非电泳法PCR牛早期胚胎性别鉴定研究

为选出更高效、实用的牛胚胎性别鉴定方法，分别用成年牛血样提取的基因组DNA和冷冻的牛早期胚胎细胞DNA为样本，以电泳法和非电泳法用相应的性染色体DNA引物做胚胎PCR性别鉴定实验，以相对比。血液模板DNA结果与胚胎样本结果都表明，使用DYZ-1引物的非电泳法在比使用SE引物的电泳节约1h以上时间的同时，具有比SE更高的灵敏度。这次研究在我国首次成功地把非电泳PCR法应用到牛胚胎性别鉴定之中，减少了胚胎性别鉴定的操作步骤，并大大缩短了性别鉴定所需要的时间，从而使胚胎移植现场性别鉴定更加可行。     

牛早期胚胎的性别鉴定PCR技术的研究

根据牛SRY(Y-染色体性别决定基因)基因序列自行设计合成3对常规PCR引物作为牛性别鉴定特异性引物,对15头公牛、20头母牛的样品进行检测.结果表明,第2对引物可清晰扩增出公牛基因组DNA750 bp左右条带,而母牛基因组DNA无此扩增条带,证明这条引物可以应用于牛的早期胚胎性别鉴定研究与应用.     

PCR法鉴定雏鸽性别的初步研究

雏鸽的雌雄外貌形态差别甚微,极难区别。为有效准确地鉴别雏鸽的性别,淘汰非目的性别,从而降低饲养成本,提高经济效益。本研究通过采用PCR方法,选定特殊的性别CHD1基因及鉴定引物,克隆出雏鸽特定性别基因序列鉴定雏鸽的雌雄。结果表明:在雏鸽雌性样本中扩增出1条带(777 bp),而雄性中未见扩增带,显示出CHD1基因的性别特异性,PCR扩增性别鉴定结果与样本解剖后对性腺观察的形态学鉴定结果也完全一致。在87份样品中,阳性克隆结果为25,阴性克隆结果为62,故87只雏鸽中雌鸽25只,雄鸽62只,其准确率达100%。     

利用多重PCR技术快速鉴定牛性别的研究

为了建立一套简单、快速鉴定性别的方法,试验根据牛的Beta基因及SRY基因,设计2对引物(β-1,2和SRY-1,2),对牛96个牛肉DNA样本进行PCR性别鉴定。结果表明:雄性样品扩增出了300 bp和429 bp 2条片段,而雌性样品只能扩增出300 bp 1条片段。40个牛血液DNA样本鉴定结果与实际性别对比,雄性、雌性准确率均为100%。     

PCR方法鉴定牛早期胚胎性别研究进展

对用于早期胚胎性别鉴定的多重PCR、巢式PCR、引物一扩展预扩增PCR、非电泳PCR和LAMP法等扩增技术进行了综述,并针对早期胚胎性别鉴定技术在养牛业生产中的应用现状和存在问题进行分析与讨论,展望了PCR性别鉴定技术在养牛业中广阔的商业应用前景。     

影响牛PCR胚胎性别鉴定反应率的因素分析

本研究对影响牛PCR胚胎性别鉴定反应率的因素进行了分析，以提高胚胎性别鉴定效率。结果表明取样时样品中加入透明带残片使PCR反应率显著降低；取样大于等于5个细胞组PCR反应率显著高于取样1～4个细胞组；取样为死细胞和散细胞组的反应率略高于取样为活细胞组，但二者无显著差异；胚胎质量对反应率无显著影响；桑椹胚和早期囊胚的反应率显著低于囊胚和扩张囊胚，囊胚和扩张囊胚间差异不显著。     

建立全套式PCR对牛胚胎性别鉴定的方法

选择公牛Y染色体上的特异DNA序列和公母牛共有的DNA序列片段设计并合成引物，通过全套式PCR反应对公、母牛静脉血及牛胚胎进行特异性条带鉴定。结果表明，公牛出现322bp的性控条带和584bp的质控条带，而母牛仅出现584bp的质控条带。静脉血样与实际性别相符率为100％，显微切割下的5～8个胚胎细胞亦出现与静脉血样相同的特异性条带。这表明该种全套式PCR的鉴定方法准确、严谨、简便，具有很高的灵敏性和稳定性。     

用PCR对牛早期胚胎进行性别鉴定的研究进展

PCR技术能十分有效地鉴定出移植前牛胚胎的性别,而且能适用于生产实践。可以帮助养殖者充分有效的利用奶牛资源,获得更高的经济效益。本文就PCR技术、性别鉴定的发展概况和需要解决的问题进行综述。     

牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系优化的研究

根据牛SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物,根据牛-珠蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了牛胚胎性别鉴定的PCR反应体系。公牛可以扩增出187bp的SRY基因片段和255 bp的-珠蛋白基因片段,母牛只能扩增出255 bp的-珠蛋白基因片段。由于巢式PCR只需3～8个细胞就可以在紫外灯下看到扩增结果,而常规PCR则需要较多的细胞,所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。     

牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系的优化研究

根据牛SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物，根据牛酪蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了牛胚胎性别鉴定的PCR反应体系。同时对常规PCR和巢式PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的实用性进行比较。15头公牛、13头母牛的DNA样品检测结果表明：使用巢式PCR公牛可以扩增出205bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段，母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段；而使用常规PCR时公牛扩增出255bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段，母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段，其性别鉴定结果和实际完全一致。由于巢式PCR只需10个细胞就可以在紫外透射分析仪下看到扩增结果，而常规PCR则需要20～30个细胞，所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。试验采用巢式PCR鉴定了10个奶牛胚胎的性别，同时还对血清是否会对试验结果产生影响进行了研究。     

常规PCR和巢式PCR法鉴定牛早期胚胎性别体系的建立和优化

试验利用牛Y染色体重复序列作为雄性特异性引物,_以肿蔼坏死因子(TNFα)为内标引物建立多重PCR和多重巢式PCR体系,进行牛早期胚胎性别鉴定.共设计4对引物-Y染色体重复序列外引物和内引物,其扩增片段大小分别为534 bp和480bp,肿瘤坏死因子外引物和内引物,扩增片段大小分别为357 bp和272 bp.结果表明,4对引物均有很高的特异性和稳定性;多重PCR体系灵敏度为50 pg(约8个细胞),多重巢式PCR体系灵敏度为10 pg(约2个细胞),故多重巢式PCR体系更适合于牛胚胎性别鉴定.     

PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的应用

早期胚胎性别鉴定的方法有很多种,大致可分为两大类：一是前期主要采用的非生物学方法,如组织方法,免疫学方法[~[p16]〔1〕],X-相关酶法[~[p16]〔2〕]等,这些方法都缺少准确性和速度;二是80年代末,随着DNA体 外重组技术而发展起来的分子生物学方法,如DNA探针法〔3〕,聚合酶链反应法（PCR）。其中PCR法以灵敏、特异、准确和快速等特点,而成为胚? 胎性别鉴定中最有研究价值的技术方法。自Herr等（1990）[~[p16]〔4〕]报道了用PCR进行奶牛胚胎性别鉴定技术之后,国内外许多学者从事了这方面的研究 ,使准确率接近或达到了[=]100%,同时操作过程也简化了许多,并且可以在几个小时内完成,为PCR法进行早期胚胎性别鉴定应用于生产提供了基础。     

PCR法鉴别牛早期胚胎性别的研究进展

对PCR法鉴别动物胚胎性别的机理进行了分析,综述了近10年来相关操作技术的进展,包括早期胚胎取样、胚胎细胞DNA的提取、引物的设计、扩增条件的优化、扩增产物的检测和性控胚胎的冷冻等,并提出PCR法鉴别牛早期胚胎性别的前景与展望。     

PCR技术在牛早期胚胎性别鉴定中的应用

牛早期胚胎的性别鉴定已有十几年的发展历史,从早期的免疫学方法到胚胎细胞的染色体核型分析,取得了巨大的进展,但真正进入实用化阶段是PCR技术在牛早期胚胎性别鉴定中的应用.     

番鸭性别的PCR鉴定技术研究

国内外运用PCR技术进行家禽性别鉴定的研究主要集中在鸡上[1～4],针对其它禽类性别鉴定的研究则较少.目前,鉴别鸭性别的方法主要有肛门鉴别法、外形鉴别法、雏鸭尾部运动状态鉴定、鸣管鉴别法、DNA含量差异鉴别法和染色体组型鉴定法等,尚未见到利用分子生物学方法进行番鸭性别鉴定的研究报道.……     

鉴定牛早期胚胎性别PCR反应体系的建立及优化研究

根据牛Y染色体特异重复序列设计了一对引物,同时设计了一对牛常染色体引物作内标引物,研究了引物浓度、dNTP浓度、M g2 浓度、酶浓度、退火温度以及循环次数等因素对PCR方法鉴定牛胚胎性别的影响。试验结果表明,引物浓度、退火温度和循环次数对该反应体系影响较大,而dNTP浓度、T aq酶含量以及M g2 浓度的影响较小。     

用PCR鉴别牛胚胎性别的研究

本试验建立了用聚合酶链反体外扩增牛Ｙ染色体特异ＤＮＡ序列鉴别牛胚胎性别的方法。选择３头成年健康西门塔尔母牛为供体，在其自然发性后第９～１４ｄ，用ＦＳＨ超排处理，人工授精，发情后的第７ｄ（发情日为０ｄ），用非手术法采集胚胎，共获得１１枚Ａ．Ｂ级胚胎。在立体显微镜下分别对胚胎进行分割，各获得２个半胚。一个法胚在２０μＬ含１０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ（ｐＨ８．３）、５０ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ，２ｍｏ     

PCR技术及其在牛早期胚胎性别鉴定中的应用

本文对PCR(聚合酶链式反应)的基本原理、优点、方法及其在牛胚胎性别鉴定中的应用情况进行了扼要综述。     

牛胚胎性别鉴定荧光定量PCR方法的优化与应用

旨在建立一种可检测牛早期胚胎性别的复合探针体系,减少常规PCR方法电泳所带来的污染,提高鉴定准确率,降低鉴定成本.本研究以SRY为牛胚胎性别鉴定的目标基因,以进口YCD-PCR性别鉴定试剂盒为对照组(n=9543),荧光定量PCR的单引物分别扩增体系(荧光单扩,FSPSA,n=6570)和双引物混合扩增体系(荧光双扩,...