组织贴块法培养肉鸡肺动脉平滑肌细胞

建立组织贴块法培养原代和传代肉鸡肺动脉平滑肌细胞(PASMC).将1～10日龄雏鸡的肺动脉中膜切成小于1 mm2的组织块,用翻转干贴壁法进行贴块培养.采用形态学和抗α肌动蛋白抗体(α-actin)免疫组化染色法对所培养的细胞进行鉴定.倒置显微镜观察培养的细胞呈梭形,重叠生长,呈典型的"峰-谷"状.抗α-actin单克隆抗体免疫组化染色可见胞浆内有明显的细丝,呈现棕黄色,表明所培养的细胞为肺动脉平滑肌细胞.组织贴块法简便易行,可用于血管病理生理变化研究.     

兔血管内皮细胞的培养

血管内皮细胞除具有屏障功能外,还能合成、分泌多种细胞因子,在凝血、抗凝、纤溶、抗纤溶、调节细胞生长、改变脂质代谢、维持血管壁完整性和管壁张力等方面起重要作用.本实验室已经构建了与器官移植排斥反应有关的蛋白DAF(促衰变因子)和MCP(补体膜辅蛋白)的编码基因的融合基因.为了检测融合基因是否构建成功,笔者选择了内皮细胞作为融合基因的瞬时表达系统.内皮细胞培养为体外观察融合基因的表达提供了便利.笔者利用兔主动脉摸索建立了内皮细胞培养方法,现报道如下.     

组织块法培养鸡胚肠黏膜上皮细胞

本试验采用组织块方法原代培养鸡胚肠黏膜上皮细胞,倒置显微镜下细胞呈圆形,透明状,成功培养原代鸡胚肠黏膜上皮细胞。试验表明,组织块法可用于鸡胚肠黏膜上皮细胞的原代培养,具有简便易行、培养周期短、纯度高等优点,是肠道疾病良好的体外研究模型。     

组织块再移法分离培养奶山羊乳腺上皮细胞

通过比较组织块贴壁培养法、组织块再移法、胰蛋白酶消化法、胶原酶Ⅱ消化法和胶原酶消化配合组织块贴壁法分离、培养、纯化山羊乳腺上皮细胞,绘制细胞生长曲线并计算细胞群体倍增时间,研究乳腺上皮细胞培养效果。结果显示,利用胶原酶消化配合组织块贴壁法不能获得正常生长的乳腺上皮细胞;利用组织块贴壁培养法、组织块再移法和胶原酶Ⅱ消化法获得大量的乳腺上皮细胞,所得到的上皮细胞生长曲线呈典型的＂S＂型,符合细胞生长的一般规律。组织块再移法不仅可快速获得大量纯化的乳腺上皮细胞,而且所得到的细胞经传代后,细胞群体倍增时间最短、增殖能力最强,表明,该法是获得山羊乳腺上皮细胞最适宜的方法。     

血管内皮细胞的分离和培养

血管内皮细胞位于循环血液与血管壁内上组织之间,是一种多功能的细胞。本文综述了血管内皮细胞分离和培养的方法,并对内皮细胞的鉴定及分离和培养中常见因素进行了介绍,阐明了血管内皮细胞分离和培养方法的完善具有广阔的应用前景。     

酶消化组织块法体外培养奶牛乳腺上皮细胞

建立稳定培养奶牛乳腺上皮细胞系的方法。结合酶消化法和组织块法,在体外进行分离培养奶牛乳腺上皮细胞,利用胰酶消化进行纯化和传代。通过倒置显微镜观察、细胞爬片姬姆萨染色和角蛋白18免疫组织化学方法对培养的细胞进行形态学观察和鉴定。观察发现,细胞排列紧密,呈多角形或梭形,长满后呈铺路石样。胞核呈圆形或椭圆形,核仁清晰可见,多为3~5个。通过细胞角蛋白18免疫组织化学方法对乳腺上皮细胞进行鉴定,呈阳性反应。获得的乳腺上皮细胞增殖旺盛,培养至40代生长活性仍然稳定。酶消化组织块法成功培养出奶牛乳腺上皮细胞,是分离乳腺上皮细胞的一种有效方法。     

人大血管内皮细胞培养条件的完善

本研究的目的是确定支持人大血管内皮细胞增殖的最适培养条件，以人隐静脉内皮细胞（HSVEC）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为研究对象，研究了基础培养基（14种），胎牛血清（FBS）和有丝分裂原（3种）的影响与细胞增殖的关系。另外还测定了几种胞外基质（ECM）包被的培养皿的效果。结果表明，促进细胞增殖最有效的培养基为MCDB131，与更常用的M119培养基相比，MCDB131可使细胞增殖提高2.3倍，与不加血甭的培养基相比，培养基中加入20?S可使细胞增殖提高7.5倍，肝素（50μg/mL)和内皮细胞生长补充物（ECGS）（50μg/mL)能显著提高细胞增殖，上皮细胞生长因子（EGF）不能提高细胞增殖，与生长在用纤维粘连蛋白，层粘连蛋白，明胶或胶原Ⅰ和Ⅳ包被的培养板上的细胞相比，生长在未包被的培养板上的内皮细胞在增殖和形态方面无统计学差异。HSVEC和HUVEC增殖最大的培养条件为MCDB131培养基中加入2mmol/L谷氨酰胺，20?S，50μg/mL肝素和50μg/mLECGS，ECM包被培养皿无增殖作用。     

大鼠血管内皮细胞的分离、鉴定及传代培养

为了获取大鼠血管内皮细胞供血管形成研究,建立了大鼠主动脉内皮细胞的分离培养方法。采用Wister大鼠主动脉植块法分离内皮细胞并传代培养,计数并绘制不同代次内皮细胞生长曲线。应用CD31免疫组化及内皮细胞的管形成试验对内皮细胞进行了鉴定。结果表明,主动脉植块法及传代培养获得的细胞具有内皮细胞"铺路石"样的典型特性,传代生长状态良好;CD31抗体免疫组化阳性、管形成能力良好。所建立的大鼠主动脉植块法分离及体外培养内皮细胞的体系是一种简便可行的获取内皮细胞的有效方法。     

猪血管内皮细胞体外培养方法的建立

实验研究了猪血管内皮细胞体外培养方法并对培养的细胞进行了鉴定。获得了传代培养的猪血管内皮细胞。结果表明：用Ⅰ型胶原酶和胰酶消化分离，均可获得接种量的原代培养物，但Ⅰ型胶原酶消化效果更好；原代或早期传代培养物中有时混入的成纤维细胞可用柠檬酸胰酶有效清除。在不用贴附基质和内皮细胞生长因子(ECGF)的条件下，向生长液中加入胰岛素可成功的培养内皮细胞。该细胞在体外培养时贴壁生长，单层细胞呈“铺路石”状排列，细胞间存在接触抑制；第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光染色阳性，证明培养的细胞为血管内皮细胞。     

猪脐静脉血管内皮细胞分离培养和鉴定

为了建立成熟的猪脐静脉血管内皮细胞(SUVECs)分离培养和鉴定体系,采用1%的I型胶原酶灌注法分离细胞,计数板计数,以10%1640培养基于37℃、5%CO2条件下培养;待融合80%左右胰蛋白酶消化1:2传代,利用倒置显微镜观察细胞生长状态及形态;采用血管性血友病因子(VWF)和血小板-内皮细胞粘附分子(PECAM-1/CD31)进行免疫荧光细胞鉴定;利用ICELLigence细胞功能分析仪测定细胞活力和生长曲线。研究从30头新生仔猪脐带(8~15cm)中分离到超过107个细胞,VWF和CD31双重检测阳性,分离得到的SUVECs超过90%,细胞生长状态良好,呈小三角形、椭圆形、梭形、多边形单层生长,界限清晰,融合后呈铺路石状,增殖能力强,符合血管内皮细胞的基本特征,可培养超过15代,为进一步研究猪胎盘血管发生及其对母猪生产性能影响提供可靠细胞模型。     

动物组织块染色石蜡包埋制片法

动物组织切片的制作,是教学、科研和病理检验中的一项经常性工作。但在大批制作时,由于程序繁多,所以工作效率不高。为了简化制作过程,提高工作效率,笔者进行了组织块染色石蜡包埋制片法试验。是将组织的染色,改放在组织包埋切片之前进行,组织切片后不再染色,直接贴片至封固,即成永久标本。     

动物组织块染色石蜡包埋制片法

动物组织块染色石蜡包埋制片法任成林（张家口农业高等专科学校河北张家口０７５１３１）组织块染色石蜡包埋制片法，是将组织的染色，改放在组织包埋切片之前进行，组织切片后不再染色，直接贴片至封固，即成永久标本。这种方法的优点是，简化了切片制作程序，节省药液。...     

新生犊牛皱胃平滑肌细胞的原代培养——组织块培养法和胶原酶消化法的比较研究

通过组织块培养法和胶原酶消化法分离培养犊奶牛皱胃平滑肌细胞,采用免疫细胞化学方法和免疫荧光化学方法对其进行鉴定,并将鉴定结果、细胞生长曲线进行比较。结果,两种方法培养出的细胞生长曲线基本相同,细胞纯度免疫细胞化学鉴定结果为：组织块培养法为95％以上,胶原酶消化法为90％;免疫荧光鉴定结果为：组织块培养法为96％,酶消化法为89％。组织块培养法操作简单、经济,但耗时较长;胶原酶消化法快速、获得细胞较多,但价格昂贵,故在实际操作中可将两种方法联合应用。     

大鼠肺微血管内皮细胞的体外分离培养与纯化

旨在建立一种简单易行、获得细胞纯度较高的体外分离、培养大鼠肺微血管内皮细胞的方法。取5~7日龄SD大鼠分离外周肺组织,组织植块法获得原代大鼠肺微血管内皮细胞,37℃、5%CO_2培养箱中传代培养,采用免疫磁珠法对其进行分离纯化,并对分离纯化后的细胞进行免疫荧光及流式细胞鉴定,通过MTT比色分析法准确、安全、可靠地检测纯化后传代肺微血管内皮细胞的增殖情况。结果显示:倒置显微镜下观察单个细胞呈短梭形或多角形,汇合后呈铺路石样,单层贴壁生长,细胞分离纯化后经免疫荧光检测CD31呈阳性,流式细胞仪检测淋巴管内皮细胞表面特有标记VEGFR-3呈阴性(P=0.1,且P0.5),且复苏后经MTT测得传代细胞的增殖情况良好。成功建立了一种分离高纯度大鼠肺微血管内皮细胞的体外培养方法。     

大鼠脑皮质微血管内皮细胞的分离培养及鉴定

本研究目的在于建立一种简易可行、获得细胞纯度较高的体外分离、培养大鼠脑皮质微血管内皮细胞的方法,为进一步研究其功能打好基础。新生SD大鼠,分离大脑皮质,经匀浆、两步过滤法获得大鼠脑微血管段,用胶原酶消化后,在37℃、5%CO2培养箱中进行原代细胞培养。通过差速消化和差速贴壁方法并结合倒置显微镜下形态学的观察进行传代和纯化,利用第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检测法对培养的细胞进行鉴定。结果显示:成功分离培养了大鼠脑微血管内皮细胞,倒置显微镜下单个细胞呈多角形,互相融合后呈"铺路石"样,单层贴壁生长;免疫荧光检测第Ⅷ因子相关抗原呈阳性。说明本研究建立的大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法,程序简单,获得的细胞纯度较高。     

猪脐静脉血管内皮细胞的分离及体外培养研究

为建立一种操作简单并且能获得大量猪血管内皮细胞的分离培养方法,本研究采集新生健康长白猪脐带,取其脐静脉血管,灌注0.1%的Ⅰ型胶原酶,于37℃水浴消化10 min后收集内皮细胞,培养于含20%胎牛血清的M199培养基中,长满单层后用胰酶消化传代培养。并对培养的细胞形态学、相关抗原和其他特征以及对病毒的易感性进行鉴定。结果表明,Ⅰ型胶原酶消化后可获得大量内皮细胞,细胞培养后的形态学观察显示细胞贴壁生长良好,呈典型的铺路石状排列;第Ⅷ因子相关抗原和细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白均呈阳性,内皮细胞比率可高达100%。传3代后的生长曲线显示细胞传代后延迟期小于1 d,对数生长期约3 d,第5 d进入平台期,第7 d开始脱落死亡。病毒感染试验表明所获得的内皮细胞对猪瘟病毒高度易感,病毒生长与常用的PK-15没有区别。上述研究结果表明本研究建立的血管内皮细胞分离培养方法简便有效,为大量制备原代血管内皮细胞提供了可靠的方法。     

快速动物组织块染色石蜡包埋制片法

组织石蜡制片是教学、科研、病理检验工作中广泛应用的一种实验技术。传统的常规石蜡制片程序繁多、费时费力费药。近年来笔者试用组织块先染色后包埋切片，用加温振荡法进行组织块的固定、脱脂、染色、脱水、透明和浸蜡，不仅缩短时间、简化程序、节省药液，减少了工作量，而且提高了蜡块和切片的质量，蜡块及切片可以重切并永存。取得了简便、快速、省药、效果良好的结果。现介绍如下。     

黄芪多糖对体外培养大鼠肠黏膜微血管内皮细胞增殖的影响

研究黄芪多糖对体外培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞（rat intestinal mucosa microvascular endothelial cells,RIMMVECs）增殖的影响。应用不同浓度的黄芪多糖作用于体外培养的RIMMVECs。通过MTT法检测黄芪多糖对RIMMVECs增殖的影响。不同浓度的黄芪多糖对细胞增殖的影响不同:黄芪多糖浓度在25～800 mg/L时可明显促进细胞的增殖（P<0.05或0.01）;浓度为1.6×10³ mg/L时对细胞的增殖无影响;浓度在3.2×10³～25.6×10³ mg/L时对细胞生长具有抑制作用（P<0.05或0.01）。黄芪多糖有促进体外培养RIMMVECs的增殖作用,此作用对保护内皮损伤、加速内皮修复有重要作用。     

奶牛子宫内膜上皮细胞和间质细胞的组织块培养及鉴定

奶牛子宫内膜细胞是研究奶牛子宫内膜生理和病理机制的重要体外模型,国外关于奶牛子宫内膜细胞的分离和培养的研究很多[1-3],而国内尚未见相关报道.本研究选用荷斯坦奶牛的健康子宫内膜,应用组织块培养法培养并分离间质细胞和上皮细胞.为从细胞和分子水平进一步研究奶牛子宫内膜提供必要的条件.