蚕抗菌肽研究与产业化35年的回顾和展望

1981年国内研究者首次从中国柞蚕(Antheraea pernyi)蛹血淋巴中分离出抗菌肽,测定其序列约37个氨基酸残基。之后又设计合成了柞蚕抗菌肽D、AD及CAD,并且在酿酒酵母、毕赤酵母及芽孢杆菌中得到高效表达,通过优化培养基配方及建立先进的发酵工艺流程后生产的蚕抗菌肽产品质量稳定。目前国内已有广东、河南、山东及湖北等省的多家生产蚕抗菌肽的企业,产品已应用于农业、养殖业、医药、食品、化妆品等领域。例如:蚕抗菌肽代替抗生素作为安全、无药物残留、不污染环境的绿色饲料添加剂用于饲养肉鸡、肉猪及对虾等,能有效预防疾病,提高成活率,增加体质量,降低料肉比;将蚕抗菌肽基因转化作物培育抗病品种,其中转入抗菌肽基因的抗青枯病辣椒品种已在广东、广西2个省(区)推广应用。今后需要进一步通过建立先进、高效的蛋白质重组技术和发酵工程技术,完善蚕抗菌肽产业化开发应用过程的相关标准、法规,努力推进蚕抗菌肽这一绿色生物制品发挥其潜在的巨大经济效益。     

高剂量Cecropin AD对10-20kg阶段仔猪的饲用效果

B蚕抗菌肽是蚕体因微生物等因子入侵而产生的一类免疫应答产物，具有广谱抗菌活性。蚕抗菌肽是至迄为止人们研究得最为深入的一类动物抗菌肽，其中Cecropin A、B、D及其多种杂合肽已可用工程酵母发酵生产。近年来，动物抗菌肽作传统抗菌剂代用品的应用受到了人们的高度重视。温刘发等（2001）对抗菌肽Cecropin AD在粤黄雏鸡中的饲养效果及其较适应用剂量进行了初步探索，并开展了其对断奶仔猪饲养效果的初步研究。为探究Cecropin AD制剂作肉猪抗菌类饲料添加剂应用的可行性，本文以液态的Cecropin AD制剂添加到10kg-20kg阶段仔猪的饲粮中（添加活性剂量为18000U／kg料），开展了30天的饲养试验。     

抗菌肽作饲料添加剂对肉鸭生长性能的影响

300只肉鸭随机分为5组进行试验，分别为每吨日粮中添加1，2，3L蚕抗菌肽AD—酵母液体制剂的3个试验组，每吨日粮加50g金霉素和使用基础日粮的正负2个对照组。试验结果表明：抗菌肽制剂与金霉素一样具有促生长效果，它能提高肉鸭产肉率，降低腹脂率。在每吨饲料加3L抗菌肽制剂的浓度下，对小鸭的促生长效果优于中鸭阶段，中鸭的最佳使用量有待进一步探讨。     

巴斯德毕赤酵母表达系统及其在饲料添加剂开发上的应用前景

经过近15年来的不断开发和完善,巴斯德毕赤酵母已经成为目前最成功的酵母表达系统之一。由于该酵母具有高水平表达的潜力和能进行高密度发酵,它的大规模发酵可用于生产多种新的蛋白。一些生长激素、酶、抗菌肽在毕赤酵母中的成功表达展示了该表达系统在饲料添加剂开发上的广阔应用前景。     

毕赤酵母表达系统应用于抗菌肽表达的研究进展

抗菌肽是一类具有生物体固有免疫反应的小分子多肽,其在毕赤酵母表达系统中的研究已经非常广泛,成果显著。文章以如何获得高水平表达及高产量分泌蛋白为目的,分析了抗菌肽自身及毕赤酵母表达系统双方面的影响。从启动子、密码子、载体、宿主、发酵条件等方面综合论述,并对抗菌肽及毕赤酵母表达系统的发展前景进行了探讨。     

柞蚕抗力肽D转基因酵母的培养及表达产物的分析

采用碱金属法（醋酸锂盐），以大肠杆菌-酵母穿梭质粒表达载体在酵母中表达人工合成的柞蚕抗菌肽D基因。用电泳及抗菌肽活性检测法对表达产物进行分析。同时研究了转基因酵母的发酵条件，如温度,pH及营养等对酵母表达的影响。试验结果表明转基因酵母表达产物为1.14mg/L培养液，杀菌活力为0.216单位。     

柞蚕抗菌肽D转基因酵母的培养及表达产物的分析

采用碱金属法（醋酸锂盐），以大肠杆菌－酵母穿梭质粒表达载体在酵母中表达人工合成的柞蚕抗菌肽Ｄ基因。用电泳及抗菌肽活性检测法对表达产物进行分析。同时还研究了转基因酵母的发酵条件，如温度、ｐＨ及营养等对酵母表达的影响。试验结果表明转基因酵母表达产物为１．１４ｍｇ／Ｌ培养液，杀菌活力为０．２１６单位。     

抗菌肽Cecropin AD在毕赤酵母中的组成型表达及中试发酵研究

构建表达抗菌肽Cecropin AD蛋白的真核重组表达质粒pGAPZα-A-CAD,并转化酵母菌Pichia pastoris X-33,Zeocin抗性筛选阳性重组子,通过PCR鉴定、Tricine-SDS-PAGE分析和琼脂孔穴扩散法筛选获得抗菌肽CAD组成型表达菌株,并采用pH-溶氧监控策略进行工程菌Pichia pastoris X-33/pGAPZα-A-CAD的50 L中试发酵研究。结果表明,本实验成功实现了抗菌肽CAD在毕赤酵母Pichiapastoris X-33中的组成型表达pGAPZα-A,Tricine-SDS-PAGE分析显示在4.0 kDa处有明显的目的条带,工程菌经50 L发酵罐培养48 h后收获的上清液,100℃热处理10 min后,对金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌ATCC25922等均有明显的抑杀作用。抗菌肽的组成型表达方法在本研究中得到了成功应用,中试研究为以后的规模化生产和应用奠定了基础。     

抗菌肽酵母表达系统的研究进展

抗菌肽是生物体内一类具生物活性的小分子多肽,由于从天然资源中提取成本高,得率低且化学合成价格昂贵,利用基因工程技术生产抗菌肽具有重要意义.酵母表达系统具有表达量高,利于产物分离纯化等优点,利用酵母表达抗菌肽具有很好的前景.本文综述了毕赤酵母表达系统表达抗菌肽的最新进展.     

抗菌肽替代抗生素对肉鸭生产性能及血清代谢激素水平的影响

肉鸭日粮按三个水平分别添加蚕抗菌肽AD-酵母制剂，与加金霉素的正对照及用基础日粮的负对照二组进行对比试验，结果显示：中、高抗菌肽组增重效果与金霉素组一样显著，整体生产性能以高抗菌肽组最好，1～14日龄饲养效果优于15～49日龄；三个抗菌肽试验组的胰岛素样生长因子IGF—Ⅰ水平与金霉素组一样出现显著升高，甲状腺素水平的变化与金霉素组相反，其中T3显著升高、T4降低。