斑点金标免疫渗滤新技术检测家畜血吸虫病的效果试验

斑点金标免疫渗滤新技术(简称金标法)检测家畜血吸虫病抗体,在本省进行了特异性、敏感性、符合率等试验.金标法能检出人工感染犬血吸虫14 d后的血吸虫病抗体,检出率为100%,可用于血吸虫病早期诊断.粪孵100头份血吸虫病阳性的牛血纸,用金标法检测全部为阳性,阳性符合率为100%;在非疫区的2个县分别采牛血纸100份,用金标法进行检测,未查出血吸虫病阳性牛,阴性符合率为100%.在金标法检测4 000份牛血纸,检出阳性牛为129头,再对这129头牛采粪孵化,有血吸虫毛蚴的牛128头,金标法与病原学检查法阳性符合率为99.2%(99%～100%).在本省54个血防疫区县推广应用,取得了显著的社会经济效益.     

斑点金标免疫渗滤法快速检测牛血吸虫病抗体的效果观察

目的观察斑点金标免疫渗滤法检测牛血吸虫病抗体的效果。方法使用斑点金标免疫渗滤诊断试剂盒检测粪检血吸虫病牛血清(血纸)146头份,疫区耕牛血清(血纸)562头份,并用间接血凝法(indirect haem aggluti-nation assay,IHA)法作对比。结果146头份粪检阳性血清(血纸)检测为阳性者140头份,阳性检出率95.9%,IHA法检测为阳性者141头份,阳性检出率96.6%。结论斑点金标免疫渗滤法检测牛血吸虫病具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点,但仍有一定漏检,有待于进一步研究提高。     

斑点酶标法与斑点金标免疫渗滤法检测牛血吸虫病初探

目的比较宽点酶标法与癍点金标免疫渗滤法检测牛血吸虫病的效果。方法选择疫区水牛,耳静脉取血制备血纸,作为待检样品。分别采用斑点金标免疫渗滤法与癍点酶标法检测,比较检测结果。结果癍点金标渗滤法检测仅需30min,而斑点酶标法则需160min。结论疵点金标免疫渗滤法检测牛血吸虫病,操作简便易行、快捷,省时、省工,工作效率成倍提高。     

检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法研究

将待检家畜血纸浸出液点在硝酸纤维素膜上，以金标记的血吸虫虫卵可溶性抗原为探针（以下简称血吸虫抗原胶体金），建立了检测家畜血吸虫抗体的二步金标免疫渗滤法（Two-step Dot Immunogold Filtration Assay，T—DIGFA）。家畜血吸虫病阳性血样在50-90S形成肉眼可观察的红色斑点，可进行快速诊断。该法可以检测出人工感染血吸虫尾蚴7d和7d以上的阳性牛和兔血纸抗体，与肝片吸虫、锥虫、蛔虫病之间无交叉反应。T—DIGFA检测粪孵血吸虫毛蚴阳性牛血纸139份、阴性牛血纸130份，与粪孵法阳性符合率为100％，阴性符合率为99．2％；T—DIGFA与斑点酶联SPA法阳性符合率和阴性符合率完全相同。血吸虫抗原胶体金在4～8℃保存期可达6个月、室温保存期为3个月。试验证实，T-DIGFA有很高的敏感性、特异性、重复性和稳定性，适合于基层单位和现场进行家畜血吸虫病抗体的快速诊断、普查和检疫。     

应用斑点免疫金渗滤法诊断犬弓首蛔虫病

根据免疫渗滤原理,采用犬弓首蛔虫抗原蛋白和胶体金标记SPA,建立抗犬弓首蛔虫抗体的斑点免疫金渗滤法(D IGFA)检测200份犬血清样本。结果:阳性检出率为8.00%(16/200);血清样本对应犬粪便用饱和盐水漂浮法检查虫卵,阳性检出率为2.0%(4/200)。结论:斑点免疫金渗滤法具有操作简便、灵敏度高、特异性强的优点,可用于犬弓首蛔虫病的早期、快速检测。     

胶体金免疫渗滤技术检测棘球蚴病抗体试剂盒的研究

应用胶体金免疫渗滤技术检测已确诊的棘球蚴病患者血清抗体，从65例患者中检出阳性53例，阴性12例，阳性符合率为81．5％，敏感性为84．4％，用该技术对107例非棘球螺病对照血清检测，特异性达93．0％，诊断效率达78．5％，认为胶体金免疫渗滤技术为一种较好的棘球蚴病抗体检测方法。     

猪乙型脑炎血清抗体DIGFA检测方法的建立与应用

本试验建立了一种以固相滤膜为载体，以红色胶体金颗粒标记的免抗猪IgG作为探针，特异性地检测猪流行性乙型脑炎病毒抗体的斑点金免疫渗滤测定法（DIGFA）。与血凝抑制试验（HI）对比检测了54份猪血清临床样本，两法的阳性符合率为71.4%、阴性符合率为65.5%、总符合率为81.4%。本法中抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应，数分钟内即可用肉眼观查结果，具有快速，操作简单，敏感性高，特异性强，重复性好，易于判读等优点，特别适合于猪流行性乙型脑炎快速诊断和大规模血清流行病学调查。     

试管倒插法诊断家畜血吸虫病效果观察

2006-2008年采用斑点金标免疫渗滤法(DIGFA)血检诊断阳新县牛(羊)血吸虫病,血检结果为阳性病牛(羊)再采用试管倒插法(顶管法)进行粪便孵化而确诊。结果表明,实行以上两种方法进行诊断,准确率极高。是控制血吸虫病流行、保护人民身体健康的最佳办法。     

斑点酶联免疫吸附试验检测牛羊捻转血矛线虫病的研究

应用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测牛羊捻转血矛线虫病抗体，经对３９头剖检羊血纸检测，结果表明该法与剖检法的阳性符合率达１００％（２７／２７），阴性符合率也达１００％（１２／１２）。Ｄｏｔ＝ＥＬＩＳＡ能检出第四胃寄生１＝３３８条捻转血矛线虫羊的血清或血纸抗体；应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对５９９份牛、羊血纸的测定结果，与粪检地的阳性符合率达９５．５８％，阴性符合率达９１．４３％。初步认为Ｄ     

血纸间接血凝与斑点金标诊断血吸虫病效果对比试验

为探讨快速、准确、简便、经济的血吸虫病血清学诊断方法,减轻劳动强度,作者于2007年6月在常德市贺家山农场对290份血样(其中牛190份,羊100份)进行了血纸间接血凝诊断与斑点金标诊断效果对比试验。结果表明:斑点金标诊断法操作简单,所需检测器械较少,检测时间短,但成本相对较高;间接血凝法操作较为复杂,检测时间较长,但成本相对较低。     

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记SPA，建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色，阳性者出现红色斑点，结果易于判断。整个试验过程仅需5min，操作简单，与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较，符合率达98．4％和98．9％。说明该法微量、特异、敏感可靠，检测时间短，效果直观，非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。     

斑点金标渗滤法检测猪囊虫病

以亲和层析原理为基础,用猪囊虫纯化抗原作为检测用抗原,胶体金直接标记抗原,建立了斑点金标渗滤法诊断猪囊虫病的方法。其中囊虫抗原与胶体金溶液结合的最佳pH值为7.5,最佳浓度为52 mg/mL,检测时血清的最佳稀释度为1∶10。建立的斑点金标渗滤法检测猪囊虫病血清均为阳性,正常猪及其他病猪血清均显示为阴性,整个检测时间只需要5 min左右。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪囊虫病的临床诊断和流行病学调查。     

斑点金标免疫渗滤法诊断家畜血吸虫病的效果

我县从2005-2006年推广应用斑点金标免疫渗滤法(DIGFA)诊断家畜血吸虫病新技术,该项新技术具有快速、简便、准确、省时、省力等优点,使阳性病畜得到及时治疗,取得了满意的效果。1材料与方法1.1诊断试剂DIGFA诊断试剂及Dot-ELISA诊断试剂均由浙江省农业科学院畜牧兽医研究所提供     

斑点金免疫渗滤测定法检测耕牛血吸虫病的效果观察

免疫胶体金技术是以胶体作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型免疫标记技术，没有潜在致癌物质的酶显色底物。斑点金免疫渗滤测定法是将斑点酶标与免疫胶体金结合起来的一种新型免疫标记技术。该测定方法是将被检抗体（血清或血纸浸出液）直接点样在硝酸纤维素膜上，滴加胶体金标记的血吸虫抗原，特异性抗原与抗体很快结合，在反应处发生金颗粒聚集，1min左右形成肉眼可见的红色斑点，判定检测效果。     

免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验对昆明地区犬弓形虫血清学调查的对比

为了解昆明地区犬弓形虫的流行情况,采用免疫金标试纸和间接血凝试验(IHA)检测弓形虫的效果差异。实验采集258份血样,离心得到血清,将每1份血清平均分成A、B组,A组用免疫金标试纸检测,B组用正向间接血凝试验检测。结果表明:A组阳性样本血清74份,阳性率为28.68%;B组血清凝集价≥1:64的有68份,阳性率为26.37%。将A组血清样本按照犬来源进行统计分析,结果流浪犬的感染率远高于家养犬。说明昆明地区犬弓形虫普遍存在,免疫金标试纸的敏感性高于正向间接血凝试验的敏感性。     

斑点金免疫渗滤测定法检测耕牛血吸虫病

免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，没有潜在致癌物质的酶显色底物。斑点金免疫渗滤测定法是将斑点酶标与免疫胶体金结合起来的一种新型的免疫标记技术。将被检抗体（血清或血纸浸出液）直接点样在硝酸纤维素膜上，滴加胶体金标记的血吸虫抗原，特异性抗原与抗体很快结合，在反应处发生金颗粒聚集，1min左右形成肉眼可见的红色斑点。     

猪蓝耳病免疫抗体监测问题探讨

一组实验猪场应用PRRS灭活疫苗免疫猪场生猪,采集同一份猪血清ELISA试剂盒检测,测不出免疫抗体(0∕14),金标检出阳性率(9∕14)64.28%;另一组用进口减毒活苗免疫的同一份猪血清ELISA检出阳性数百分百(16∕16),金标检不出(0∕16)。另一实验猪场灭活苗两次免疫,金标检出阳性率(16∕21)76.19%,ELISA检不出;活疫苗两次免疫,ELISA检出阳性率(16∕21)76.19%,金标检不出。结论不同疫苗免疫效果,用不同检测方法,结果差异很大。     

斑点免疫金渗滤法检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

应用提纯的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)建立了检测PRRS抗体水平的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法通过胶体金标记SPA直接显色，阳性者出现红色斑点，整个试验过程仅需5min即可判断结果；与猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病阳性血清不发生交叉反应；纯化PRRSV抗原的最低检测量为0．0553mg／mL，即55．3ng／点。对200份猪血清用该法与ELISA同时进行PRRS抗体检测，两种方法的符合率达98％。     

亚洲象肝片吸虫病的免疫诊断和治疗

在国内首次用斑点免疫金渗滤法（Dot-immunogold filtration assay,DIGFA)对亚洲象的肝片吸虫病进行了免疫诊断，并采用10%肝蛭净进行治疗，获得成功。试验结果表明，斑点免疫金渗滤法诊断大象肝片吸虫病是一种敏感、快速、简便和实用的方法。     

胶体金法和平板及试管凝集检测羊布鲁氏菌病的比较

为了验证免疫胶体金法(ICG)在羊布鲁氏菌病检测中的应用效果,选择经虎红平板凝集试验(RBPT)检测出的羊阳性和阴性血清各15份、经试管凝集试验(SAT)确定的阳性羊现场采集的耳尖全血15份,用胶体金法进行复检。结果表明,平板凝集检出的15份阳性血清用胶体金法检出阳性13份,符合率86.7%;平板凝集检出的15份阴性血清用胶体金法检出阴性15份,符合率100%;试管凝集检出的15份阳性样品,现场采集耳尖血用胶体金法检出阳性15份,符合率100%。初步表明胶体金法具有操作简便、快速、微量等特点,适合于羊布鲁氏菌病的现场检测。