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相似文献
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1.
选择经同期发情处理的妊娠科尔沁牛5头(23胎),于分娩-14、-6、-2、0、2、6、14d颈静脉采血,分离淋巴细胞,采用RT-PCR、Western blotting法分别检测淋巴细胞的HSP70mRNA与蛋白表达。结果显示,各受试牛的HSP70mRNA与蛋白表达变化趋势基本一致,即从-14d开始逐渐下调,0d最低,继而再逐渐上调。结果表明,HSP70作为淋巴细胞内重要伴侣分子,随着分娩的启动和发生其表达抑制显著增强,但在分娩后被迅速解除,其表达逐渐上调。  相似文献   

2.
选取15头体况相似的健康肉牛作为研究对象,随机分为运输0h组、运输3h组和运输6h组,每组5头肉牛,采用公路运输方式运输(平均速度为80km/h)。采集各组牛肝脏和脾脏组织样本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(qRT-PCR)2种试验方法检测各组肝脏和脾脏组织中应激蛋白-热休克蛋白70(HSP70)和急性期蛋白-C反应蛋白(CRP)含量的变化。qRT-PCR检测结果显示:与运输0h组相比,运输3h和6h肝脏组织中HSP70mRNA的表达量极显著升高(P0.01);而脾脏组织中HSP70mRNA只在运输应激6h后表达量显著增加(P0.05)。与0h组相比,运输应激后肝脏组织中CRP mRNA的表达量极显著升高(P0.01),脾脏组织中CRP mRNA的表达量显著升高(P0.05)。ELISA检测结果显示:与0h组相比,运输应激3h和6h肝脏中的HSP70质量浓度极显著升高(P0.01),脾脏中HSP70的质量浓度在运输6h后显著升高(P0.05);肝脏和脾脏CRP的表达在运输应激6h后极显著升高(P0.01)。结果表明:不同运输时间的运输应激可导致肝脏和脾脏中HSP70和CRP的浓度和mRNA转录水平升高,且肝脏中HSP70和CRP的表达量高于脾脏。HSP70和CRP可作为肉牛运输应激候选诊断标志物。  相似文献   

3.
为了探讨冷应激对雏鸡肝脏中热休克蛋白(HSP)及炎性因子的影响,试验将120只1日龄伊莎公鸡饲喂15 d后随机分成12组进行急慢性冷应激处理。急性冷应激处理分为1个对照组和5个试验组,慢性冷应激处理分为3个对照组和3个试验组。急性冷应激条件下分别饲养0,1,3,6,12,24 h,慢性冷应激条件下分别饲养5,10,20 d,应激处理结束后迅速剖杀伊莎公鸡,取肝脏组织,采用总RNA的提取及反转录、实时荧光定量PCR反应和Western-blot技术检测HSP60、HSP70、HSP90、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及炎性因子PGE合成酶(PGE synthase)、环氧化酶-2(Cox-2)、核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA及蛋白的表达情况。结果表明:RNA的纯度和完整性符合要求。急慢性冷应激均可导致鸡肝脏HSP60、HSP70、HSP90、GRP78 mRNA表达明显上调,HSP70、GRP78蛋白表达与相应mRNA表达趋势一致;同时急慢性冷应激均可导致鸡肝脏炎性相关因子mRNA及蛋白表达明显上调。说明急慢性冷应激可导致肝脏炎性因子及HSP的表达增加。  相似文献   

4.
本试验以谷氨酰胺作为热休克蛋白70(HSP70)诱导剂,从细胞凋亡线粒体信号转导途径探讨HSP70对热应激猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)凋亡相关因子的影响。试验以体外培养的猪小肠上皮细胞为模型,分别加入不同浓度(1、2、4、6、8、10 mmol/L)谷氨酰胺的培养基中培养24 h,提取总RNA和总蛋白,用实时荧光定量PCR和Western blot检测HSP70 mRNA和蛋白的相对表达量,筛选出谷氨酰胺诱导HSP70表达的最佳浓度。取对数生长期的细胞分为3组,分别为对照组(Con组,37℃培养12 h)、热应激组(Hs组,42℃培养12 h)、谷氨酰胺组(Gln组,6 mmol/L谷氨酰胺、42℃培养12 h)。采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测HSP70、凋亡酶激活因子-1(Apaf-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的mRNA和蛋白的相对表达量。结果表明:谷氨酰胺对HSP70上调表达呈先上升后下降的趋势,6 mmol/L的谷氨酰胺诱导时HSP70 mRNA和蛋白相对表达量最高,显著高于其他浓度(P<0.05),作为后续试验中Gln组的诱导条件。与Con组相比,Hs组细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),HSP70、Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01),而Bcl-2 mRNA和蛋白的相对表达量极显著降低(P<0.01)。与Hs组相比,Gln组细胞凋亡率极显著降低(P<0.01),但仍极显著高于Con组(P<0.01);Gln组HSP70 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01);Gln组Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量极显著降低(P<0.01),但极显著高于Con组(P<0.01);Gln组Bcl-2 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01),但极显著低于Con组(P<0.01)。由此可见,上调HSP70的表达可有效缓解热应激导致的猪小肠上皮细胞凋亡。  相似文献   

5.
为了探讨温和热应激、脂多糖(LPS)和谷氨酰胺(Gln)诱导牛睾丸支持细胞(b SCs)HSP72的时效表达规律,本试验将传至第3代b SCs分成热应激、LPS和Gln处理组,用CCK-8试剂盒检测细胞活性,用RT-PCR和Western-Blot方法分别检测处理后0、2、4、6、8、12、14h和16 h时细胞内HSP72 mRNA和蛋白表达。结果显示,3种方式均能诱导HSP72表达,且HSP72蛋白分别在热应激、Gln和LPS预处理后2、4h和12 h时表达量最高。结果表明,热应激或Gln均比LPS诱导牛睾丸支持细胞HSP72表达的时间早,提示可考虑用Gln减少由LPS诱导的细胞损伤。  相似文献   

6.
研究柞蚕热休克蛋白基因在高温胁迫下的表达变化,有助于从分子水平解析柞蚕对高温的应激反应机制。采用RTPCR技术从柞蚕蛹脂肪体组织中克隆了2个热休克蛋白70基因Ap HSP70-1(Gen Bank登录号:KR821069)、Ap HSP70-2(GenBank登录号:KT225460),2个基因的开放阅读框(ORF)均为1 905 bp,编码634个氨基酸,蛋白质具有细胞质特征基序,推测为诱导型热休克蛋白,其序列N端为高度保守的ATPase功能域,C端为多肽结合功能域,是差异位点的主要分布区域。Ap HSP70-1和Ap HSP70-2蛋白之间的序列相似度为86.91%,二者与Ap HSC70蛋白序列的相似度分别为71.82%和70.14%。半定量RT-PCR检测显示,高温(43℃)诱导后柞蚕蛹脂肪体组织中Ap HSP70-1、Ap HSP70-2基因的表达量明显升高,而Ap HSC70基因的表达量变化不大;相对于Ap HSP70-2,正常环境下Ap HSP70-1在柞蚕蛹各组织中几乎不表达,但热激后被诱导表达。qRT-PCR检测高温(43℃)诱导处理后柞蚕蛹脂肪体组织中的Ap HSP70-2表达量上调了6.32倍,Ap HSP70-1的表达量上调了4.18倍。推测克隆的2个Ap HSP70基因在柞蚕应对热激胁迫的反应中发挥重要作用。  相似文献   

7.
为研究鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗和活疫苗免疫对鸡外周血淋巴细胞中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ等5种免疫因子mRNA表达的影响,试验用IBD免疫复合物疫苗和BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,并设立空白对照组,于免疫后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d取外周血,分离淋巴细胞,用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法测淋巴细胞中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达水平。结果表明:免疫后7~42 d,活疫苗组NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达均呈现上调,且上调时间主要在免疫后7~14 d;免疫复合物疫苗对NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达基本无影响。提示IBD活疫苗免疫对鸡外周血淋巴细胞免疫功能影响大于免疫复合物疫苗。  相似文献   

8.
为了研究褪黑素(MLT)对热应激奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)及中国荷斯坦育成牛血清中热休克蛋白70(HSP70)含量的影响,试验将体外培养的MAC-T分为对照组、热应激组、热应激+150μmol/L MLT组,以42℃作为热应激模型温度,37℃作为对照组培养温度,采用细胞增殖法检测细胞活力、实时荧光定量PCR检测细胞凋亡因子半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3),炎性因子IL-6、IL-8和HSP70 mRNA相对表达量;以处于热应激状态的中国荷斯坦育成牛为试验动物,随机分为对照组、试验A组、试验B组,分别皮下注射0,4.6,46 mg/d MLT,采用ELISA试剂盒测定奶牛血清中HSP70含量。结果表明:热应激处理4 h的MAC-T细胞活力与对照组相比显著降低(P<0.05),添加150μmol/L MLT可以显著升高MAC-T细胞活力(P<0.05);与对照组比较,热应激可以极显著上调MAC-T细胞凋亡因子Caspase-3和HSP70 mRNA的相对表达量(P<0.01),显著上调炎性因子IL-6、IL-8的相对表达量(P<0.05);与热应激组比较,...  相似文献   

9.
通过检测奶牛C D3+、CD4+和CD8+淋巴细胞亚群的动态及细胞因子IL-2、IL-4在分娩前后21d内的基因转录水平的变化,以探讨此阶段奶牛免疫机能受损的机理.应用流式细胞术检测CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞亚群的动态变化及实时荧光定量检测细胞因子IL-2、IL-4 mRNA的表达量.结果表明:血液中CD3+淋巴细胞的比例在产前21 d内占(50.8±4.61)%,产后14 d内降低到(39.21±4.98)%,两者差异极显著(P<0.01) ;CD4+淋巴细胞在产前21 d内保持较高水平,达(21.38±0.65)%,产后21 d内维持在(6.89±0.32)%的较低水平,且与产前差异显著(P<0.05) ;CD8+淋巴细胞的比例在产犊前逐渐升高,到产犊时达到最高水平(16.90±2.02)%,差异显著(P<0.05) ;CD4+/CD8+淋巴细胞的比率在产前>1,产后<1.IL-2 mRNA的表达量在产后0~14 d内下调,之后上升.IL-4 mRNA的表达量分娩时期达到最高,随后下降,至第7天降到最低.奶牛在围产期阶段尤其是分娩前后14 d内机体处于免疫抑制状态,可能是由于自身的CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的亚群的数量和比例发生改变及细胞因子IL-2、IL-4 mRNA表达量下调引起的.  相似文献   

10.
为研究热应激造成犬免疫机能损伤的机制及损伤过程中免疫相关细胞因子的变化规律,分别在夏季持续高热天气中每隔7d、分5次采集了拉布拉多犬的血清和外周血单个核细胞(PBMC),检测血清中皮质醇(COR)、热休克蛋白70(HSP70)、白细胞介素2((IL-2)和白细胞介素(IL-10)、Toll样受体2(TLR-2)和Toll样受体4(TLR-4)的含量及PBMC中HSP70、IL-2、IL-10、TLR-2、TLR-4的mRNA的表达,并与春季非应激温度下检测的同类指标进行比较。结果显示,夏季持续高热天气中犬长期处于应激状态,其PBMC中HSP70mRNA表达上调,IL-2、IL-10、TLR-2、TLR-4mRNA表达下调;血清中COR浓度持续高于正常值,HSP70浓度升高,IL-2、TLR-2浓度未发生显著变化,IL-10、TLR-4浓度显著低于正常水平。热应激条件下PBMC中白介素和Toll样受体mRNA表达下调,可能是导致犬的免疫功能抑制、抗感染免疫机能下降的原因。  相似文献   

11.
选择40头体质健康的中国荷斯坦奶牛,根据胎次和泌乳天数,按照随机区组试验设计分为Ⅰ组(30kg/d)、Ⅱ组(30~35kg/d)、Ⅲ组(35~40kg/d)和Ⅳ组(40kg/d)。热应激前、热应激前期、热应激中期、热应激后期和热应激后分别于尾静脉采血,用ELISA试剂盒测定热休克蛋白(HSP)27,70,90的表达量。结果显示,Ⅳ组HSP27表达量最高,Ⅱ组表达量最低,Ⅳ组、Ⅲ组和Ⅰ组均显著高于Ⅱ组(P〈0.05)。HSP70表达量各组间没有明显差异,但随产奶量呈线性增加(P〈0.05)。HSP90的表达量,Ⅳ组和Ⅲ组明显高于Ⅱ组(P〈0.05)。HSP27的表达量热应激后差异较大;HSP70的表达量各组整个过程差异较大;HSP90的表达量在热应激前、热应激前期和热应激后差异较大。总之,在热应激过程,高产奶牛血清中热应激蛋白的表达量较高,HSP70表达量随产奶量呈线性增加,而不同热应激蛋白的变化规律差异较大。  相似文献   

12.
通过检测热休克蛋白70(heat shock protein,HSP70)在免疫器官及细胞上的分布规律,研究热应激雏鸡免疫器官中热休克蛋白70的定位及表达。结果显示:HSP70在常温饲养雏鸡的胸腺、脾脏、法氏囊中均有明显的表达,在胸腺、脾脏的细胞中主要以胞浆表达为主,而法氏囊中则以胞核表达为主,脾脏中HSP70的表达强度最为稳定。热应激时,胸腺中HSP70的IOD值随日龄增长而逐渐降低,末期显著低于对照组(P〈0.05);脾脏中HSP70的IOD值随日龄增长逐渐降低,末期稍低于对照组(P〉0.05);法氏囊中HSP70的IOD值与饲养日龄间无明显规律,末期高于对照组(P〉0.05)。结果表明,热应激对雏鸡胸腺的损伤明显,胸腺细胞通过自身合成HSP70抵抗热应激的能力较差,而对脾脏和法氏囊影响较小。  相似文献   

13.
以东北野猪成纤维细胞为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术,分析4、15、25和32℃不同温度冷应激条件下细胞内HSPT0mRNA表达变化规律。结果显示在冷应激的低温处理过程中,HSP70mRNA转录量在各温度均为见显著增加;在冷应激的复温培养过程中,HSP70mRNA转录量在4℃和15℃处理后4h后,复温培养的4~8h显著增加(P〈O.05);在25℃和32℃处理后4h后,复温培养未能诱导细胞内HSP70mRNA转录量显著增加(P〉0.05);细胞在4℃和15℃处理2、4、6和8h后,复温培养4h,HSP70mRNA转录量随处理温度的减低和时间的延长而增加,处理4~8h组显著高于对照组(P〈0.05),在25℃和32℃处理2、4、6和8h后,复温培养未能显著诱导HSP70mRNA的转录(P〉0.05)。结果表明,冷应激诱导东北野猪成纤维细胞内HSP70mRNA转录量的增加,不是发生在低温处理的应激阶段,而是发生在复温后的细胞应激阶段,温和冷应激(25~32℃)未能诱导复温后HSP70mRNA转录量的显著增加,强度冷应激(4~15℃)诱导复温后HSP70mRNA转录量的显著增加,且与冷应激的强度和时间成正比。  相似文献   

14.
Full-length canine HSP70 cDNA was sequenced and the expression of HSP70 mRNA was investigated. The full-length cDNA sequence of the HSP70 gene (2322 bp) contained a single long open reading frame (1920 bp) coding a protein of 640 amino acids. The amino acid sequence of the canine HSP70 gene shared about 90-95% sequence similarity with bovine, human and mouse HSP70 proteins. Southern blot analysis with HSP70 probe gave three distinct bands of 9.4 kb, 5 kb and 4.4 kb in BamHI digests and two distinct bands of 19 kb and 4 kb in EcoRI digests. Canine HSP70 mRNA was detectable in canine peripheral blood mononuclear cells and stomach but not in liver, kidney, spleen, small intestine, large intestine and skin of dogs.  相似文献   

15.
为了测定异地育肥对大别山黄牛血清中激素水平的动态影响,选择30头经临床检查健康大别山黄牛,特进行0(到达牛场时)、14、28和42d时血清激素水平测定。经颈静脉无菌采血,分离血清,测定生长激素(GH)、胰岛素(INS)、三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)和皮质醇(COR)水平。记录试验牛平均体质量(Aw),平均日增重高(ADG),平均日采食精、粗料量(ADFI),平均日饮水量(ADWI)和发病牛头数。结果表明:14d时,牛开始增重,42d时,平均日增重高于28d和14d时(P〈0.05或P〈0.01);平均日采食精、粗料量在42d时高于14、28d时(P〈0.01或P〈0.05)。GH、INS、T3和T4激素水平在0d时最低,在14d时最高。INS水平在14d时极显著高于28d和42d时(P%0.01)。COR水平,在0d时最高(P%0.01),14、28和42d时差异不显著。在整个试验期内,均有试验牛发病。通过激素水平动态变化发现大别山黄牛进场14d内处于应激状态之中,进而能明显影响牛体生长性能。  相似文献   

16.
Expression of L-selectin was determined by single- and two-colour immunofluorescence on granulocytes, peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and blasts of bovine origin by means of a monoclonal antibody IVA94 which recognizes bovine L-selectin (CD62L). Cells were separated from peripheral blood of healthy cattle and colleagues infected with bovine leukaemia virus (BLV). BLV-infected animals comprised lymphocytotic and non-lymphocytotic cows. L-selectin was expressed on 90-98% of granulocytes in all tested animals. The percentage of PBMC expressing L-selectin was lower in cattle with persistent lymphocytosis than in non-lymphocytotic or BLV-free cattle, and inversely correlated with lymphocyte counts. The ratio of B lymphocytes stained for L-selectin was significantly decreased from 60.2 +/- 1.9% in BLV-free cattle to 43.8 +/- 3.6 and 22.5 +/- 5.7% in non-lymphocytotic and lymphocytotic cattle, respectively. B-lymphocytes stained for L-selectin exhibited about 50% reduction in L-selectin expression in BLV-infected cattle compared with BLV-free cattle, as judged by the mean fluorescence intensity (MFI). The percentage of L-selectin-positive PBMC not bearing surface immunoglobulin M (predominantly T lymphocytes) was comparable in BLV-free and BLV-infected cattle. However, L-selectin expression on T lymphocytes was reduced (about 50%) in BLV-infected cattle, as judged by the MFI. We suppose that BLV infection results in a decreased L-selectin expression on lymphocytes, and accordingly, it may contribute to deregulation of the host immune system.  相似文献   

17.
Blood samples were collected from 22 calves in three weight classes (A: 29.3 +/- 0.5 kg, B: 36.0 +/- 1.3 kg, C: 42.7 +/- 3.7 kg), 1-3 minutes after parturition and prior to uptake of foremilk as well as 24-26 hours after parturition. Other blood samples were collected from 45 calves, 5-60 minutes after parturition, and from their mothers, 3-5 or 5-60 minutes from calving. Haematocrit and haemoglobin in the blood of the calves, immediately after parturition, were higher the values recorded from adult cattle. Major differences were found to exist between individual calves regarding total protein of blood plasma. Protein levels in 14 calves were below 50 g/l, within 24-26 hours from parturition. Free fatty acids in blood plasma of calves were lower than those in cattle, 1-3 minutes from parturition, and were higher, 5-60 minutes from parturition. Glucose levels in Group C were higher than those in A and B, 1-3 minutes postpartum. Lactate in Group C was higher than that in B. An account is also given of blood plasma levels of Ca, Pa, Mg, Na, K, Cu, and Zn.  相似文献   

18.
围产期母猪的营养及应激状况研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
[目的]研究围产期母猪的营养和应激状况。[方法]选取同批次15头初产长大二元杂种母猪,分别于分娩前14 d、分娩当天和分娩后14 d采取血样,检测血清皮质醇、结合珠蛋白、游离脂肪酸(NEFA)、葡萄糖、胰岛素和尿素的水平。[结果]分娩当天血清皮质醇的浓度极显著高于分娩前14 d和分娩后14 d的浓度(P0.01);分娩当天血清结合珠蛋白的浓度比分娩前14 d提高25.81%(P0.05);分娩当天血清NEFA的水平是分娩前14 d的3.54倍(P0.01),是分娩后14 d的3.63倍(P0.01);分娩当天血清胰岛素的水平极显著低于分娩前14 d和分娩后14 d的血清胰岛素水平(P0.01);分娩当天血清尿素的水平是分娩前14 d的1.46倍(P0.01),但极显著低于分娩后14 d的水平(P0.01)。[结论]围产期母猪处于高应激、健康水平下降和营养负平衡的生理状态。  相似文献   

19.
β-防御素是近年来发现的具有广谱抗菌活性并且参与机体免疫调节的活性多肽。试验目的为研究β-防御素1(β-defensin1,Defbl)mRNA在自然断乳和强制断乳时表达的变化。72只雌性小鼠在分娩后分为强制断乳组(n=36)、自然断乳组(n=36),于强制断乳(泌乳12d)和自然断乳(泌乳21d)后5d内(1d、2d、3d、4d、5d)及断乳当天(0d)分别处死小鼠,取第4对乳腺组织,半定量RT—PCR检测Defbl的表达变化。结果显示:与0d相比,强制断乳后4d,DefblmRNA的表达显著下调(P〈0.05),达到最低值;与0d相比,自然断乳后1d和2dmRNA水平即显著降低(P〈0.05),3d时Defbl转录水平出现显著升高(P〈0.05),达到峰值。  相似文献   

20.
采用实时荧光定量PCR法分析了牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对佐剂性关节炎模型(adjuvant arthritis,AA)大鼠成纤维滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)中由糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)介导的热休克蛋白90基因(heat shock protein 90 gene,HSP90)mRNA表达的影响。结果表明,TCDCA可以极显著性(P〈0.01)下调FLS细胞内HSP 90 mRNA的表达,同时加入GR的特异性抑制剂RU486后可抑制TCDCA对HSP 90 mRNA的作用。由此证明了TCDCA是通过GR受体发挥抗炎和免疫调节作用的。  相似文献   

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