH后的8、16和24 h分别各取3只绵羊的卵巢,并采用免疫组织化学法观察3种绵羊卵巢上FSHR的分布情况。【结果】FSHR主要分布于3个品种绵羊卵巢的颗粒细胞上;小尾寒羊最后一次注射FSH后8、16和24 h的各时期卵泡中FSHR的表达都显著高于另外两个品种绵羊(P＜0.05),在早期卵泡和中期卵泡中,白滩羊的FSHR表达量也高于乌珠穆沁羊;3个品种绵羊在最后一次注射FSH后第8、16、24小时,其晚期卵泡FSHR表达阳性率都显著高于各自相应的早期和中期卵泡(P＜0.05)。【结论】推测出3个不同地方品种绵羊的卵巢对FSH处理的敏感性应该依次为：小尾寒羊＞白滩羊＞乌珠穆沁羊,表明绵羊超数排卵效果与其卵巢上FSH受体分布存在一定联系。     

促卵泡素对犬卵母细胞体外成熟的影响

为探究基础培养基中添加促卵泡素(FSH)对犬卵母细胞体外成熟的影响,采用切割法收集卵巢表面的卵丘卵母细胞复合体(COCs),培养在添加不同浓度FSH(0,0.1,1,10 IU/mL)的TCM-199基础培养液中.体外培养72 h后,对卵母细胞进行染色观察其细胞核成熟情况.结果表明,FSH的添加没有增加犬卵母细胞恢复减数分裂的细胞数量.此外,不同处理对卵母细胞卵丘扩散无差异.     

多浪羊和卡拉库尔羊卵巢促卵泡素受体的定位研究

[目的]探讨多浪羊和卡拉库尔羊卵巢组织中FSHR基因表达变化规律.[方法]采用免疫组织化学SP方法对两种绵羊卵巢组织上FSHR进行定位研究.[结果]FSHR阳性细胞主要表达在颗粒细胞上,在卵母细胞和膜细胞上也有少量表达,两地方品种绵羊卵巢上原始卵泡和闭锁卵泡时期表达差异不显著(P＞0.05),而在初级卵泡、次级卵泡时期和成熟卵泡上表达差异显著(P＜0.05);对同种绵羊分析时又发现原始卵泡与其他卵泡之间FSHR阳性细胞表达差异显著(P＜0.05),成熟卵泡时期阳性细胞表达显著(P＜0.05)高于初级和次级卵泡.闭锁卵泡是阳性细胞率与其他各级卵泡差异极显著(P＜0.01).[结论]推测出多浪羊对FSH的敏感性高于卡拉库尔羊,表明FSHR含量越高繁殖率越高.FSHR可能也参与其他因子的调控.     

猪ESR、FSHβ和leptin基因多态性及其与卵泡囊肿的相关性

雌激素受体基因(ESR)、促卵泡素β亚基基因(FSHβ)和瘦素基因(leptin)是影响卵泡生长发育的主效基因,在母猪繁殖过程中起关键的作用。试验采用PCR和PCR-RFLP技术检测ESR、FSHβ和leptin基因的单核苷酸多态性,分析各基因多态性与卵泡囊肿的关系。结果表明:3个基因共检测到3个多态位点,分别是位于ESR基因内含子AG突变,FSHβ基因内含子TC突变,leptin基因外显子CT突变。ESR的AA和AB基因型在健康群体和卵泡囊肿群体分布差异显著(P0.05),该基因型可以作为检测卵泡囊肿的标志基因型;FSHβ基因和leptin基因的AA、AB和BB基因型分布在检测群体中均未见显著差异(P0.05)。     

间接ELISA法检测促卵泡素抗体方法的建立

建立了检测促卵泡素(FSH)抗体的间接ELISA方法,用该法检测由FSH-BSA免疫BaLb/c小鼠所分离的5份待检血清,结果均为阳性。通过反复试验,确立间接ELISA检测FSH抗体的最佳反应条件,即酶标二抗工作浓度为1∶1 200,抗原包被浓度10μg/mL,待测血清最佳稀释度为1∶500,封闭液为1.0%的脱脂奶粉,同时设置抗原阻断试验对结果进行验证。     

哺乳动物促卵泡素氨基酸序列特征及其单克隆抗体的制备与鉴定

为制备哺乳动物促卵泡素(FSH)单克隆抗体,比对了人类、家畜、部分野生动物、鼠类等哺乳动物FSH氨基酸序列,分析其种间同源性,结果发现,多种哺乳动物FSHβ亚基氨基酸序列的同源性高于80%,且线性抗原表位高度保守。从奶牛垂体组织扩增FSHβ亚基CDS片段,构建p ET28aFSH重组质粒,诱导表达FSH重组蛋白,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞孔,取效价最高孔进行克隆和亚克隆,获得1株能够分泌抗FSH的单克隆抗体细胞株,命名为B4A5。B4A5细胞株经过数次传代培养、反复冻融后生长状态良好,且能够稳定分泌抗体。采用细胞株体外培养和小鼠腹水诱生法均制备了抗FSH的单克隆抗体,其效价分别为1∶640、1∶106。分别采用Western blot和间接ELISA法鉴定单克隆抗体的结合特异性和交叉反应性,结果显示,制备的单克隆抗体与FSH反应呈阳性,与促黄体素(LH)、促甲状腺素(TSH)、促乳素(PRL)、人绒毛膜促性腺激素(h CG)均无交叉反应性。综上,获得了1株能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体可特异性结合FSH蛋白。     

聚乙烯吡咯酮与促卵泡素配合治疗奶牛卵巢萎缩的研究

本试验应用聚乙烯吡咯酮(PVP)与促卵泡素(FSH)相结合,利用PVP可以对FSH起包被和缓释而延长FSH在动物体内半衰期这一特性,进行了对奶牛卵巢萎缩的治疗试验,并与FSH分次注射和PMSG注射法的疗效进行了比较,试验结果表明,PVP与FSH结合组(A组)的疗效效果与FSH分次注射组(B组)、PMSG注射组(C组)间差异不显著(p>O.05),但治愈率分别高8.3和13.9个百分点。     

沼泽型水牛促卵泡素基因β亚基的克隆与序列分析

根据GenBank公布的奶牛FSHβ亚基的编码序列设计1对特异性引物,成功克隆出广西沼泽型水牛FSHβ亚基cDNA,并将其序列提交到GenBank,获得接受号为EF710660。以DNA Star生物分析软件对其同源性进行分析,结果表明,广西沼泽型水牛与已公布的印度水牛（Bubalus bubalis）的FSHβ亚基cDNA序列的同源性最高,达99%,与绵羊（Ovis aries）为96%、牛（Bovine）为95%、山羊（Capra hircus）为95%、梅花鹿（Cervus nippon）为95%。     

促卵泡素分泌细胞在广西摩拉水牛脑垂体中的分布与定位

采用免疫组织化学SABC法并结合DAB显色技术对广西摩拉水牛脑垂体结构和促卵泡素分泌细胞进行了研究和定位.结果发现,广西摩拉水牛的垂体前叶由远侧部、结节部和中间部构成,远侧部占据了腺垂体的大部分.垂体促卵泡素免疫阳性细胞分布广泛,以垂体前叶远侧部分布较多,从而表明广西摩拉水牛整个垂体都有促卵泡素分泌,主要分泌部位在垂体前叶的远侧部.     

猪脑垂体基因文库构建和促卵泡激素基因克隆的筛选

用甘油分级梯度离心法纯化噬菌体入EMBL_4,将纯化的EMBL_4DNA用BamHI/SaLI双酶切。用蛋白酶K及SDS法提取猪大分子DNA,Sau 3A部分酶切,将15-20Kb的“目的”DNA片段与载体连接,体外包装成噬菌体,构建了猪的基因文库。所得重组子值为1.38×10~6pfu,超过了建库要求的理论值,将基因文库DNA分成十份,用~(32)P标记合成的促卵泡激素基因寡核酸探针进行分子杂交,筛选出强杂交组分,进一步从强杂交组分中筛选出了几个阳性克隆。     

胰岛素对初情期前母猪垂体细胞促性腺激素释放及生长激素分泌的影响

[目的]探讨胰岛素对猪垂体前叶细胞无血清单层培养细胞分泌促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、生长激素(CH)的影响。[方法]24头140日龄、体重17 kg的母猪被分成高、中、低3个能量组,利用无血清单层培养垂体模型,并用放射免疫法测定细胞液促卵泡素、促黄体素和生长激素浓度。[结果]在不同能量水平上,胰岛素对单层无血清培养垂体细胞FSH、LH及GH释放能力的影响有显著差异(P<0.05),高能组较高,低能组较低。[结论]首次研究了在初情期前母猪体外培养垂体细胞中添加胰岛素对垂体细胞分泌激素的影响,证实代谢激素在初情期前母猪下丘脑-垂体-卵巢水平上调节生殖机能。     

长白母猪排卵时间和适配期研究

通过对发情母猪分批屠宰测定表明，长白母猪排卵时间为发情特征出现后４８小时至７２小时左右。经采用长白和杜洛克公猪分别在母猪发情的不同阶段配种，对所产仔猪遗传特征鉴别结果证明，排卵大多集中在发情特征出现６０小时前后，相应地同期配种的产仔比例达７３．５６％。因此，确定掌握适配期为发情特征出现后４８小时左右作第一次配种，间隔１２—２４小时内复配一次，实施效果显著，第一期情受胎率为９４．５６％，平均窝产活仔数为（１０．１６±０．２６）头。     

猪卵泡液和促性腺激素处理时间对猪卵母细胞体外成熟的影响

研究猪卵泡液(pFF)的浓度和促性腺激素(FSH和LH)处理时间对猪卵泡卵母细胞体外成熟的影响.结果表明,在猪卵丘细胞-卵母细胞复合体体外成熟培养46～48 h中的后23～24 h去除促性腺激素可有利于卵丘细胞的扩散,但对卵细胞的核成熟无显著影响(P>0.05);添加适量(10%)的pFF对猪卵母细胞体外成熟有一定的促进作用,但添加浓度太高则相对抑制卵子核成熟进程.     

福建黄兔促卵泡素β亚基(FSHβ) cDNA序列的克隆与序列分析

从性成熟的福建黄兔母兔脑垂体中提取总RNA,经RT-PCR扩增目的片段,获得长为390bp的黄兔促卵泡素β亚基cDNA片段。将扩增的片段与pMD18-T载体连接,转化至DH5α感受态细胞中。随机挑选阳性重组子进行鉴定、测序,将测序结果与包括人、奶牛、绵羊、水牛、小鼠在内的多种哺乳动物基因序列进行同源性分析,同源性相似度72.2%~96.5%,同时遗传进化分析结果表明,兔形目的FSHβ基因与灵长目动物的亲缘性更高。对福建黄兔与日本白兔已提交的FSHβ亚基的cDNA序列进行比较,发现在81bp及219bp处存在C→T和G→A两处突变,但未引起氨基酸变化。     

光照时间对兴国灰鹅产蛋和PRL、FSHβ、LH mRNA表达的影响

为研究光照时间对兴国灰鹅产蛋量及产蛋性状相关基因在下丘脑-垂体-性腺轴表达水平的影响,对兴国灰鹅分别进行长光照处理(试验组)和自然光照处理(对照组)。结果发现,整个试验阶段,对照组持续产蛋,产蛋率维持在10%以上,处理组在接受递增式长光照至40 d左右时,产蛋率下降到8%左右,并于试验第47天停产。基因表达水平方面,相对于对照组产蛋期鹅,试验组鹅下丘脑中催乳素(PRL)的mRNA表达水平与输卵管和卵巢中促卵泡素(FSHβ)的表达水平均显著升高,而卵巢中黄体生成素(LH)的mRNA表达水平显著降低。这些结果表明长光照可通过影响PRL的mRNA表达,从而导致FSHβ和LH表达比例失调,最终影响FSHβ和LH的协同作用,从而抑制兴国灰鹅的产蛋活动。     

促黄体素（LH）和促黄体释放激素类似物（LRH-A）防止内蒙古山羊流产的研究

研究结果表明：在山羊配种后一次肌注促黄体素（LH）200单位或促黄体释放激素类似物（LRH-A）300微克,防止内蒙古山羊流产具有明显的效果和经济效益,可以使内蒙古山羊的繁殖率提高20%以上。並用放射免疫测定法对正常妊娠山羊和流产山羊外周血液中的孕酮和雌激素的含量进行了测定。LRH-A防止内蒙古山羊的流产作用是：通过刺激山羊自身垂体释放促黄体激素的功能,从而促进卵巢黄体合成和分泌孕酮,以维持母畜的正常妊娠。