野猪CAPN10基因两个剪接变异体的克隆、序列分析和表达

为了进一步研究CAPN10在肌肉生长和肉质中的作用,本研究采用RT-PCR和RACE相结合的方法克隆野猪CAPN10 cDNA并进行序列分析,采用相对定量RT-PCR和竞争性RT-PCR方法研究该基因的表达情况.获得了野猪CAPN10的2个剪接变异体,二者前604个氨基酸完全相同,在多肽链相同位置处都存在着钙蛋白酶家族的特征性结构域和催化活性中心;相对定量RT-PCR分析表明,CAPN10普遍表达于所检测的野猪12种组织内,在6、9、12月龄的肌肉组织中大白猪的表达量显著高于同一发育时期的野家杂交猪(P<0.05);竞争性RT-PCR分析表明,2个变异体都表达于所检测的野猪9种组织内.结果表明CAPN10的表达量与肌肉的嫩度可能具有一定的相关性.     

不同猪种腿肌中Cst B基因的表达研究

为了研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(Cst B)基因在大白猪、野猪及野家杂交猪腿肌组织中的表达情况,试验采用RT-PCR方法对试验猪只进行检测。结果表明:在1日龄大白猪、360日龄野猪和各日龄的野家杂交猪中腿肌组织Cst B基因均有较高表达,总体上来说野猪和野家杂交猪腿肌组织中Cst B基因的表达高于纯种大白猪。     

野猪、家猪及野家杂种猪calpain3基因的多态性分析

Calpain3(CAPN3)在肌肉组织中特异表达,其活性显著影响宰后肉的嫩化,研究以野猪、家猪及野家杂种猪为研究对象,对其上的一个点突变进行了基于限制性内切酶HincⅡ的PCR-RFLP分析.结果表明:2个等位基因在野猪、家猪中的分布存在着极显著的差异,在长白、大白、杜洛克这3个欧洲引进猪种中没有检测到B等位基因;民猪共检测了35头,只发现了3个AB杂合体,其余都是AA型;而野猪却以B为优势基因,B等位基因频率明显高于A等位基因,结合品种(品系)特性说明该突变可能与瘦肉率和嫩度有关.     

野猪、家猪及野家杂种猪calpain3基医的多态性分析

Calpain3（CAPN3）在肌肉组织中特异表达，其活性显著影响宰后肉的嫩化，研究以野猪、家猪及野家杂种猪为研究对象，对其上的一个点突变进行了基于限制性内切酶Hinc Ⅱ的PCR-RFLP分析。结果表明：2个等位基因在野猪、家猪中的分布存在着极显著的差异，在长白、大白、杜洛克这3个欧洲引进猪种中没有检测到B等位基因；民猪共检测了35头，只发现了3个AB杂合体，其余都是AA型；而野猪却以B为优势基因，B等位基因频率明显高于A等位基因，结合品种（品系）特性说明该突变可能与瘦肉率和嫩度有关。     

一种快速鉴别野猪与家猪的分子生物学方法

无论是在养殖生产还是在产品销售过程中,有效的区分野猪、家猪以及野家杂交猪都是非常必要的,尤其是野家杂交猪因其外貌特点和生活习性与野猪非常相似而很难区分.本研究采用PCR-Accll-RFLP和PCR-BspHI-RFLP技术,检测了野猪、民猪、长白猪、野猪(♂)×长白猪(♀)和野猪(♂)×北京黑猪(♀)共计142头个体的MC1R基因型.结果表明,野猪的Accll/BspHI基因型组合BB/AA型为野猪所特有的,其他猪种内均不存在该种基因型组合,此方法可有效的区分野猪与家猪和野家杂交猪.     

滩羊肌肉组织钙蛋白酶系统基因表达及其与嫩度的相关分析

为了研究日粮不同蛋白水平下钙蛋白系统基因在滩羊肌肉组织的表达差异,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)方法,根据GenBank已发表钙蛋白酶1(calpain 1)基因CAPN1、钙蛋白酶2(calpain 2)基因CAPN2和钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)基因CAST的序列设计特异性引物,以滩羊肌肉组织总RNA为模板,分析了CAPN1、CAPN2和CAST基因在滩羊背最长肌的基因表达水平。结果发现CAPN1和CAPN2基因在高蛋白组中上调表达,qPCR扩增中CAST基因没有明显的扩增曲线,CAST基因的表达没有检测到。基因表达水平与肌肉剪切力值相关性分析表明,CAPN1、CAPN2与剪切力值均显著负相关(P<0.05),相关系数分别为-0.864和-0.896。     

猪Krox20基因组织表达规律及其在脂肪细胞中表达规律的研究

采用半定量RT—PCR方法对1月龄和6月龄大白猪，1月龄野猪Krox20基因的表达规律进行研究，并且还检测猪脂肪细胞和不同月龄大白猪脂肪组织Krox20基因的表达情况。结果表明Krox20基因在大白猪和野猪的心、肝、脾、肺、肾、胃等12个组织中均有表达；各组织间表达存在差异，在心、肝、脂肪组织中高表达；1月龄大白和1月龄野猪Krox20的表达模式基本相同，不存在种属特异性；Krox20基因在不同时期的脂肪组织的表达随日龄的增加而降低，9月龄表达量最低；脂肪细胞水平的研究中，在前脂肪细胞中未检测到Krox20的表达，只有在诱导之后的5h内，检测到Krox20的瞬时表达。     

寒冷季节热休克蛋白70、90在不同遗传背景猪群体中差异分析

为探讨寒冷季节不同遗传背景猪热休克蛋白70,90的分子行为,在寒冷季节(1月份)采集长白山野杂猪、民猪和大白猪外周血及肝脏组织样品,分别用ELISA和QRT-PCR方法检测HSP70,90的表达量。结果显示民猪群体外周血HSP70含量最高,野杂猪次之,大白猪最低,但三个群体中HSP70含量不存在显著差异(p0.05)。外周血HSP90含量检测发现野杂猪最高,民猪次之,大白猪最低,其中野杂猪与大白猪群体间HSP90含量呈现极显著的差异性(p0.01)。肝脏mRNA表达检测发现HSP70基因mRNA在野杂猪中高表达,表达量约为大白猪的1.5倍,民猪次之,表达量约为大白猪的1.2倍。HSP90基因mRNA同样在野杂猪中最高,约为大白猪的3.5倍,民猪约为大白猪的1.7倍。HSP70和90外周血含量及肝脏m RNA表达表现出一定的趋同性。本研究结果表明不同遗传背景猪中HSP70和90血清含量及肝脏组织表达量存在差异。     

猪TNNC1基因和TNNC2基因在肌肉组织中的发育性表达研究

为了探明肌钙蛋白不同亚型在肌纤维增殖与类型转变上的作用和分子机理,本研究采用荧光定量PCR技术检测了TNNC1基因和TNNC2基因在25日龄、70日龄和150日龄三个生长阶段的大白猪和山西黑猪的背最长肌、腰肌和股肌中的表达变化。结果表明:这两种基因在大白猪和山西黑猪的三种肌肉组织中均有表达,但存在统计学意义上的极显著差异。TNNC1基因在大白猪的背最长肌和腰肌中的表达存在相似的变化趋势。在大白猪上,TNNC1基因在25日龄时的背最长肌和腰肌中表达量最高,在150日龄时的表达量降到最低水平;在山西黑猪上,TNNC1基因在25日龄时的股肌组织中表达量较低,而在70日龄时的腰肌、70日龄时的股肌组织、150日龄时的股肌组织中表达量最高。在大白猪上,TNNC2基因在25日龄时的背最长肌和150日龄时的股肌中表达量较高;在山西黑猪上,TNNC2基因在70日龄时的腰肌和股肌中表达量较高。说明TNNC1基因与TNNC2基因在肌纤维发育与分化过程中具有重要的调节作用,可作为检测肌纤维类型的分子标记,为探索猪的肌肉发育和改善肉品质的研究提供理论参考。     

山地乌骨鸡不同组织中CAPN 1基因表达的发育性变化

本试验采用SYBR GreenⅠ荧光定量法,首次测定了四川山地乌骨鸡1d、14d、28d、42d、56d、70d、84d的胸肌、腿肌、肝脏、心、脑组织中钙蛋白酶1CAPN1基因的相对表达量。结果表明：CAPN1基因在鸡体内普遍存在,CAPN1基因在肌肉组织中的表达量与鸡肌肉组织的生长发育呈相似的变化规律。     

大长杂交猪DJ-1基因克隆、生物信息学及表达分析

【目的】克隆大长杂交猪DJ-1基因CDS区并进行生物信息学分析,探讨DJ-1基因在猪脂肪组织中的表达规律,为后续探究该基因在猪脂肪沉积中的功能奠定基础。【方法】以大长杂交猪腹股沟皮下脂肪组织cDNA为模板,PCR扩增DJ-1基因CDS区,利用在线工具对DJ-1蛋白进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR检测DJ-1基因在大长杂交猪、大白猪（瘦肉型猪）和莱芜猪（脂肪型猪）脂肪组织中的表达量,并比较表达差异。【结果】大长杂交猪DJ-1基因CDS区全长570 bp,编码189个氨基酸。系统进化树分析表明,大长杂交猪和牛亲缘关系最近,与斑马鱼亲缘关系最远。DJ-1蛋白分子质量为19.94 ku,是一种稳定的酸性、亲水性蛋白,且含有1个GAT_1超家族成员Thij结构域;无信号肽和跨膜结构域,具有21个磷酸化位点、4个N-糖基化修饰位点和1个O-糖基化修饰位点。DJ-1蛋白二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角、无规则卷曲组成,占比分别为42.86%、17.99%、7.94%和31.22%,三级结构预测结果与其一致。蛋白互作分析发现,DJ-1蛋白可能与SOD2、NDUFV2、SNCA、BCL2L1和MAP3K等蛋白存在相互作用。实时荧光定量PCR结果表明,DJ-1基因在大长杂交猪背膘、腹股沟脂肪和肾周脂肪组织中均有表达,但无显著差异（P>0.05）;且在大白猪脂肪组织中的表达量显著或极显著低于莱芜猪（P<0.05;P<0.01）。【结论】本研究成功克隆了大长杂交猪DJ-1基因CDS区,其编码蛋白属稳定的酸性、亲水性蛋白,在莱芜猪脂肪组织中的表达量显著或极显著高于大白猪。本试验结果为进一步研究猪DJ-1基因功能提供理论参考。     

不同品种猪肌肉组织miR-1和miR-133基因的表达分析

本研究旨在探讨猪miR-1和miR-133基因在不同品种猪肌肉组织中的表达情况。试验以180日龄的蓝塘猪、长白猪以及大花白猪的背最长肌为材料,采用Stem-loop实时定量RT-PCR法检测miR-1和miR-133在长白猪、大花白猪及蓝塘猪背最长肌组织中的表达情况。结果表明,在蓝塘猪中,miR-1的表达量分别为长白猪和大花白猪的4.7和6.4倍,前者与后两者之间表达水平有显著的差异(P<0.05),而后两者之间表达量差异不显著(P>0.05);同样,miR-133在蓝塘猪中的表达量最高,其次为长白猪,两者分别是大花白猪的7.2和5.7倍,且差异显著(P<0.05),但蓝塘猪与长白猪之间差异不显著(P>0.05)。miR-1和miR-133在不同品种猪中存在特异性表达,提示可能与肌肉发育性状相关。     

钙蛋白酶基因在鸡不同组织和品种中的表达差异

为了探讨钙蛋白酶(calpain,CAPN)基因在鸡不同组织和品种中的表达差异,本研究采用半定量RT-PCR方法研究了CAPN基因在鸡不同组织和品种中的表达差异。结果表明:CAPN基因表达于优质鸡的10个不同组织中,肝脏和胸肌中的表达量最高并显著高于其他组织(P<0.05);优质鸡胸肌组织中CAPN基因的表达量显著高于艾维茵肉鸡和宝万斯尼拉蛋鸡品种(P<0.05),优质鸡品种之间以及肉鸡与蛋鸡品种间差异不显著(P>0.05)。结果证明钙蛋白酶是一种在鸡体内普遍存在的蛋白,CAPN基因在鸡不同组织和品种中的表达存在显著差异。     

野家杂交猪的行为习性与饲养管理

由于野家杂交猪具有野味、保健、经济效益高三大优势,其养殖在这几年越来越受到人们的关注.野家杂交猪多是选用雄性野猪与家猪的F1代和F1代再进行回交、横交和再杂交的后代,是具有一定野猪血统和野猪特征的商品猪,有些研究者和养殖者称为"特种野猪",其产业化在国内具有很大的潜力.     

不同品种猪肌肉组织心型脂肪酸结合蛋白基因的表达差异

用体重约100kg DLY杂交猪和雅南猪各5头，屠宰取骨骼肌和心肌样品，采用RT—PCR方法研究心型脂肪酸结合蛋白（H—FABP）基因在不同品种猪肌肉组织表达的差异。结果表明：H—FABP基因表达于猪的骨骼肌和心肌中，但是其在2种肌肉组织中的表达量不同，心肌中表达量极显著高于骨骼肌（P〈0．01）；心肌和骨骼肌H-FABP基因的表达量2品种猪差异不显著（P〉0.05），但无论是心肌还是骨骼肌雅南猪的表达量都高于DLY杂交猪。     

长白山野猪和东北民猪RXRB基因mRNA组织表达特性分析

为了研究RXRB基因mRNA表达模式在猪肌纤维发育和组织学性状中的作用,试验以东北民猪(♀♂)、长白山野猪(♀♂)为材料,利用半定量RT-PCR方法对RXRB基因在不同骨骼肌组织中mRNA表达特性进行分析。结果表明:除股四头肌和肺组织外,该基因的表达量在相同品种不同性别组织间、相同性别不同品种组织间、相同品种相同性别不同组织间均存在不同程度的差异性。其中,RXRB基因在东北民猪(♀♂)背最长肌、斜方肌、三角肌、膈肌间表达量差异显著(P0.05),在长白山野猪(♀♂)背最长肌、股二头肌、斜方肌、腰大肌、腰小肌间表达量差异显著(P0.05);在东北民猪和长白山野猪(♀)股二头肌、斜方肌、三角肌、腰小肌的表达量差异显著(P0.05),在东北民猪和长白山野猪(♂)背最长肌、斜方肌、腰大肌、膈肌的表达量差异显著(P0.05),且在东北民猪(♂)斜方肌表达量最高,为3.71。另外,RXRB基因在两个品种猪中的多个组织不表达,且两种猪的肌肉组织表达量普遍高于非肌肉组织。说明RXRB基因可能是参与骨骼肌发育调控进而影响猪肉品质的候选基因之一。     

Cst B基因在180日龄大白猪不同组织中的表达研究

为了研究Cst B基因在180日龄大白猪心肌、肝脏、胃、肾脏、肺脏、大肠、小肠、背肌和腿肌组织中的表达情况,试验采用RT-PCR技术对大白猪进行检测。结果表明:Cst B基因在肺脏中有较高的表达,而在心肌、背肌和腿肌等肌肉组织中的表达量相对较低。     

探讨如何促进野家杂交猪养殖的发展

近年来,我国的猪肉市场价格波动比较频繁,这种情况一方面是盲目地扩大规模导致的,另一方面是由于猪肉的品质不高。野家杂交猪能在一定程度上改变这种现状,这种猪既继承了野猪肉质好的优点,又兼具家猪体形大的特色,野家杂交猪的市场推广能够给猪肉市场带来新的活力。本文将从野家猪杂交猪的概述、野家杂交猪的发展现状、促进野家杂交猪养殖发展的策略等方面具体探讨。     

大白猪和山西黑猪三种肌肉JAZF1基因的发育性表达研究

本文旨在探究JAZF1基因mRNA在大白猪和山西黑猪肌肉组织中的发育性表达规律,为研究猪肌内脂肪的形成机理提供有力的理论参考。采用实时荧光定量PCR技术检测大白猪和山西黑猪在25d、70d和150d的背最长肌、腰大肌和股二头肌三种肌肉组织中JAZF1基因mRNA表达量。结果表明:随着日龄的增长,JAZF1基因在三种肌肉中呈现逐渐下降的表达趋势。大白猪25d腰大肌和股二头肌、70d股二头肌中的表达量显著高于山西黑猪(P<0.05)。三种肌肉中的表达量比较发现,JAZF1基因在两个品种腰大肌中表达量最高,其次是股二头肌,背最长肌表达量最低。结果表明JAZF1基因在肌肉发育和肌内脂肪沉积过程中起着很重要的作用。本研究结果可为探索肌肉发育及肌内脂肪沉积相关研究提供理论参考和研究基础。     

草原红牛CAPN1基因mRNA表达特性分析

为了进一步揭示CAPN1的功能,本研究采用实时荧光定量PCR技术对草原红牛初生牛与成年牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、瘤胃、十二指肠、背最长肌8种组织中的CAPN1mRNA表达水平进行了分析。结果表明：CAPN1基因在组织中普遍表达,但表达量存在差异。且成年牛的CAPN1基因在肺脏和瘤胃组织中的表达显著高于初生牛（P〈0.05）,成年牛在肝脏、脾脏、肾脏和背最长肌组织中CAPN1基因的表达水平极显著高于初生牛（P〈0.01）。