马链球菌兽疫亚种的保护性抗原SzP蛋白的鉴定与评价

马链球菌兽疫亚种是引起猪链球菌病的主要病原之一。该菌的致病机理尚不清楚,且缺乏合适的疫苗,使猪链球菌病很难得到有效的控制。本实验通过构建SzP重组表达载体,纯化重组蛋白,对其的免疫效力进行了评价。结果表明该蛋白可以诱导高滴度的血清IgG抗体,并且可提供一定的免疫保护效力。进一步研究表明该蛋白是一个重要的体内诱导抗原,可诱导高水平的Thl和Th2型免疫应答。揭示了SzP蛋白在致病过程中起到重要作用,为新型疫苗的研制及致病机制的研究奠定了基础。     

马腺疫链球菌的分离与鉴定

新疆伊犁马的主要繁育基地在昭苏马场,随着自治区大畜牧业的发展,确定了"以马产业为主导产业"的发展战略,重点发展养马业和马产品的综合产业.随着马产业的迅速发展,马腺疫又重新抬头,不仅阻碍了马驹的生长发育,还影响着马匹的美观,甚至导致死亡.2011年在昭苏马场出现马腺疫,发病率80％～100％,死亡率不高.病原分离鉴定及其16S rDNA序列分析报告如下.     

马链球菌马亚种的分离鉴定及fneB基因序列分析

新疆伊犁某地区一些马群中不断出现以全身多发性脓肿为特征的患病马匹,为了查明其是否为马腺疫,以及由何种马链球菌感染所致,无菌采集典型患病马匹脓汁样品,常规THB增菌,绵羊鲜血平板划线分离单菌落后,用透射电镜对分离菌的微观形态进行观察,PCR对其fneB基因进行克隆与序列分析,最后用生化试验进行验证。结果表明,从12匹患病马的脓肿组织中,共采集了25份样品,从中分离鉴定出来源于不同患病马的2株马链球菌马亚种菌株,这2株菌的形态均符合链球菌的特点;基因克隆测序结果表明,其中1株与英国源的兽疫亚种H70和马亚种4047核苷酸同源性较高,均达97%~98%,另1株与英国源的马亚种4047和瑞典源某马亚种核苷酸同源性较高,均达98%~99%。这2株菌之间核苷酸序列同源性达98.3%,氨基酸同源性则达99.3%。马链球菌马亚种是引起伊犁某地区这些患马全身多发性脓肿的主要致病菌,它们可能来源于之前从欧洲和美洲引进的马匹,提示在进行疫病防控工作时,要特别注意海关检疫,积极防止疫病的传入。     

马链球菌马亚种SeM基因的原核表达及鉴定

<正>马腺疫(strangles)是由马链球菌(Streptococcus equi,S.equi)马亚种感染马所引起的急性接触性传染病[1]。该病最早由R.Jordanus于1251年发现并报道,该病以发热、上呼吸道黏膜卡他性化脓性炎症、颌下淋巴结急性化脓性炎症为典型症状[2]。在我国,     

猪源马链球菌兽疫亚种分离鉴定

为确诊广东省江门市某规模化猪场保育仔猪发生脑膜炎死亡的病因,本研究通过临床解剖观察、细菌分离培养、革兰染色镜检、溶血性观察、生化鉴定、小鼠毒力试验和药敏试验、16S rRNA及M蛋白(SzP)基因序列分析进行鉴定。结果:从发病猪脑顶叶分离到1株致病菌,命名为SEZ20180618,分离菌在鲜血平板上生长出微隆起、圆滑湿润的小菌落,呈β溶血,革兰染色阳性、呈链状排列的球菌;16S rRNA基因序列分析显示,分离菌与马链球菌兽疫亚种处于同一分支,同源性在97%以上;SzP氨基酸序列与马链球菌兽疫亚种CT株、Cxy012株、SH00166株等参考菌株的相应序列同源性为100%。分离菌株SEZ20180618对BALB/c小鼠具有较强的毒力,对BALB/c小鼠的半数致死量为1.54×10~6 CFU;分离菌对阿莫西林、青霉素、庆大霉素等14种临床常用抗菌药物均敏感,对阿米卡星和复方新诺明2种药物中度敏感。     

猕猴源马链球菌兽疫亚种的分离鉴定

为鉴定死亡猕猴血液中分离的细菌,本试验采用16S rRNA序列比对的方法对该菌进行鉴定。药敏试验采用纸片法,毒力试验采用皮下注射小鼠的方法。结果显示,所鉴定细菌为马链球菌兽疫亚种,敏感的药物有氨苄青霉素、阿莫西林、头孢唑啉、克林霉素、利福平、氟苯尼考、红霉素和罗红霉素等。经皮下注射700个活菌即能致死小鼠。结果表明,南平某动物园此次猕猴死亡是由马链球菌兽疫亚种引起的。     

豚鼠源马链球菌兽疫亚种的分离鉴定

为了查明河北省唐山市某豚鼠养殖场发病豚鼠感染的病原菌,本试验采集发病豚鼠的眼角脓性分泌物,采用细菌分离纯化、革兰染色、生化鉴定、16S rRNA基因PCR扩增方法对分离菌进行鉴定,通过K-B试纸法检测分离菌株对24种抗菌药的敏感性,试管二倍稀释法测定19种中药对该分离菌株的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并通过动物回归试验检测该分离菌株的致病性。结果显示,分离菌株在血琼脂培养基培养24 h生长为针尖状透明菌落、呈β溶血,革兰染色为阳性圆球状、3～5个连接呈短链状,生化特性与马链球菌兽疫亚种相符,将其命名为MLQJ-1;16S rRNA序列比对结果显示,MLQJ-1与马链球菌兽疫亚种同源性高达99.72%,在系统进化树中处于同一分支,鉴定为马链球菌兽疫亚种;MLQJ-1对24种抗菌药的敏感性不同,对青霉素、头孢曲松和阿莫西林等8种抗菌药敏感,对阿米卡星、新霉素和卡那霉素等10种抗菌药耐药;苦地丁、苦参、黄芩和千里光对MLQJ-1的MIC值介于1.9～15.6 mg/mL,MBC值介于1.9～31.2 mg/mL;小鼠腹腔接种MLQJ-1菌液后24 h内全部死亡。结果表明,...     

马链球菌Se39.612蛋白的克隆与表达

马腺疫是一种高度接触性疫病，困扰着发达国家的养马业。通过筛选马链球菌CF32株3kb～8kb随机基因组文库，获得一株阳性克隆。测序拯救质粒得到序列，确定插入片段编码完整aa的分子量为39．612Ku（Se39．612），根据序列设计特异性引物PCR扩增该基因，分子克隆表达该蛋白。用纯化Se39，612蛋白检测马腺疫康复血清及鼻腔冲洗液，表明Se39，612在体液免疫及粘膜免疫中起作用。     

驴源马链球菌马亚种分离鉴定及消毒剂敏感性研究

为查明2019年4月新疆石河子地区某驴场疑似马腺疫疫病病原及病原菌对消毒剂的敏感性,试验采集临床发病和死亡动物颌下及肺部浓汁进行分离纯化、革兰氏染色、生化鉴定及PCR测序鉴定,测定不同温度、pH值、盐浓度条件下分离株的生长情况,碘伏、新洁尔灭、来苏水及84消毒剂4种消毒剂对分离株的消杀率。结果表明,导致该驴场发病的病原为马链球菌马亚种,分离株对常用消毒剂抵抗力较弱,不耐酸和高盐环境。     

抗马链球菌马亚种组方加味优选及其体内抑菌作用研究

【目的】筛选可抑制马腺疫主要致病菌——马链球菌马亚种的最优中药组方,为临床马腺疫的防治提供参考。【方法】选用赤芍、大黄、山豆根等27种中药,首先通过体外抑菌试验(牛津杯法、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)、联合药敏试验)结合L₈(2⁶)正交试验初步筛选抗马链球菌马亚种中药组方的最佳优选因素,再通过L₁₈(3⁶)正交试验进一步筛选基础组方最佳配比;最后在基础组方的基础上,根据中兽医方剂配伍理论,添加黄芪和当归2味补虚药,通过马腺疫小鼠模型体内抑菌试验筛选加味组方配比,结合组方保护率结果及组织脏器病理变化验证加味组方的体内抑菌作用。【结果】试验筛选出了马链球菌马亚种超敏和高敏的7味中药：浙贝母、赤芍、甘草、大黄、雪白睡莲、山豆根和苦参。大黄、雪白睡莲、山豆根、甘草、苦参和浙贝母的MIC分别为0.078、0.078、0.125、0.156、0.156和0.250 mg/mL。雪白睡莲、赤芍、山豆根、甘草、大黄、苦参和浙贝母的MBC分别为0.078、0.125、0.125、0.156、0.15...     

驴源马腺疫链球菌的分离与鉴定

目前,关于马腺疫链球菌感染驴的报道较少。本研究从山东省某驴场的2只病驴颌下淋巴结肿胀化脓液中分离出2株病原菌,经染色镜检、生化试验和16S rDNA的PCR测序鉴定,确定该病原菌为马链球菌马亚种。采用纸片扩散K-B法,对分离菌进行药敏试验,发现其对恩诺沙星、氯霉素、环丙沙星、头孢噻肟和美罗培南高度敏感。本研究为驴感染马链球菌马亚种的诊断与防治提供了参考。     

马链球菌兽疫亚种SeseC-00619蛋白的功能研究

为了阐明马链球菌兽疫亚种新蛋白SeseC-00619(细胞表面蛋白,cell surface protein,CSP)的功能,本试验采用real-time qPCR分析CSP的体内诱导表达特征,同时在大肠埃希菌中表达与纯化马链球菌兽疫亚种表面相关蛋白CSP,研究其免疫反应性及免疫保护功能,并试图解释其分子机制。通过流式细胞术与黏附抑制试验探索CSP对小鼠肺上皮细胞的黏附作用。结果表明,CSP是一个重要的体内诱导抗原,并且能在S.zooepidemicus细菌表面表达,属于细菌表面蛋白。重组蛋白CSP能够黏附LA-4细胞表面,而这种黏附作用可以竞争性抑制S.zooepidemicus黏附宿主细胞。本结果为进一步研究CSP基因的功能及其在致病机制中的作用奠定了基础。     

马链球菌兽疫亚种PGK蛋白的免疫保护试验

为了阐明马链球菌兽疫亚种(SEZ)PGK蛋白的免疫保护作用,使该菌引起猪、马、牛等多种动物的链球菌病得到有效控制,本试验构建PGK重组表达载体,纯化重组蛋白,对其免疫效力进行系统评价。结果表明:PGK蛋白可以诱导高滴度的血清Ig G抗体,并且可提供一定的免疫保护效力;Real-time PCR技术分析表明,PGK是一个重要的体内诱导抗原;并且可诱导高水平的Th1和Th2型免疫应答,揭示PGK在SEZ治病过程中起到重要作用,为新型疫苗的研制奠定了基础。     

马链球菌马亚种-MDMC0316株的分离鉴定与遗传进化分析

从内蒙古锡林浩特市某马场中疑似患有马腺疫的马匹下颌部淋巴结中采集脓汁样本,通过实验室常规检测和分子生物学方法进行细菌分离鉴定和遗传进化分析。采用绵羊血琼脂平板划线法分离和纯化培养可疑细菌,并进行革兰染色和镜检;绘制分离菌生长曲线,并对该分离菌进行常规生化试验;对16S rRNA基因使用标准PCR方法扩增和测序并应用Mega 7.0生物软件绘制出该分离菌的系统发育进化树并确定其种属地位;对纯化的分离菌进行药物敏感性试验,拟筛选出辅助治疗效果最佳的抗生素类药物。结果显示,分离菌在绵羊血琼脂平板上呈现典型的β溶血环,染色特点为革兰阳性链球菌,从生长曲线上可以看出分离菌16 h后达到平台期;在生化试验中,分离菌对蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露糖利用呈现阳性,而对乳糖、甘露醇、蕈糖、七叶苷、山梨醇等呈现阴性,对精氨酸脱羧酶分解试验呈阳性,而对硝酸盐(还原)试验、胆汁溶菌试验、马尿酸盐分解试验、VP试验呈现阴性,提示分离菌与典型马链球菌马亚种生化试验标准结果吻合;根据16S rRNA基因BLAST比对分析发现,分离菌与NCBI中已注册的马链球菌马亚种序列同源性为100%,遗传进化树上可以看出分离菌与新...     

马链球菌兽疫亚种烯醇化酶对小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响

旨在研究马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi ssp.zooepidemicus,SEZ）烯醇化酶（enolase,Eno）对小鼠肺泡巨噬细胞（RAW264.7）吞噬能力的影响。通过构建原核表达质粒获得重组烯醇化酶（rEno）,采用台盼蓝活细胞计数法,判定在不同处理浓度和时间下rEno蛋白对RAW264.7细胞的细胞毒性。将rEno蛋白与RAW264.7细胞共孵育后,用SEZ作用于细胞并检测细胞吞菌数量,判断RAW264.7细胞对SEZ的吞噬活性。进一步通过活细胞稳定同位素标记技术（SILAC）和蛋白质谱分析技术（LC-MS/MS）,筛选到RAW264.7细胞中可能与SEZ Eno存在相互作用的候选蛋白。结果发现,10 μg·mL^-1 rEno蛋白处理对RAW264.7细胞有明显的细胞毒性,且10 μg·mL^-1 rEno蛋白处理RAW264.7细胞2和4 h可显著抑制其对SEZ的吞噬作用（P<0.01、P<0.05）。初步筛选到RAW264.7细胞中动力蛋白激活蛋白亚单位蛋白（dynactin subunit protein 2,Dctn）、整合素α-M蛋白（integrin alpha-M）等17种可能与Eno发生互作的蛋白。本研究获得了rEno重组表达蛋白,发现rEno可减少RAW264.7细胞对SEZ的吞噬,互作蛋白的初步筛选也为进一步揭示Eno在SEZ抗吞噬中的作用机制奠定了基础。     

马链球菌马亚种3种抗原蛋白对小鼠免疫的免疫原性分析

旨在对比研究马链球菌马亚种(Streptococcus equisubsp.equi,S.equi)3种不同抗原蛋白——分选酶A(sortase A,SrtA)、M蛋白(SeM)及IgG结合蛋白(EAG)的免疫原性及免疫保护效果,本研究以表达并纯化的Sr-tA、SeM及EAG 3种蛋白单独及联合免疫小鼠,免疫后检测了血...     

马链球菌马亚种FNEB蛋白的截短表达及其免疫保护性研究

为研究马链球菌马亚种FNEB蛋白的免疫保护性,本研究采用PCR方法从马链球菌马亚种新疆分离株中扩增FNEB基因部分片段,克隆于原核表达载体p ET-30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和western blot分析显示,重组蛋白大小约60 ku,具有良好的抗原性。将纯化的重组蛋白免疫小鼠后,以马链球菌马亚种新疆分离株进行攻毒,结果显示该重组蛋白对免疫组小鼠具有保护力,保护率为65%。本研究克隆了马链球菌马亚种的FNEB截短基因并表达了相应重组蛋白,免疫小鼠后能够提供较好的保护,为重组FNEB蛋白亚单位疫苗的研制奠定基础。     

巴马香猪源马兽疫链球菌分离及分子生物学鉴定

为了对山东某巴马香猪场送检的35日龄病死猪病因进行确诊,试验对送检病料进行了细菌分离培养、形态学观察、生化试验、药敏试验、致病性试验及PCR鉴定。结果表明:分离菌为马兽疫链球菌,该菌株具有多重耐药性,对昆明系小鼠及断奶仔猪均有一定致病性。说明该分离菌为发病猪发病病原,可作为防治该病自家灭活菌苗的候选菌株。