不同浓度半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

近年来,随着卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)以及细胞核移植技术的不断发展,牛胚胎的体外生产已经在几个不同的培养体系中获得了成功.但是,卵母细胞生长发育是一个非常复杂的过程,受多种因素的影响,有些因素的作用对于同种类动物的卵母细胞或体外/体内培养条件下的卵母细胞有着较大的差别.要找出各种动物卵母细胞体外培养的最佳方案以提高卵母细胞体外成熟率,尚有许多工作需要做.研究以延边黄牛卵母细胞为试验材料,试图探明不同浓度的半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响,现报道如下.     

谷氨酰胺对延边黄牛卵母细胞成熟及重组胚发育的影响

为了提高卵母细胞的成熟率及重组胚胎的发育率,在体外成熟液中添加了不同浓度的谷氨酰胺,研究谷氨酰胺对延边黄牛卵母细胞成熟的影响,并观察它对重组胚胎后续发育的影响,从中筛选出最佳的体外培养条件。结果表明,1.0 mmol/L的谷氨酰胺能够显著提高卵母细胞的成熟率,同时也能提高囊胚发育率。说明谷氨酰胺能够提高延边黄牛卵母细胞的体外成熟率,并能促进囊胚发育。     

聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和牛血清白蛋白对牛卵母细胞成熟及体细胞克隆胚胎发育的影响

为了比较不同浓度的聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、牛血清白蛋白(BSA)对牛卵母细胞体外成熟率、重组胚卵裂率和发育率的影响,试验采用抽吸法回收卵母细胞,用不同的无血清成熟液进行卵母细胞的体外成熟培养,然后对成熟卵母细胞进行核移植、融合、激活以及胚胎的体外培养.结果表明,适合延边黄牛卵母细胞成熟及体细胞克隆胚胎发育的PVA、PVP和BSA的最佳浓度分别是1.0 mg/mL,0.3%和0.4%.     

FSH和LH对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响

实验主要研究促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响,从而提高延边黄牛体细胞克隆的效率。采集屠宰后延边黄牛卵巢,用抽吸法回收卵母细胞,然后在不同种类、浓度激素条件下进行卵母细胞的体外成熟培养,最后将成熟的卵母细胞进行核移植及重组胚的体外培养。实验分别比较了在0、5、10、15、20μg/mL条件下,单独使用FSH与LH和在15μg/mL的FSH与10μg/mL的LH共同作用下对延边黄牛卵母细胞体外成熟率、卵裂率和囊胚发育率的影响。结果表明:将卵母细胞单独置于加有浓度为15μg/mL的FSH和10μg/mL的LH的成熟液中培养,其成熟率及后期发育率优于其他浓度组(P<0.05);而2种最优浓度同时添加共同作用时要好于单独使用(P<0.05)。由试验可得出,成熟培养液中单独添加15μg/mL的FSH和单独添加10μg/mL的LH浓度对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚后期发育效果最好;使用最佳浓度进行协同作用时,其共同作用要好于单独使用的效果。     

聚乙烯醇、聚乙烯吡略烷酮和牛血清白蛋白对牛卵母细胞成熟及体细胞克隆胚胎发育的影响

为了比较不同浓度的聚乙烯醇（PVA）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、牛血清白,蛋白（BSA）对牛卵母细胞体外成熟率、重组胚卵裂率和发育率的影响,试验采用抽吸法回收卵母细胞,用不同的无血清成熟液进行卵母细胞的体外成熟培养,然后对成熟卵母细胞进行核移植、融合、激活以及胚胎的体外培养。结果表明,适合延边黄牛卵母细胞成熟及体细胞克隆胚胎发育的PVA、PVP和BSA的最佳浓度分别是1．0mg／mL、0．3％和0．4％。     

牛卵母细胞体外成熟的影响因素

卵母细胞的体外成熟受多种因素的干扰和制约,不同种类、不同因素、不同的实验室条件等对卵母细胞的生长发育影响均很大。随着卵母细胞体外成熟技术的不断改进和完善,提高牛卵母细胞体外成熟的数量和质量以及充分利用良种资源等的研究就具有十分重要的意义。从体外成熟的作用机制、卵母细胞的获取、激素、成熟时间及人为操作等因素对牛卵母细胞体外成熟的影响进行了综述。     

山羊卵母细胞体外成熟体系研究进展

卵母细胞体外成熟(IVM)是山羊胚胎体外生产的关键步骤,其对山羊体外生产胚胎的数量和质量均具有非常重要的意义。此外,IVM还可以满足胚胎工程技术如体细胞核移植、转基因动物生产对卵母细胞的大量需求。然而,由于山羊卵母细胞体外成熟研究起步较晚,与牛、猪等家畜相比仍然存在不小的差距,存在诸如体外成熟率低、胚胎质量不佳、培养体系可重复性低等问题。因此,分析山羊卵母细胞体外成熟的主要影响因素,提高山羊卵母细胞体外成熟率,建立山羊卵母细胞体外成熟稳定培养体系,就成为了近年来山羊胚胎体外生产的研究重点。论文综合国内外学者近年的相关研究,对可能影响山羊卵母细胞体外成熟效率的各种因素进行了综述分析,同时对山羊卵母细胞体外成熟现存问题进行了分析,以期为建立山羊卵母细胞体外成熟体系提供理论支持。     

牛卵母细胞体外成熟培养研究进展

作为胚胎生物工程技术研究的基础之一的牛卵母细胞体外成熟培养技术自上世纪30年代起至今,许多科学研究人员在牛卵母细胞体外生长、发育领域做了大量工作,对牛卵母细胞培养条件进行了广泛而深入地研究,并取得了较大的进展,目前牛卵母细胞体外成熟培养技术体系已建立,但在卵母细胞成熟机理、成熟调控方面尚存在许多尚未阐明的问题和一些亟待解决的问题。本文从卵母细胞的来源、卵母细胞体外培养条件、培养液的完善及卵母细胞成熟判定方法等方面详尽介绍了当前牛卵母细胞体外培养技术的研究进展。     

PVP和17β-E2对牛卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

在黄牛和水牛卵母细胞成熟培养液中用0.3%PVP代替10%FBS,卵母细胞的体外成熟率和受精率无显著差异(P>0.05),结果表明,在成熟培养液中用0.3%PVP代替10%FBS是可行的;在黄牛(或水牛)卵母细胞成熟培养液中添加17β-E2时,卵母细胞的体外成熟率和受精率都显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)的高于不添加17β-E2组,试验结果表明,17β-E2对牛卵母细胞的成熟和受精是必要的.同时,本试验对现行的黄牛和黑白花牛体外受精程序应用于水牛体外受精的可行性进行了探讨,结果显示,虽然水牛卵母细胞在体外培养可成熟和受精,但是在同一处理下,水牛卵母细胞的成熟率和受精率都显著(P<0.05)或极显著(P< 0.01)低于黄牛和黑白花牛,这表明,利用现行的黄牛体外受精程序进行水牛的体外受精是有效、可行的,但可能所用的精液或受精过程的某些步骤不太适合水牛卵母细胞,还需进一步改进.     

牛卵母细胞的体外成熟

在卵母细胞体外成熟液（含FSH）中分别添加10、30、50μg/L表皮生长因子（EGF）,24 h检查成熟率。结果表明,添加10、30μg/L EGF组牛卵母细胞成熟率为79.8%、71.5%与对照组（未添加EGF）成熟率（70.4%）无明显差异（P〉0.05）,但EGF添加至50μg/L时牛卵母细胞第一极体（PB1）排出率显著提高,达85.4%（P〈0.01）;在此基础上,比较了成熟液中添加尿促性素（HMG）对牛卵母细胞体外成熟的影响,结果发现在含FSH和EGF的成熟液中添加HMG未能显著提高牛卵母细胞体外成熟效果（P〉0.05）;最后,比较了HMG对牛卵母细胞体外成熟的效果,结果发现单独添加HMG成熟效果显著高于FSH（P〈0.05）,表明成熟液中如不含其他生长因子,则单独添加HMG较FSH对牛卵母细胞体外成熟的效果好。     

牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术的研究进展

论述牛卵母细胞体外成熟和体外受精的最新研究进展，包括卵丘卵母细胞复合体、卵母细胞的体内、体外成熟，以及体内、体外的异常成熟和卵母细胞的体外成熟方法，无蛋白质、无血清系统的限定性培养液的研究进展，卵母细胞体外成熟状态与标志的某些理论上的突破；体外受精中精子供体的选择、精子活力和正常形态的选择、冷冻解冻精液的体外获能、精子的体外受精力，以及体外的异常受精；还论述了牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术在家畜育种和胚胎克隆等方面的应用前景     

牛卵母细胞体外成熟的培养体系及影响因素研究

目前牛卵母细胞体外成熟培养（IVM）技术体系已经建立起来，并在不断的探索与完善当中。国内外的研究热点主要集中在各种因素对体外生产步骤的影响上，尤其是对卵母细胞IVM和胚胎发育阻滞的研究，突破这些难点将有利弄清卵母细胞成熟的机理，促进胚胎操作技术和商业化胚胎IVP快速发展，在奶牛与肉牛的扩繁与母畜资源利用方面发挥巨大作用。本文将就现阶段牛卵母细胞体外成熟培养体系及影响因素的研究情况加以综述。     

牛卵母细胞体外成熟培养

本文着重探讨了牛卵母细胞的体外成熟培养，对卵子的发生、卵母细胞体外成熟的原理进行了阐述，叙述了从卵母细胞的回收、选择到成熟等步骤。本实验采用磷酸缓冲液(PBS)冲洗卵巢、吸卵，以含有FSH、LH、雌二醇等成分的成熟液对卵母细胞进行体外成熟培养，使卵丘细胞扩散，第一极体排出，卵母细胞达到成熟。     

Kisspeptin在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达和功能研究

Kisspeptin(Kp)是KiSS-1基因编码的产物,为明确Kp在牛卵母细胞体外成熟过程中的表达和功能,本文首先利用免疫荧光技术研究了Kp在牛卵母细胞体外成熟0、6、12、18、24 h的表达规律,随后利用体外培养技术研究了添加Kp对牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:Kp在牛卵母细胞体外成熟0、6、12、18、24 h均有表达,且0~12 h表达量呈递增趋势,12~24 h下降并达到最低;在TCM-199溶液中添加10 nmol/L的Kp可使卵母细胞的成熟率达到80.3%,与同时添加FSH和FBS处理组的结果差异不显著。研究结果提示,Kp在牛卵母细胞中有表达,且在体外成熟过程中呈现规律性变化,其可提高牛卵母细胞体外成熟效率。     

牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术的研究进展

论述了牛卵母细胞体外成熟和体外受精的最新研究进展，包括卵丘母细胞复合体、卵母细胞的体内、体外成熟、以及体内、体外的异常成熟和卵母细胞的体外成熟方法，无蛋白质、无血清系统的限定性培养液的研究进展，卵母细胞全外成熟与标志的某些理论上的突破性；体外受精中精子供体的选择、精子活力和正常形态的选择冷冻解冻精液的体外获能、精了的体外受精力，以及体外的异常受精，还论述了牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术在家畜育种     

不同浓度白术多糖及培养温度对牛卵母细胞体外成熟的影响

据大量学者研究表明中药多糖对细胞的生长、分化及增值都具有明显的促进作用.本试验试图通过在牛卵母细胞体外成熟培养液中加入不同浓度梯度的白术多糖溶液,进而对卵母细胞进行体外成熟培养,从中研究不同浓度白术多糖对卵母细胞体外成熟效果的影响,结果发现低剂量:10~50μg/ml白术多糖对牛卵母细胞体外成熟有促进作用;中剂量:50~100μg/ml白术多糖对牛卵母细胞体外成熟作用不明显;高剂量:150~200μg/ml白术多糖严重抑制牛卵母细胞的成熟,甚至使卵母细胞细胞质皱缩.其二试验通过提高卵母细胞的培养温度探索白术多糖对卵母细胞热应激的作用,结果发现最适浓度白术多糖对卵母细胞高温培养有一定的保护作用.     

微量元素锌对牛卵母细胞体外成熟及其体外受精胚胎发育的影响

本研究旨在探讨锌对牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育的影响。首先使用锌螯合剂TPEN去除锌,并检测缺锌对牛卵母细胞体外成熟的影响;然后在体外成熟液中分别添加0(对照组)、0.4、0.8、1.2、1.6μg/mL硫酸锌,探索不同浓度硫酸锌对体外成熟及后续胚胎发育的影响。结果表明:锌元素在体外成熟液中的含量低于牛卵泡液和颈静脉血清(P<0.05);去除体外成熟液中的锌后牛卵母细胞的体外成熟效率下降(P<0.05),且具有时间依赖性,补充适宜浓度硫酸锌后成熟效率恢复;向体外成熟液中添加硫酸锌并未对卵母细胞体外成熟效率产生显著影响,但添加0.8μg/mL硫酸锌成熟后的卵母细胞中活性氧含量显著降低,后续体外受精胚胎的囊胚发育效率显著提高;RT-qPCR分析结果显示,与对照组相比,添加0.8μg/mL硫酸锌成熟后的卵母细胞中抗氧化基因SOD1、CAT、TXN1、PRD1和卵丘扩展基因PTX3、TSG6的表达水平均提高(P<0.05)。研究表明,添加0.8μg/mL硫酸锌可以通过提高卵母细胞内抗氧化酶基因的表达水平,降低卵母细胞内活性氧含量,促进卵丘扩展,从而提高卵母细胞成熟质量和体外受精胚胎的发育效率。     

牛卵泡卵母细胞体外成熟的研究

研究了卵泡大小、卵泡液和卵丘细胞对牛卵泡卵母细胞体外成熟的影响。结果表明 :直径 2～ 6mm卵泡中的卵母细胞成熟率 ( 72 1%)最高 ,与直径小于 2mm( 5 8 4%)、6～ 8mm( 5 6 4%)及大于 8mm ( 3 5 0 %)卵泡中的卵母细胞组差异显著 ;成熟培养基中添加 10 %的新鲜牛卵泡液 (bFF)对牛卵母细胞的体外成熟有促进作用 ,但高浓度的bFF( 2 0 %、3 0 %)则抑制牛卵母细胞的体外成熟 ;卵丘 -卵母细胞复合体的质量影响卵母细胞的体外成熟 ,A、B、C三级卵母细胞成熟率分别为 86 1%、66 3 %、3 5 6%,卵裂率分别为 42 8%、3 1 9%、10 5 %,差异均显著 (P <0 0 5 )。     

季节和方法对牛、绵羊卵母细胞回收及体外成熟的影响

利用屠宰牛、绵羊卵巢,研究了季节和方法对卵母细胞回收及体外成熟的影响。结果表明,季节对牛卵母细胞的回收和利用没有影响;抽吸法是合适的牛卵巢卵母细胞采集方法;季节对绵羊卵母细胞的回收和利用有显著影响,绵羊在非繁殖季节卵母细胞的回收率和可用率显著高于繁殖季节（P<0.05）,而体外成熟率极显著低于繁殖季节（P<0.01）;切割法回收的绵羊卵母细胞可用率（P<0.01）和体外成熟率（P<0.05）显著高于抽吸法,适合绵羊卵母细胞的回收。     

不同培养体系对延边黄牛卵母细胞体外受精胚胎发育率的影响

<正>延边黄牛是中国五大良种牛种之一,其独特的肉质可与韩牛、和牛相媲美,极具国际市场潜力,但是也存在体型较小、后躯不够发达、日增重略慢等缺点,因此对延边黄牛的保种选育工作得到了地方和国务院的极大扶持~([1])。体外受精技术(In vitro fertilization,IVF)是通过以下几个过程实现的,即卵母细胞体外成熟、精子获能、体外受精和胚胎的体外培养等几个连续过程~([2])。1982年,美国科学家Brackett等人获得第一胎试管犊