猪流行性腹泻病毒实验感染猪排毒规律的研究

将健康猪12头,随机分为3组,每组4头,分别以肌肉接种、口服和滴鼻三种不同途径感染猪流行性腹泻病毒(PEDV)。用ELISA、电子显微镜技术对PEDV实验感染猪的排毒规律进行了研究。结果证明,PEDV感染猪除了可经粪便排毒外,还可经呼吸道分泌物向外排毒,即PEDV除了可在肠上皮细胞增殖外,还可在呼吸道内复制。实验感染猪一般于接种后2.5～5.2d尚未出现临床症状时开始排毒,持续排毒时间长达54～74 d。因此认为,不仅处于潜伏期的猪可以排毒,而且病愈后的猪也可以长期排毒,是潜在的危险传染源,在防疫上必须引起充分的重视。另外,也证明PEDV可经消化道、呼吸道和肌肉接种途径感染猪体。而此三种途径感染的猪,其临床表现存在着明显差异,即肌肉接种猪易感,日服猪次之,滴鼻猪不易感。     

间接法Dot-ELISA检测猪流行性腹泻抗体的研究

使用非洲绿猴肾（Ｖｅｒｏ）细胞增殖适应传代细胞培养的猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ），并经聚乙二醇（ＰＥＧ）沉淀法分离纯化ＰＥＤＶ抗原，建立斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪流行性腹泻（ＰＥＤ）抗体。在最适工作条件下，进行了敏感性和特异性试验，结果表明，该法检测ＰＥＤＶ抗体，敏感、特异、重复性好，且方便、快捷，适用于大批量试样的检测，可作为一种诊断ＰＥＤ的比较理想的方法。采用此方法分别对来自加拿大、台湾省进口的种猪和海南省和广东省内种猪群的血清样共８３４份进行了检测，检测得ＰＥＤＶ抗体阳性率达２１％。     

间接ELISA检测猪流行性腹泻病毒的抗体水平

本研究以猪流行性腹泻病毒细胞培养物中提纯的抗原,组织毒兔获得的高兔血清建立了间接ＥＬＩＳＡ检测ＰＥＤＶ抗体水平。结果表明：包被怕浓度为１：２００００,酶标羊抗猪ＩｇＧ浓度选用１：２５０为测定抗ＰＥＤＶＩｇＧ抗体的最达工作浓度。田间检测结果与临床发病预期结果一致。     

猪流行性腹泻抗体PPA—ELISA检测方法的建立及其应用

应用纯化猪流行性腹泻病毒抗原(PEDV)和酶标葡萄球菌A蛋白(PPA)建立的A-ELISA,通过对免疫猪血清PEDV抗体的动态测定及临床自然感染猪血清抗体水平的检测表明,该法敏感、特异、简便、快速,尤适于基层猪场大批血清样品抗体水平的普查与检测.     

猪流行性腹泻病毒的分离和鉴定

从广州某猪场采集疑为病毒性腹泻的病猪粪便，除菌处理后接种PK—15传代细胞，采用在接种物和细胞维持波中加入60μg/mL胰蛋白酶的方法，分离到一株野毒。中和试验、动物回归试验和电镜观察结果表明，分离的病毒为猪流行性腹泻病毒(PEDV)。     

不同免疫途径对猪流行性腹泻血清抗体的影响

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种仔猪腹泻、呕吐、脱水和食欲下降的传染病。从2010年春季至今,我国的广东、广西、江西、湖南、福建、浙江、安徽、江苏、湖北、河北和山东、吉林、辽宁、黑龙江等省份的部分地区,甚至泰国、菲律宾、韩国等亚洲国家的规模化猪场发生严重的腹泻病例。应用疫苗进行免疫预防是控制该病最有效的方法,PEDV抗体的检测主要应用间接酶联免疫吸附试验。本试验于2012年9月进行,通过对不同的免疫途径与血清抗体相关性研究,为猪流行性腹泻病的防控提供试验和理论依据。     

猪流行性腹泻病毒及其卵黄抗体研究进展

猪流行性腹泻病毒是引起仔猪病毒性腹泻甚至死亡的关键诱因,而安全高效的抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体具有降低仔猪腹泻率、死亡率等优点已应用于生猪养殖。本文总结了近年来猪流行性腹泻病毒的致病机理及其卵黄抗体的制备与应用效果的研究进展,为卵黄抗体在防治猪流行性腹泻上的应用提供理论基础和技术指导。     

猪流行性腹泻病毒血清IgA抗体间接ELISA方法的建立

建立了检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgA抗体的间接ELISA方法,旨在为PEDV感染检测与免疫效果评价提供技术手段。以重组PEDV结构蛋白(S1蛋白)作为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原包被浓度、封闭液、稀释液以及待测血清和酶标抗体的最佳工作浓度,建立了PEDV IgA抗体检测间接ELISA方法。进而检测方法的特异性、批内与批间重复性,评价建立方法与国外试剂盒的符合率,分析ELISA检测血清特异性IgA抗体水平与中和抗体的相关性。结果显示,ELISA方法的最佳抗原包被浓度为1 mg/L,封闭液和抗体稀释液为含5%犊牛血清的PBS,待检血清和酶标抗体的工作浓度分别为1∶40与1∶1 500倍稀释。结果表明,该ELISA能够特异地检测PEDV抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型等病毒的抗血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数低于10%,与现有试剂盒的总符合率为94.8%,血清特异性IgA抗体水平与中和抗体呈正相关(r=0.69,P<0.001)。     

猪瘟灭活疫苗抗体消长规律动态研究

本试验采用IHA试验方法,对经猪瘟灭活疫苗免疫的猪抗体产生的水平进行了监测,并对仔猪母源抗体的消长规律进行了研究.结果表明仔猪母源抗体水平与母猪抗体水平呈正相关,其首次免疫抗体增长幅度与母源抗体呈负相关,但其抗体水平与免疫次数呈正相关.主要免疫的抗体效价与免疫剂量呈正相关,而与首免日龄无关.攻毒结果表明:当IHA＜6log2时,仅能抗死亡;当IHA≥7log2时,可抗感染.     

病毒性腹泻-粘膜病病毒实验感染绵羊及其血清中和抗体的消长规律

将6只8月龄公绵羊随机分为2组,分别经肌肉注射和滴鼻两途径,每只羊给予BVD/MDV长春184毒株第14代肾细胞培养毒澄清液20mL。结果,两种途径感染羊皆出现牛粘膜病的类似症状,并产生明显的抗体反应,中和抗体消长规律因接种途径不同而有所差异。感染羊在接种后第2周产生抗体,10～15周抗体滴度达到高峰,在1:160以上至少能持续11～17周。肌注组抗体产生较早,升高较快,持续时间短,至第27周抗体降至1:20。滴鼻组抗体升高较缓慢,持续时间较长,至第27周抗体滴度仍在1:160以上。实验还证明,BVD/MDV长春184毒株及Oregon毒株均能在MDBK、BT及牛睾丸细胞上繁殖,并有明显的细胞病变。     

Assay for Antibody in Pig Fetuses Infected with Porcine Parvovirus

Fetal fluids from field cases of fetal death were assayed for antibody to porcine parvovirus (PPV) using 3 different techniques. An indirect immunofluorescent antibody test, a counter immunoelectrophoresis test and a hemagglutination inhibition test were compared. The indirect immunofluorescent antibody test was found to be the most sensitive of the tests employed. The hemagglutination inhibition test apparently suffered from the occurrence of false positive results.     

间接ELISA检测鸭肝炎病毒抗体的研究

以蔗糖密度梯度离心法纯化的病毒作为包被抗原，建立了检测鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。经特异性及重复性试验，效果良好。ＥＬＩＳＡ效价与琼扩、中和效价存在平行关系。经ＥＬＩＳＡ检测，１日龄雏鸭免疫后，４日龄可检出ＥＬＩＳＡ抗体，１０日龄达到峰值。ＤＨＶ高免血清在雏鸭体内作用维持时间为１０ｄ左右。攻毒保护试验表明，攻毒前雏鸭的血清抗体水平与攻毒后雏鸭存活率具直接相关性。     

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的研制及其特性鉴定

以新生乳猪增殖猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）,通过蔗糖密度梯度离心将其纯化,获得较为完整的病毒颗粒。病毒ＥＬＩＳＡ效价为１∶３×１０５,蛋白含量为３．９６ｇ／Ｌ。将提纯的ＰＥＤＶ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取免疫鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合,融合率为９５．６％。用间接ＥＬＩＳＡ进行筛选,共检出３８个阳性孔,阳性率为２８．８％。对其中１５个阳性值较高的孔进行３次再克隆,阳性率达１００％,最后获得１５株稳定分泌特异性抗ＰＥＤＶ单抗（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。ＥＬＩＳＡ阻断试验与交叉试验证明,其分泌的抗体具有高度特异性。腹水和细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ效价分别为１∶１０３～１∶１０６和１∶１２８～１∶５１２。经鉴定,１５株ＭｃＡｂ的分子类型均为ＩｇＧ,均无免疫沉淀特性。杂交瘤细胞的染色体数目为９０～１１０,平均９５。尤为重要的是,这些杂交瘤细胞所分泌的抗体,有的对ＰＥＤＶ具有中和作用,能够阻断病毒对猪只的侵害作用。     

IHA与ELISA检测猪瘟病毒抗体的比较

应用间接血凝试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪瘟病毒抗体,IHA试验以1∶16为判定孔,抗体效价大于或等于1∶16为抗体阳性;ELISA试验以抗体阻断率40%为判定标准,阻断率大于或等于40%为抗体阳性,同步检测了122份规模化猪场不同阶段免疫猪血清.结果ELISA检测抗体阳性率比IHA检测抗体阳性率低,阴性、阳性相符的血清数为92份,相关性为 75.4%,不同抗体水平分布的血清数也不同,个别血清出现较大差异,卡方检验P值为0.13(＞0.05),两种检测方法统计上无差异,研究结果为选择猪瘟病毒抗体检测方法提供参考.     

牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测

采用Svanova公司牛病毒性腹泻病毒血清抗体ELISA抗体检测试剂盒对采自新疆10个不同地区的875份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测,共检出抗体阳性血清759份,最高阳性率为100％,最低为55.0％,平均为86.7％.检测结果表明该病已在新疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律.根据ELISA检测结果,从...     

犬瘟热病毒抗体检测方法的比较研究

用犬瘟热（ＣＤ）弱毒和自制的高免犬血清，建立了检测犬瘟热病毒（ＣＤＶ）抗体的中和（ＳＮ）试验、间接荧光抗体技术（ＩＦＡＴ）和间接免疫酶染色法。这３种方法对３８份ＣＤ弱毒疫苗免疫犬血清抗体效价的测定结果表明，当被检血清稀释度为１∶１００时，ＳＮ试验、ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定时的阳性血清数分别为２９，７和３１份，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定结果相对于ＳＮ试验结果的符合率分别为４２．１％和９４．７％。同时发现，当ＳＮ试验测定的血清效价在１∶１００以上时，ＩＦＡＴ测定结果总是在１∶２５以上，间接免疫酶染色法测定结果总是在１∶１００以上。３种方法以各自初步确定的ＣＤＶ血清抗体效价完全保护值指标计算所测血清的完全保护率，ＳＮ试验为７６．３％，ＩＦＡＴ为７８．９％，间接免疫酶染色法为８１．６％。据此认为，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法均可部分代替ＳＮ试验用于ＣＤ疫苗免疫效果的评价、免疫犬抗体水平的监测以及ＣＤ的流行病学调查     

阻断ELISA与中和试验检测猪瘟疫苗免疫猪血清抗体的比较

应用阻断ELISA和中和试验2种不同的方法对猪瘟疫苗免疫前后的猪血清抗体进行了检测,在所检测的6头仔猪免疫前和免疫后的12份血清中,2种方法的检测结果相符.应用Western blot对部分血清进行了验证,结果与2种方法检测结果一致,表明阻断ELISA和中和试验结果确实、特异,能真实反映免疫猪群的抗体水平.     

山羊实验感染绵羊进行性肺炎病毒的抗体应答反应

用琼脂凝胶免疫扩散试验（ＡＧＩＤＴ）和免疫印迹试验（ＩＢＡ）对山羊实验感染绵羊进行性肺炎病毒（ＯＰＰＶ）的抗体应答反应进行了研究。结果,用ＡＧＩＤＴ和ＩＢＡ都可在接毒山羊的血清中检测到ＯＰＰＶ的抗体。ＡＧＩＤＴ最早于接毒后１５ｄ检测到抗体;ＩＢＡ最早于接毒后４ｄ检测到抗ＯＰＰＶ的ｇｐ４４和ｐ２８的抗体,以后又陆续检测到抗ｐ９４、ｐ１４和ｇｐ１２５的抗体。由此看出,ＩＢＡ比ＡＧＩＤＴ更为敏感。本研究结果表明,ＯＰ－ＰＶ可在山羊体内诱生较强的体液免疫应答反应,因此用ＯＰＰＶ通过山羊体传代的方法可能会得到具有良好抗原性的ＯＰＰＶ毒株。