间接ELISA检测雏鸡烟曲霉菌抗体的研究

以烟曲霉菌丝提取物作为包被抗原 ,建立了检测雏鸡血清中烟曲霉菌抗体的间接 ELISA方法。特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高 ,重复性好 ,其抗原包被浓度为 1 2 4μg/ ml,血清最适稀释度为1∶ 1 6,抗原最佳包被时间为 4℃过夜 ,血清反应时间为 3 7℃作用 1 .5 h。对 1 2 0份人工感染烟曲霉菌的雏鸡血清试验发现 ,间接 ELISA检出时间比琼脂扩散试验早 7d以上 ,检出率高约 40 .8%。表明间接 ELISA试验是一种特异敏感的雏鸡血清烟曲霉菌抗体检测技术     

应用间接血凝试验检测牛肺疫抗体

自制1.5％绵羊红细胞诊断液并用于检测牛肺疫抗体,结果如下:(一)三批标准阳性血清(批号为8601、8301、8001)凝集价均在160倍以上,标准阴性血清(批号为8601)凝集度仅为10倍。15份被检血清IHA的阳性检出率(8/15)高于补体结合反应(CF,6/15)且凝集价均在40倍以上。(二)用牛肝片吸虫病、布氏杆菌病和附红细胞体病阳性血清作类症鉴别诊断,凝集度仅为10倍。(三)把牛肺疫CF8502抗原作倍比稀释,加2个凝集单位牛肺疫阳性血清8601和8301进行间接血凝抑制试验,分别被32倍和16倍稀释的抗原所抑制,本项试验结果表明IHA用于检测牛肺疫,具有检出率高、特异性强、设备要求简单、容易操作等特点,适于在现地推广应用。     

间接ELISA法检测促卵泡素抗体方法的建立

建立了检测促卵泡素(FSH)抗体的间接ELISA方法,用该法检测由FSH-BSA免疫BaLb/c小鼠所分离的5份待检血清,结果均为阳性。通过反复试验,确立间接ELISA检测FSH抗体的最佳反应条件,即酶标二抗工作浓度为1∶1 200,抗原包被浓度10μg/mL,待测血清最佳稀释度为1∶500,封闭液为1.0%的脱脂奶粉,同时设置抗原阻断试验对结果进行验证。     

利用圆环病毒2结构蛋白建立检测其抗体

为建立检测PCV2抗体的间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，将猪圆环病毒2(porcine circovirus type 2，PCV2)结构蛋白Cap(不含核内化信号肽)的基因克隆到原核表达载体pET28a(+)中，并在大肠杆菌中表达，获得可溶性的重组蛋白(Cap⊿41)，用Cap⊿41作为诊断抗原，确立了间接ELISA的最佳反应条件，并对来自4个猪场的394份血清进行检测。结果表明，与免疫荧光检测相比，建立的间接ELISA的检测敏感性和特异性分别为93.14%和95.72%，且建立的间接ELISA的批内与批间差异较小。此外，对394份血清的检测结果体现的4个猪场的PCV2抗体消长规律与临床结果相符，表明建立的间接ELISA方法可靠，可以用于PCV2抗体的检测。     

新城疫免疫雏鸡抗体动力学的研究

本实验以血凝抑制(HI)试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)为检测手段,对以点眼和滴鼻途径接种新城疫B_1系疫苗的无特定病原(SPF)雏鸡(1日龄首免、14日龄二免)进行血清抗体消长规律的测定,同时对两种试验结果进行比较,力图为制定合理的免疫程序提供理论依据,为ELISA在我国鸡新城疫群体免疫中的应用提供新资料。实验结果表明:新生雏鸡抗体产生系统发育迅速,4日龄即可在血液中检测到HI抗体,经两次免疫后,27日龄达最高值,HI抗体在2~4以上的持续期为50d。14日龄前,ELISA未能检测到ND特异性抗体,而HI试验能准确地反映ND抗体的消长规律,两试验无相关性。二免之后,两试验所反映的抗体消长规律基本相同,二者检测的血清抗体水平具有相对平行的关系,且ELISA的敏感性高于HI试验。在SPF雏鸡14日龄进行第二次免疫接种后的免疫应答中,Ig~G是其主要免疫球蛋白。     

褐飞虱抗原检测最佳ELISA条件的建立

应用褐飞虱单克隆抗体3B2和4B8比较了直接、间接和多种抗体夹心ELISA方法.结果表明:当拟环纹豹蛛稀释512倍(含拟环纹豹蛛0.04 mg/mL)时,直接和间接ELISA的OD值比阳性对照仍降低5%以上.而当捕食者稀释100倍时,对同种单抗、异种单抗和两种单抗混合夹心ELISA检测OD值的影响均小于5%.在加入100倍豹蛛稀释液时,3种抗体夹心ELISA检测灵敏度均为16.90 ng/mL(1/17509头褐飞虱雌成虫),直接和间接ELISA分别为:67.59 ng/mL (1/4378头)和135.18 ng/mL (1/2189头).建立了4B8稀释1000倍(28.13 μg/mL),捕食者匀浆液定容至1 mL/头后再稀释100倍,HRP-4B8稀释4000倍(1.04 μg/mL)的夹心ELISA用于检测捕食者肠道中的褐飞虱抗原.在此系统下,检测灵敏度为每头拟环纹豹蛛含1.69 μg猎物蛋白(1/175头褐飞虱雌成虫),非目标抗原的影响小于5%.     

间接ELISA检测减蛋综合征病毒抗体方法的建立

应用SephdexG-200亲和层析获得纯化的减蛋综合征病毒EDSV作ELISA抗原,应用抗鸡Ig轻链单抗1B7辣根过氧化物酶结合物建立了定量检测EDSV抗体水平的ELISA方法。确立了将鸡血清100倍稀释监测ELISA效价(ET)的回归方程y=0.59287x+0.75757(r=0.96763)可用于定量测定。血凝抑制(HI)抗体与ELISA方法的比较试验表明,ELISA法比血凝抑制试验敏感2倍以上.     

山羊关节炎-脑炎ELISA方法的建立及其应用

 应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA），检测了山羊关节炎-脑炎病毒（CAEV）试验感染山羊和自然感染山羊的血清抗体，确定了最适宜的反应条件。CAEV感染山羊血清终点滴度结果表明：ELISA比琼脂扩散试验（ID）敏感性高，对自然感染山羊检出率比ID高3%左右。CAE标准阳性血清和自然感染阳性血清预先被特异性抗原中和后的ELISA反应均呈阴性，从而证实了本方法的特异性。因此，本方法适于CAE的流行病学调查和监测工作。     

间接ELISA 与中和试验检测O 型FMDV 疫苗免疫猪血清抗体的比较研究

血清中和抗体滴度的高低,体现了血清对病毒感染的中和能力,是评价疫苗免疫效果的重要指标.对国内3个大型猪场共120头猪的血清样品分别进行O型口蹄疫病毒ELISA和病毒中和试验,并分别比较两种方法的符合率和阳性检出率.结果表明,两种方法的阳性符合率和阴性符合率分别为77.3％和72.2％,总符合率为75％,均能有效检测猪血清中的口蹄疫抗体水平,但是采用间接ELISA检测血清抗体,存在一定比例的假阳性或假阴性.病毒中和试验更适合进行口蹄疫血清学的检测.     

河豚毒素两种定量检测方法的比较研究

应用小鼠生物试验和间接竞争抑制酶联免疫吸附试验(ELISA)同步检测17份河豚鱼肝组织和20份河豚鱼肌肉组织中的河豚毒素含量，并对2种方法进行比较。结果表明：ELISA法与小鼠生物试验测得的结果相符合。ELISA法由于其测定程序简便易行，速度快，灵敏度高，在河豚毒素的定量检测以及在预防河豚鱼中毒方面具有广泛的应用前景。     

猪乙型脑炎新型协同凝集试验与酶联免疫吸附试验(ELISA)方法的比较

用新型SPA(Staphylococcal Protein A)协同凝集试验对88份猪血清进行了乙型脑炎病毒(JEV)抗体检测,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行了对比,两种方法检测结果为:ELISA检测阳性率为62.5%(55/88),SPA阳性率为68.18%(60/88),二者阳性符合率为90.0%(54/60),总符合率为86.3%(76/88).对8份SPF猪血清进行检测,两种方法检测结果均为阴性.结果表明,SPA与ELISA检测乙型脑炎结果符合,前者更为简便和实用.     

应用酶联SPA免疫吸附试验(ELISA)检测奶山羊布氏杆菌病

本文应用酶联 SPA 免疫吸附试验(ELISA)对710份奶山羊血清进行了布氏杆菌病的检测,并与 SAT 和 CFT 相对应。检测结果:ELISA 的检出率(62％,441/710)高于 SAT(60.56％,430/710,包括可疑反应)和 CFT(2.16％);漏检率(5.5％,39/710)低于 SAT(7.0％,50/710);经抗原处理的 ELISA 和 SAT 均呈阳性或阴性反应血清的 O.D 值,与原血清的 O.D 值相对比,前者差异显著(P<0.05),后者差异不显著(P>0.05)。说明 ELISA 是检测奶山羊布氏杆菌病的一种简单、特异、灵敏和快速的血清学方法之一,可用于本病的诊断检疫。布氏杆菌病是一种人畜共患的慢性传染病,侵害多种家畜和动物,引起流产和不育等病症,影响畜牧业的发展,危害人民身体健康。目前常用的血清学试验方法有多种,各有其优缺点,但这些方法存在着敏感性低或因操作复杂而不易推广。因此,寻求简便、特异和敏感的检测法已为众望所归。用 ELISA 检测人、牛和猪的布氏杆菌病已有报道。现将我们应用酶联 SPA 免疫吸附试验检测奶山羊布氏杆菌病报道如下。     

酶联免疫吸附试验检测姜片虫感染者血清抗体

超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原,以1:3500工作浓度包被酶标板;采用Kato—Katz氏定透法普查姜片吸虫病,对虫卵阳性者用ELISA法测定血清抗体,同时测定健康居民的血清和其他吸虫病患者血清,以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性、特异性和交叉反应性。按常规ELISA方法操作,目视与酶标仪判断结果。普查2 189人中姜片吸虫卵阳性者168例;168例中165例ELISA阳性,ELISA与Kato—Katz氏定透法的阳性符合率98.21％;健康居民血清147份,阳性6份,阳性率4.08％;与血吸虫病交叉阳性为9.38％,肺吸虫病交叉阳性为5.36％。应用此法检测姜片虫感染者血清抗体具有敏感性高、特异性强和交叉反应率低等特点,可代替粪检法广泛用于姜片吸虫感染的检测。     

血清法监测人工感染弓形虫病猪特异抗体的比较

应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较.结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4 d)早于ELISA(第14 d)和IHA(第20 d);检出持续时间方面,LAT(54 d)长于ELISA(44 d)和IHA(19 d);平均检出率方面,LAT(7/8)高于ELISA(6.7/8)和IHA(5/8).试验结果表明,ELISA和LAT适合于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于猪弓形虫病的早期检测.     

血清稀释液的筛选及犬抗狂犬病病毒血清抗体正常值范围的确定

应用间接ELISA法进行抗体检测是评价狂犬疫苗免疫效果的一种快捷有效手段。首先筛选得到一种灵敏、特异的血清稀释液;然后应用其对采集自不同地区的812份未免疫犬血清稀释并进行间接ELISA检测;以OIE标准阴、阳性犬血清为对照,随机选取不同A450范围的犬血清应用RFFIT进行检测;以RFFIT效价低于0.1 IU/ml的犬血清,计算阴性血清正常值范围和95%的可信区间,并建立标准品的回归方程。结果显示：所筛选到的血清稀释液灵敏、特异,有756份血清样品的效价低于0.1 IU/ml,犬抗狂犬病抗体阴性血清的正常值范围为0.127 3±0.059 8,95%的可信区间为0.078 1-0.172 3。应用OIE犬阳性血清标准品建立了A450和抗血清效价的回归方程：A=1.139 IU＋0.470。该试验结果为犬狂犬病防制以及犬狂犬病抗体ELISA检测试剂的研制奠定了基础。     

Development of a recombinant pB602L-based indirect ELISA assay for detecting antibodies against African swine fever virus in pigs

African swine fever(ASF), caused by the African swine fever virus(ASFV), is a devastating disease of domestic and wild pigs. There is no effective vaccine, and the control of the disease relies mainly on surveillance and early detection of infected pigs. Previously, serological assays, such as ELISA, have been developed mainly based on recombinant structural viral proteins of ASFV, including p72, p54, and p30. However, the antibodies against these proteins do not provide efficient protection aga...     

Development and Validation of a Recombinant Envelop Glycoprotein Based Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay to Detect the Antibody to REV

Based on the antigenic analysis of Reticuloendotheliosis virus （REV） envelop glycoprotein （env） protein, an alternative indirect enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） for detection of REV antibody was developed using a truncated env protein of REV produced in Escherichia coli. This assay was validated by comparison with an indirect immunofluorescence assay （IFA） and a REV-based ELISA. The diagnostic sensitivity （DSN）, specificity （DSP） and accuracy of the env indirect-ELISA （ienv-ELISA） were 93.7, 93.3 and 93.6% compared with IFA on 1 380 field serum samples, and 84.8, 95.2 and 91.7% compared with the REV-based ELISA on 96 field sera, respectively. Cross-reactivity assay showed that this assay was REV-specific. Repeatability test revealed that the coefficients of variation of positive sera within and between runs were less than 15%. This method is simpler to produce and perform, time-saving and suitable for large scale survey of REV antibody at low cost.     

仔猪血清猪瘟抗体动态的数学模型

作者对8窝104头仔猪血清的猪瘟抗体用酶联免疫吸附试验间接法进行测定,在获得大量数据的基础上,使用多项式回归分析方法,建立了仔猪血清猪瘟抗体酶联免疫吸附试验测定A值(y)关于日龄(x)的回归方程,本模型的意义在于对各日龄(3日龄～25日龄)仔猪血清猪瘟抗体A值的观察值能进行点预测及区间预测。另4窝45头仔猪血清猪瘟抗体A值作为考验样本,考验样本值都落在置信度:勾0.90的预测区间之内。模型提示,猪瘟抗体水平的最低点在20～21日龄;猪瘟母源抗体的半衰期为11.86天。     

牛病毒性腹泻病毒夹心ELISA快速检测方法的建立与初步应用

用增殖与浓缩后的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)分别免疫健康牛犊和家兔,制备牛抗BVDV和兔抗BVDV超免疫血清,并用层析法纯化牛抗BVDV IgG和兔抗BVDV IgG,建立了检测BVDV的双抗体夹心ELISA快速检测方法.结果表明:该检测方法的最佳反应条件为:牛抗BVDV IgG包被浓度为100μg/mL,兔抗BVDV IgG最佳工作浓度为50μg/mL,样品反应时间为90min,酶标抗体工作浓度为1∶8 000,以D490nm≥0.177作为阳性判定标准.该ELISA检测方法的重复性CV小于10%,最低检测限为1.87μg/mL,与牛轮状病毒、牛冠状病毒、猪瘟病毒、犊牛大肠杆菌和沙门菌等病原无交叉反应,该ELISA试剂在室温下至少可保存6个月.用该ELISA方法和IDEXX公司抗原检测试剂盒对甘肃省不同地区牛场156份临床粪便样品进行了检测,阳性检出率分别为17.3%和16.7%.表明本试验建立的ELISA方法特异性强、敏感性高且重复性好,可用于BVDV的快速检测.     

重组CE18蛋白在绵羊绦虫蚴病诊断上的应用

 【目的】探讨细粒棘球蚴CE18重组蛋白作为绦虫蚴病免疫诊断抗原的应用价值,为筛选绦虫蚴病血清学诊断抗原提供依据。【方法】应用棘球蚴CE18重组抗原建立间接ELISA方法,分别对18份脑多头蚴、15份细颈囊尾蚴、19份棘球蚴感染绵羊血清及194份棘球蚴病疫区绵羊血清和13份健康羊血清进行检测,通过显著性差异分析评价CE18蛋白作为诊断抗原的意义。同时,应用生物学软件对CE18抗原蛋白同源序列进行分析,进一步从分子水平上提示CE18蛋白作为绦虫蚴病诊断抗原的依据。【结果】序列分析表明棘球蚴CE18蛋白基因为多种绦虫如泡状带绦虫、多头带绦虫、猪带绦虫等的共有序列,其蛋白质氨基酸序列相似性很高,不同种属之间高达99%,从分子水平上表明CE18蛋白为带绦虫蚴共同抗原成分之一。重组抗原CE18-ELISA方法检测绵羊血清抗体水平显示：脑多头蚴病、细颈囊尾蚴病、棘球蚴病和棘球蚴病疫区血清的阳性率分别为38.89%、73.33%、100%和76.14%,而对照组血清为阴性反应。【结论】CE18重组蛋白可作为绵羊棘球蚴病和细颈囊尾蚴病血清学诊断抗原,用于畜群活体检疫初筛试验。