农杆菌介导的病毒侵染方法在禾本科植物转化上的研究进展

综述了农杆菌介导的病毒侵染方法在禾本科植物转化研究方面的进展，利用农杆菌的Ｔｉ／Ｒｉ质粒载体将病毒或类病毒的核酸导入植物细胞的方法，近年来在禾本科植物包括水稻，大麦，小麦和玉米等具有经济重要性的粮食作物的转化研究上取得了长足的进展，它具有直接，高效、灵敏等特点，在导入植物过程中不需制备病毒或类病毒的核酸，也不需通过介体昆虫的介导，因此，农杆菌介导的病毒侵染方法是人们研究农杆菌及其禾本科寄主的相互关     

农杆菌介导主要农作物遗传转化的研究进展

在植物基因工程中,农杆菌介导的遗传转化是比较完善和相对高效的转化方法,但在单子叶植物中应用相对较少。本文对水稻、玉米、小麦等三种重要禾本科植物农杆菌转化法的应用进行了介绍,重点综述了影响转化效率的因素及农杆菌转化法在功能基因组学研究及商业方面的应用进展。     

农杆菌介导的植物遗传转化影响因素研究进展

农杆菌介导的高效遗传转化体系建立的关键是优化T-DNA导入的各因素,优化外植体、菌株、侵染及共培养条件等因素。文中详细阐述了农杆菌介导植物遗传转化的主要影响因素,为实践操作提供了理论依据。     

超声波辅助农杆菌介导法转化鱼腥草的初步研究

应用超声波直接转化法、农杆菌介导转化法、恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s 4种方法对鱼腥草进行转基因研究,结果显示:上述4种转化法对gus基因最大瞬时表达率依次为47%、60%、80%和75%。结论:用恒定频率的超声波仪处理植物15 min后再用农杆菌介导法侵染植物和在农杆菌侵染过程中辅助以超声波处理10 s两种转化法gus基因的瞬时表达率最高,说明超声波辅助农杆菌介导遗传转化方法是一种高效的鱼腥草转基因方法,它实现了外源基因在植物中的高效表达。     

农杆菌介导的小麦生殖器官的整体转化

农杆菌介导的植物整体转化技术是近几年新发展起来的转化方法。这种方法以植物生长点,特别是生殖器官的生长点作为外源基因导入的目标器官。由于避免了由单一转化细胞通过组织培养获得再生植株的过程,这种方法避免了基因型时植株再生和转化的限制,有望发展成为不受基因型限制的广泛适用的新型植物转化方法。此方法已在拟南芥上上获得很大的成功。本实验以不同发育时期的小麦为材料,通过农杆菌介导,或结合基因枪轰击,将外源基因导入到小麦生殖生长时期的生长点中,获得GUS(β-半乳糖醛酸酶)报告基因的瞬时表达。具体实验结果如下：①在供试的两个农杆菌菌株EHA105和LBA4404中,只有EHA105能够有效地侵染小麦生长点细胞,获得GUS报告基因的瞬时表达;②农杆菌只有经过乙酰丁香酮处理后,才能有效地侵染小麦生长点;③农杆菌的有效侵染与植物材料的伤害无关,转化效率与植株的大小成正比。     

农杆菌T-DNA导入植物基因组的分子机理

农杆菌介导转化法是目前研究最多、应用最广的植物转基因方法。农杆菌介导的T -DNA的转移和整合是细菌与植物细胞相互作用发生生物学效应的过程。主要综述了农杆菌T -DNA导入植物基因组的分子机理。     

根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化的一些影响因素

对根癌农杆菌介导的马铃薯遗传转化过程中涉及的外植体选择、预培养、共培养时间等因素进行优化。结果表明,马铃薯的茎段和叶片均能诱导出愈伤组织并分化成苗;在转化前对外植体预培养2d,再用OD600为0.5的农杆菌菌液侵染10min,共培养3d,转化效率较高。利用优化的农杆菌介导法进行转化,对再生苗进行PCR检测,结果表明,特异切割马铃薯纺锤块茎类病毒的核酶基因已导入了马铃薯。     

植物基因转化方法及在果树上的应用

本文综述了近年来植物基因转化的方法，各种方法在实际应用中的局限性及在果树基因转化方面取得的进展。植物基因转化方法包括及农杆菌介导法和直接转化法。果树基因转化研究已在１０余个树种中取得成功，其中大多数采用杆菌介导转化法。     

苹果转基因研究进展

近年来,苹果遗传转化研究取得了较大的进展,已有多种标记基因和目的基因成功转入苹果中并且得到稳定表达和遗传。农杆菌介导法是苹果上应用的主要转化方法,叶片再生不定芽途径是被广泛应用的受体系统。影响农杆菌介导成功与否的因素很多,文章从转化方法、叶片再生能力、菌株类型以及农杆菌侵染条件等方面综述了目前有关研究成果,指出目前依然存在转化效率不高、外源基因表达强度不够、对转化植株的选择不够重视等诸多问题。     

农杆菌介导的番茄遗传转化研究进展

综述了农杆菌介导法的转化机理及影响农杆菌转化效果的诸多因素 ,如 :植物基因型、转化受体、预培养、菌液浓度和侵染时间等 ,以及采用遗传工程技术改良番茄品种的现状     

农杆菌及基因枪在禾谷类作物遗传转化中的应用

目前，外源基因导入植物细胞的方法有多种，常用的有农杆菌法和基因枪法。本文对农杆菌转化禾谷类作物的基本原理及最新动态作了简明扼要的概述，同时对基因枪类型、原理及使用方面也作了简要的介绍。     

禾本科作物基因枪介导遗传转化研究进展

介绍了禾本科作物基因枪介导遗传转化原理，转化受体，讨论外源基因的整治，遗传和表达，以及今后的前景。     

改良RNA提取法及樱桃PDV和PNRSV的RT-PCR检测

介绍了一种从木本植物组织中获得高质量RNA的快速、简单和高效的核酸提取方法。该方法是基于核酸的二氧化硅捕获,避免了使用苯酚、氯仿等有机溶剂。利用该方法从樱桃组织中提取的总RNA用RT-PCR技术检测PDV,PNRSV均获得成功。从感病植株的一年生枝的叶片、韧皮部及芽组织中扩增出了预期的目的片段,即172和449bp,而健康组织中无此扩增带。该法提取的总RNA用于RT-PCR技术检测,其敏感性至少与商业出售的QiagenRNeasy提取试剂盒相当,但简单经济。     

禾本科杂草作为防治稻纵卷叶螟的功能性植物的可行性

【目的】通过提高植物的多样性来引诱害虫、保护天敌是一种可持续控制害虫的有效途径。稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)除水稻外,还可取食多种禾本科杂草,论文旨在利用稻纵卷叶螟对稻田周围不同杂草的喜好性,开发新型的稻纵卷叶螟防控策略。【方法】选取稻田生态系统常见的7种禾本科杂草(稗草Echinochloa crusgalli、秕谷草Leersia sayanuka、马唐Digitaria sanguinalis、牛筋草Eleusine indica、千金子Leptochloa chinensis、双穗雀稗Paspalum distichum和游草Leersia hexandra),于盆钵内人工栽培种植。将盆栽水稻和杂草植株置于纱笼中,接入初羽化的稻纵卷叶螟成虫,分别研究稻纵卷叶螟成虫在杂草与水稻之间的栖息选择性、产卵选择性,以及稻纵卷叶螟在各种杂草上的生物学特性。同时进行田间试验研究稻田田埂种植各种杂草条带(宽1 m)对稻纵卷叶螟成虫栖息、产卵分布的影响,通过赶蛾法调查杂草条带中及距离杂草条带1、5和10 m稻田中的稻纵卷叶螟蛾量,调查不同杂草条带中稻纵卷叶螟的产卵密度及卵被寄生率。【结果】稻纵卷叶螟成虫喜好趋向栖息于秕谷草和马唐,不喜好趋向双穗雀稗,在游草、牛筋草、稗草、千金子和水稻间,稻纵卷叶螟的栖息选择则没有偏向性。稻纵卷叶螟成虫在稗草、牛筋草、千金子、双穗雀稗、游草和水稻之间,偏向在水稻上产卵;秕谷草和水稻之间,偏向在秕谷草上产卵;马唐和水稻之间则没有明显的偏向性。稻纵卷叶螟在7种杂草上都能完成世代,但发育历期存在显著差异,在秕谷草上发育历期最短,双穗雀稗次之,游草、千金子、牛筋草、马唐、稗草和水稻上的发育历期间则没有显著性差异。不同寄主上的稻纵卷叶螟蛹重也存在差异,其中在马唐上的雌蛹、马唐和千金子上的雄蛹蛹重显著轻于在其他寄主植物上的蛹重。在不同寄主植物上稻纵卷叶螟的羽化率差异较大,秕谷草、游草、牛筋草、稗草和水稻上的羽化率为42.17%—51.31%,在千金子和双穗雀稗上最低,仅为11.76%和13.29%。雌性比以水稻和稗草上最高,显著高于其他寄主植物。大田试验表明,除了牛筋草和稗草外,其他杂草均能吸引稻纵卷叶螟栖息且在单位面积内的虫量显著高于稻田中的稻纵卷叶螟的数量。各种杂草上稻纵卷叶螟卵量差异显著,以秕谷草、游草、稗草和千金子上着卵量最多,每分蘖草上的着卵量达2.92—3.92粒,双穗雀稗和马唐分别为2.16和1.72粒,牛筋草最少。不同禾本科杂草上稻纵卷叶螟卵的被寄生率差异显著,介于21.90%—55.61%。其中,秕谷草和游草上的卵寄生蜂数量分别为1.47和1.42头/分蘖,为各种禾本科杂草上最高。【结论】秕谷草最具有成为防治稻纵卷叶螟的功能性植物的潜力,研究结果可为开发稻纵卷叶螟绿色防控新技术提供理论依据。     

沈阳浑河滨水地被植物种类调查及修剪试验——以沈水湾公园为例

调查沈阳浑河滨水地被植物的分布状况,并对其植物种类进行修剪试验。调查样地的优势植物为单子叶的马唐、狗尾草,盖度可达到60%。在试验地2条样带、6个样方共记录高等植物32种,其中禾草8种,占25%;多年生杂类草14种占43.7%;一年生杂类草10种占31.3%,其中一年生高草7种,有3种为较恶性一年生杂草。从水分生态类型上来看,这些植物属于中生的为15种,属于旱生的为10种——其中一年生达到8种,属于湿生的为7种。尤其马唐、狗尾草、金狗尾草、艾菊叶蒿、艾蒿、灰绿藜出现频度达到6次,大量的旱生植物进入群落中,反映出群落产生明显旱化、一年生化趋向。对于已退化的浑河滨水地被植物群落,通过采取适当修剪的方式如在每年的8月修剪一次留茬高度20 cm、10月修剪一次留茬高度30 cm,既能消除一年生恶性杂草又能保证多年生地被的恢复性生长达到较好景观效果,连续2年修剪大大降低了表层土壤库一年生禾草种子存量及萌发数量,增加了滨水多年生地被尤其低矮多年生地被物种的比例,滨水地被植物群落恢复到多年生地被占优势的良好态势。     

超声波辅助的植物转化方法的研究进展

为了探索超声波处理在植物转化中的功效及潜在发展能力,从超声波辅助植物转化的原理入手,归纳了方法的验证、超声波处理的受体材料和超声波处理对外源DNA的影响;总结了前人在超声波辅助植物转化方面的研究进展,进而分析了方法自身的优缺点及存在问题。指出超声波辅助植物转化方法虽然处于初级发展阶段,但超声波辅助的植物转化仍然是一个操作简单、省时省力、适用范围广的植物转化方法,文中还提出了存在的问题且给出了相应的解决对策;通过分析认为超声波辅助的植物转化方法具有广阔的发展前景。     

Isolation of mutants of an animal virus in bacteria

Mutants of animal viruses can be isolated in bacteria by recombinant DNA methods. Since no viral functions are required for propagation of recombinants in bacteria, viral mutants with lethal changes in cis- or trans-acting elements can be isolated, as well as partially or conditionally defective mutants. In the cases of viruses with small DNA genomes, such as the tumorigenic simian virus 40 (SV40), the entire viral DNA can be inserted into the bacterial plasmid pBR322 and cloned in Escherichia coli. Recombinant plasmids with a single copy of SV40 DNA cause morphological transformation of mouse cells in culture with the same efficiency as SV40 DNA isolated from virus-infected monkey cells, but the recombinant DNA is noninfectious and replicates poorly in permissive cells. However, SV40 DNA excised from the plasmid replicates as well as authentic viral DNA and is fully infectious. SV40 mutants with small deletions or base substitutions have been isolated by in vitro site-specific or random local mutagenesis of recombinant DNA followed by cloning in E. coli. Many of the mutants thus isolated are defective in specific viral functions.     

Inhibition of cytotoxicity of lymphocytes by concanavalin A in vitro

Human lymphocytes treated with the plant protein concanavalin A are stimulated to transform into blasts, without developing cytotoxicity for chicken erythrocytes. Prior treatment of lymphocytes with concanavalin A potentiated phytohemagglutinin-induced blast transformation and DNA synthesis but completely inhibited phytohemagglutinin-induced cytotoxicity. Inhibiton was not due to suppression of the mixed lymphocyte-erythrocyte aggregation normally caused by phytohemagglutinin. Inhibition of cytotoxicity was reversible when concanavalin A was removed from the lymphocytes by treatment with methyl-alpha-D-manno-pyranoside after 1 hour but not after 20 hours. The results indicate that blast transformation and cytotoxicity are separate expressions of lymphocyte stimulation.     

农杆菌与质粒DNA子房注射法在棉花转基因研究中的应用

为了研究农杆菌和质粒DNA两种子房注射法对普通棉花品种的转化效率,以8891棉花为材料,分别在三亚和常德两地进行了转化试验。结果表明：与质粒DNA注射相比,三亚地区农杆菌注射的转化效率高1.25个百分点;但农杆菌子房注射的落铃率高,获得的种子相对较少;而在不同的地点试验,常德地区的落铃率显著高于三亚地区;而质粒DNA直接注射的成铃率更高,虽然转化率相对较低,但也能获得有效的转化植株。