辣蓼总黄酮的毒理学初步研究

试验通过观察辣蓼总黄酮对小鼠的急性毒性和亚慢性毒性作用,开展安全性评价,为该药物后期研发和应用提供剂量支持。分别选取雌、雄各半的昆明系小鼠进行试验,设不同剂量的辣蓼总黄酮组和空白对照组。结果显示:小鼠对辣蓼总黄酮的最大耐受剂量大于5 g/(kg·BW);小鼠的亚慢性毒性试验期间,各试验组小鼠体重、增重率和饲料利用率与空白对照组相比均无显著差异(P0.05);小鼠个别血清生化指标与空白对照组有显著差异(P0.05),但均在正常值范围内;组织病理学观察未见明显病理性损害。结果表明,辣蓼总黄酮对小鼠无急性毒性作用,长期连续用药也无亚慢性毒性作用,安全性较高。     

蕨麻多糖对小鼠免疫功能的影响

用环磷酰胺作为免疫抑制剂小鼠腹腔注射(100mg/kg)建立免疫抑制模型,观察不同剂量蕨麻多糖(50、100、200、400mg/kg)对小鼠脾脏指数、胸腺指数及血清溶菌酶活力的影响.结果显示,蕨麻多糖能明显提高正常小鼠脾脏指数、胸腺指数及免疫抑制小鼠脾脏指数;增强正常小鼠和免疫抑制小鼠血清溶菌酶活力,尤其在免疫抑制状态下,增强作用更明显.表明该多糖可对抗Cy所致的免疫抑制,明显地增强小鼠免疫功能.     

辣蓼黄酮正丁醇部分对脂多糖诱导内毒素血症小鼠的保护作用

为探讨辣蓼黄酮正丁醇部分(FNB)对内毒素血症小鼠炎性细胞因子的影响,采用酶解-超声偶联法提取辣蓼全草中的总黄酮,结合大孔树脂纯化富集获得辣蓼正丁醇部分黄酮,通过不同剂量的FNB作用于脂多糖(LPS)刺激所诱导的小鼠内毒素血症模型,测定丙二醛(MDA)、MPO、T-AOC、T-SOD、GSHPX、GSH、LZM、ACP及炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素(IFN,IFN-α、IFN-γ)、白介素-2(IL-2)水平。结果表明,FNB能通过提升小鼠肝脏的抗氧化防御酶促体系的活性,减少LPS刺激所诱导的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的释放,降低肺部TNF-α、IFN-α、IFN-γ以及IL-2mRNA的表达水平。说明一定浓度的FNB能减轻LPS诱导的内毒素血症对小鼠的损伤,改善生存率。     

鬼臼多糖对免疫功能低下小鼠自由基产生酶活性的影响

采用环磷酰胺腹腔注射(50mg/kg)小鼠建立免疫抑制模型,观察鬼臼多糖(PEP)不同剂量(50,100,200mg/kg和400mg/kg)配合环磷酰胺应用后,对小鼠脾脏中黄嘌呤氧化酶(XOD)、髓过氧化物酶(MPO)及一氧化氮合成酶(NOS)水平的影响。结果表明,PEP能显著降低免疫抑制小鼠脾脏XOD、MPO的活性;对脾脏总NOS活性无显著影响,但400mg/kg多糖可降低小鼠脾脏诱导型NOS活性,提示PEP可通过降低免疫抑制小鼠体内自由基产生酶水平而起到抗氧化作用。     

辣蓼上调cGAS-STING信号通路改善鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的脾脏免疫损伤

为了探究辣蓼水提液对鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠脾脏免疫损伤的保护作用及其潜在机制，试验将48只健康、体重接近的SPF级雌性Balb/c小鼠随机分为6组，分别为空白对照组、模型组、阳性药物组及辣蓼高、中、低剂量组，每组8只。空白对照组和模型组灌胃PBS,阳性药物组每天按体重灌胃给予庆大霉素20 mg/kg,辣蓼高、中、低剂量组分别灌胃给予20,10,5 g/kg的辣蓼水提液，小鼠给药体积为按体重0.2 mL/10 g,连续给药8 d。给药2 d后，除空白对照组外其余组小鼠均灌胃LD₅₀(5×10⁴ cfu/mL)鼠伤寒沙门氏菌0.2 mL,末次给药后禁食不禁水12 h,麻醉小鼠安乐死后取脾脏组织进行组织病理学检查、鼠伤寒沙门氏菌负荷量测定，以及α-干扰素(IFN-α)、β-干扰素(IFN-β)、γ-干扰素(IFN-γ)、干扰素调节因子3(IRF3)、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)、TANK结合激酶1(TBK1)、磷酸化TANK结合激酶1(p-TBK1)、干扰素刺激基因(STING)与环腺苷酸鸟苷酸合成酶(cGAS)蛋白相对表达量的检测。结果...     

蚯蚓肽对小鼠非特异性免疫功能的影响

通过用不同剂量的蚯蚓肽(EP)对健康和免疫抑制小鼠灌胃15 d,观察EP对小鼠淋巴细胞增殖反应,巨噬细胞细胞毒效应以及巨噬细胞和脾细胞产生NO的影响,以探讨EP对小鼠非特异性免疫功能的影响。试验发现0.1,0.5 mg/mL组明显提高淋巴细胞增殖率,增强巨噬细胞细胞毒效应,提高巨噬细胞和脾细胞分泌NO的水平(P<0.0l),0.5 mg/mL明显提高免疫抑制小鼠的免疫功能(P<0.01)。结果表明:一定剂量下,EP具有调节免疫功能、拮抗环磷酰胺引起的免疫抑制的作用。     

南五味子多糖对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠免疫功能的影响

探讨研究南五味子多糖(KPS)对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠免疫功能的影响。用环磷酰胺腹腔注射建立免疫功能抑制动物模型,以黄芪多糖(APS)为阳性对照。给模型小鼠分别灌胃氯化钠注射液和多糖溶液,连续10 d灌胃多糖的量分别为50、100和150 mg/kg,检测免疫指数、T细胞亚群和细胞因子等免疫指标。结果表明:KPS在50~150 mg/kg能够不同程度提高免疫指数,明显降低免疫抑制小鼠CD4+/CD8+值(P0.05),提高小鼠白介素-2(IL-2)和小鼠干扰素-γ(INF-γ)含量,降低小鼠白介素-4(IL-4)水平,且具有剂量依赖型。KPS可提高免疫抑制小鼠免疫功能。     

刺五加多糖纳米乳对免疫抑制小鼠的免疫增强作用

为给兽医临床提供一种有效的免疫增强剂，本试验通过建立小鼠免疫抑制模型，检测其免疫器官指数、脾细胞增殖活性、单核巨噬细胞的吞噬活性、自然杀伤(NK)细胞活性等来研究刺五加多糖纳米乳(ASPS-NE)对免疫抑制小鼠的免疫增强作用。结果显示：与CTX模型组比较，ASPS-NE高、中、低剂量组[100、50 mg/(kg·bw)和25 mg/(kg·bw)]均可不同程度提高免疫抑制小鼠的脏器指数，极显著增强刀豆球蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖活性，增强单核巨噬细胞的吞噬指数，提高NK细胞的杀伤率(P<0.01),尤其以ASPS-NE中剂量效果最佳(P<0.01)。结果表明ASPS-NE可增强免疫抑制小鼠的免疫力，发挥免疫增强作用。     

辣蓼黄酮提取物的急性毒性和亚慢性毒性研究

【目的】 明确辣蓼黄酮提取物的毒理作用,评价其安全性。【方法】 在急性毒性试验预试验中,选取20只健康SPF级昆明系小鼠,随机分为6组,对照组(0 g/kg BW)和辣蓼黄酮提取物1~5组(灌胃给予辣蓼黄酮提取物20、10、5、2.5和1.25 g/kg BW),连续观察7 d,记录小鼠中毒和死亡情况。在急性毒性试验的最大给药量试验中,对20只小鼠分3次在24 h内按照30 g/kg BW灌胃给药,观察其生理状态,中毒情况及有无死亡情况,于试验第8天剖检观察其脏器有无异常情况。在亚慢性毒性试验中,取80只健康SPF级SD大鼠,随机分为4组,对照组(0 g/kg BW)和辣蓼黄酮高、中、低剂量组(分别灌胃给予辣蓼黄酮提取物20、10和5 g/kg BW),每组20只大鼠(雌、雄各半),喂养30 d,记录其体重、摄食量和饮水量。停药第7天,采血进行血常规和血液生化指标检查,计算其脏器指数,并进行组织病理学检查。【结果】 急性毒性试验各剂量组小鼠均未出现死亡情况,无法得出辣蓼黄酮提取物的半数致死量(LD₅₀),小鼠对辣蓼黄酮提取物的最大耐受量为30 g/kg BW,说明辣蓼黄酮提取物安全无急性毒性。亚慢性毒性试验中,各给药组大鼠体重、饮水量、采食量及脏器系数与对照组虽有差异,但在正常范围内。给药30 d血常规指标中,与对照组相比,高剂量组大鼠白细胞及淋巴细胞显著下降(P<0.05),中性粒细胞显著上升(P<0.05);中剂量组大鼠白细胞显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01);其余各组之间无显著差异(P>0.05)。血液生化指标中,与对照组相比,高剂量组大鼠甘油三酯(TG)水平显著上升(P<0.05),尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、总胆红素(TBIL)水平显著下降(P<0.05);中剂量组大鼠BUN水平显著下降(P<0.05),CREA水平显著上升(P<0.05),低剂量组大鼠谷丙转氨酶(ALT)、TG水平显著上升(P<0.05),BUN水平显著下降(P<0.05),其余各组间均无显著差异(P>0.05)。剖检和病理学检查未见明显异常变化,说明辣蓼黄酮提取物安全无亚慢性毒性。【结论】 5 g/kg BW及以下的辣蓼黄酮提取物无毒副作用,安全性好。     

固元颗粒对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

为了深入探讨固元颗粒对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠的脏器指数、脾淋巴细胞体外增殖及白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)、γ干扰素(INF-γ)分泌水平的影响,试验将100只雄性昆明小鼠随机分为5组(空白对照组,免疫抑制组,固元颗粒低剂量组、中剂量组、高剂量组),每组20只。试验期总计35 d,除空白对照组外,其余4组小鼠每日按体重30 mg/kg腹腔注射环磷酰胺0.4 mL,连续4 d,以建立免疫抑制模型;免疫抑制模型建好后,固元颗粒低、中、高剂量组分别为按体重25,50,100 mg/kg灌胃固元颗粒溶液0.6 mL,空白对照组、免疫抑制组给予等体积生理盐水,连续30 d。灌胃固元颗粒溶液1,8,15天,每组选5只小鼠眼眶采血,分别测定小鼠血清中IL-2、IL-6、IFN-γ含量。试验第35天,分别测定体重和脏器指数(胸腺、脾脏)、脾淋巴细胞体外增殖指数。结果表明:不同剂量的固元颗粒能不同程度提高免疫抑制小鼠的体重、促进脾淋巴细胞体外增殖,固元颗粒中、高剂量组可显著提高小鼠的脾脏指数和胸腺指数(P0.05)。随着灌胃固元颗粒溶液时间延长,固元颗粒低剂量组、中剂量组、高剂量组血清中IL-2、IL-6、IFN-γ含量逐渐升高;灌胃固元颗粒溶液15天,IL-2、IFN-γ含量接近正常小鼠水平,固元颗粒中剂量组(50 mg/kg)效果最为明显,与免疫抑制组比较均差异极显著(P0.01)。说明固元颗粒可显著缓解免疫抑制小鼠的免疫抑制程度。     

辣蓼黄酮中芦丁、槲皮素与槲皮苷的含量分析

前期研究中运用大孔吸附树脂法对辣蓼黄酮进行分离纯化并对其抗氧化活性进行初步试验,获得令人满意的结果。为了获得质量稳定的辣蓼黄酮,为工业化生产中的质量控制提供实验依据,通过高效液相色谱法,以芦丁、槲皮素与槲皮苷为对照品对辣蓼总黄酮进行目标成分含量测定。结果表明,运用高效液相色谱法测定辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(FEA)中芦丁、槲皮素与槲皮苷的含量分别为281.97、160.98、83.31 mg/g,辣蓼黄酮正丁醇部分(FNB)中芦丁、槲皮素与槲皮苷的含量分别为150.33、147.51、73.82 mg/g。该方法简单、准确、灵敏,精密度、重复性好,可作为辣蓼黄酮中芦丁、槲皮素与槲皮苷含量分析的参考方法。     

泰山梧桐花多糖对免疫抑制小鼠的免疫调理作用

采用5种不同剂量的环磷酰胺（CTX）皮下注射小鼠,筛选能造成显著免疫抑制的CTX最佳剂量,建立小鼠免疫抑制模型。通过水提醇沉法提取泰山梧桐花多糖,将不同剂量的泰山梧桐花多糖加入到新城疫活疫苗中,制备含泰山梧桐花多糖的新城疫弱毒苗,注射免疫抑制小鼠,来探讨泰山梧桐花多糖对免疫抑制小鼠的免疫调理作用。结果显示,泰山梧桐花多糖能提高免疫抑制小鼠的抗体水平、淋巴细胞比率、淋巴细胞数及血液淋巴细胞转化率,其中400mg/L剂量组（I组）可在第3天解除CTX导致的小鼠免疫抑制;由此说明泰山梧桐花多糖对小鼠具有免疫增强作用。该研究为泰山梧桐花多糖开发成为免疫增强剂和免疫佐剂提供了理论依据。     

响应面法优化琼辣蓼总黄酮提取工艺及其抗氧化活性研究

为优化海南辣蓼总黄酮的提取工艺条件并探讨总黄酮体外抗氧化活性,采用热回流提取海南辣蓼总黄酮,以提取液中总黄酮的百分含量为考察指标,在单因素试验基础上,运用Box-Behnken 设计(BBD) 对影响提取工艺的因素液料比、提取时间及乙醇体积分数进行分析,应用响应面法优选最佳提取工艺;采用清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH) 自由基和羟基自由基的方法,对最佳工艺所得总黄酮进行抗氧化活性评价。结果表明：海南辣蓼总黄酮的最佳提取工艺条件为：液料比1∶15、提取时间60 min、乙醇体积分数48%,在此条件下总黄酮提取率为10.101%。总黄酮对羟基自由基和DPPH自由基的半数抑制浓度(IC50)分别为2.95 mg/mL和0.46 mg/mL。该方法优选的工艺合理,操作简便,试验周期短,且提取的海南辣蓼总黄酮具有良好的抗氧化活性,为琼辣蓼的深入开发利用提供了实验依据。     

牛磺鹅去氧胆酸对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

本试验旨在研究牛磺鹅去氧胆酸（taurochenodeoxycholic acid,TCDCA）对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响。给小鼠腹腔注射环磷酰胺(CTX,50 mg/kg),建立免疫功能抑制模型,灌服TCDCA（100 mg/（kg·d））,共灌服7 d。采用重量法和分光光度法分别测定TCDCA对免疫器官指数及对血清中抗体含量、单核—巨噬细胞吞噬功能和溶菌酶含量的影响。〖JP2〗TCDCA对免疫抑制小鼠胸腺指数、脾指数和血清溶血素水平无显著性影响;TCDCA可显著提高免疫抑制小鼠单核—巨噬细胞吞噬功能和血清中溶菌酶含量。TCDCA能够增强CTX免疫抑制小鼠的免疫功能,对免疫失衡机体具有一定的保护作用。     

紫外-可见分光光度法测定枫蓼水煎液中总黄酮含量

本试验旨在建立测定枫蓼水煎液中总黄酮含量的紫外-可见分光光度法。以芦丁为对照品,用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为显色体系,采用紫外-可见分光光度法于510 nm波长处测定其吸光度。结果表明总黄酮浓度在0.008～0.048 mg/mL范围内,芦丁浓度与吸光度的线性关系良好。总黄酮加样平均回收率为100.97%,RSD=1.66%。本试验结果表明所用的方法简便、准确,可用于牛耳枫、辣蓼药材的半成品及成品中总黄酮含量的检测。     

芒柄花素对免疫抑制小鼠免疫功能影响的研究

本研究旨在探讨芒柄花素对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。将100只昆明种小鼠随机分为5组：空白对照组、免疫抑制组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组,每组20只（雌雄各半）,采用灌胃法给药。试验期28 d,试验1~7 d,对照组小鼠灌胃0.6 mL生理盐水,其余各组小鼠均灌胃0.6 mL 40 μg/g体重环磷酰胺（CTX）;试验8~21 d,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小鼠分别灌胃0.6 mL 50、150、250 μg/g体重芒柄花素溶液,空白对照组与免疫抑制组灌胃0.6 mL生理盐水。试验结束后,测定小鼠脏器指数（胸腺、脾脏）、血清溶血素及IL-2、IL-4含量。采用免疫组化法检测小鼠胸腺、脾脏CD3和CD20阳性淋巴细胞,肝脏CD68阳性KCs细胞。结果表明,环磷酰胺可成功复制小鼠免疫抑制模型。不同剂量芒柄花素均能提高免疫抑制小鼠胸腺和脾脏指数、血清溶血素及血清IL-2和IL-4含量,尤其当芒柄花素灌胃剂量为150 μg/g体重时效果最为明显,与免疫抑制组差异极显著（P<0.01）。免疫组化分析结果显示,不同剂量芒柄花素均可提高免疫抑制小鼠胸腺和脾脏CD3阳性T淋巴细胞及CD20阳性B淋巴细胞数量,并促使肝脏CD68阳性KCs细胞增殖,也以试验Ⅱ组效果最显著,与免疫抑制组差异极显著（P<0.01）。综上,芒柄花素可促进小鼠相关淋巴细胞增殖和细胞因子的释放,进而增强机体体液免疫和细胞免疫功能,并可明显促进肝脏固有吞噬细胞KCs增殖。     

牛磺酸复合添加剂对免疫低下小鼠免疫功能的影响

【目的】研究在基础饲粮中添加牛磺酸复合添加剂对免疫低下模型小鼠免疫功能的影响,旨在为提高动物免疫机能的营养调控措施提供一定的理论依据。【方法】将80只小鼠随机均分为4组：C和M组小鼠饲喂基础饲粮,H和MH组小鼠给予含有8.8%的牛磺酸复合添加剂的基础饲粮,试验期51 d。M和MH组小鼠于试验第31天起连续4 d腹腔注射70 μg/g BW环磷酰胺（CTX）,制备免疫低下模型,其余小鼠腹腔注射等体积生理盐水。统计整个试验期的日采食量,每周称量小鼠体重,并计算平均日采食量（ADFI）和平均日增重（ADG）。试验结束后,采集小鼠血清及胸腺和脾脏,检测小鼠免疫器官指数、细胞免疫、体液免疫、非特异性免疫功能及血清中细胞因子和免疫球蛋白水平的变化。【结果】与C组相比,M组小鼠ADFI、耳肿胀度、血清溶血素水平、免疫球蛋白G （IgG）水平显著降低（P<0.05）,ADG、胸腺指数、脾淋巴细胞增殖能力、抗体生成细胞量、腹腔巨噬细胞吞噬能力、白介素6（IL-6）和免疫球蛋白A （IgA）水平极显著降低（P<0.01）,脾脏指数极显著升高（P<0.01）;碳廓清指数和免疫球蛋白M （IgM）水平无显著差异（P>0.05）;与M组相比,MH组小鼠的ADFI、ADG、胸腺指数、脾淋巴细胞增殖能力、耳肿胀度和IgM水平均显著提高（P<0.05）,血清溶血素水平、抗体生成细胞量、腹腔巨噬细胞吞噬能力、IL-6和IgA水平均极显著提高（P<0.01）,脾脏指数显著降低（P<0.05）,碳廓清指数和IgG水平无显著差异（P>0.05）。【结论】该牛磺酸复合添加剂能够改善由CTX所致免疫低下小鼠的固有免疫和适应免疫,改善细胞因子和免疫球蛋白的水平,起到增强小鼠免疫力的作用。     

田七总皂苷的制备及其免疫活性试验

用700mL/L乙醇回流提取、大孔吸附树脂分离纯化得到田七总皂苷(PNS),进行薄层色谱鉴别和含量测定。为评价PNS的免疫调节作用,用环磷酰胺(CTX)为免疫抑制剂建立小鼠免疫抑制模型,分别以4种剂量的PNS(5、25、50、75mg/kg)腹腔注射给药,测定胸腺和脾脏指数以及血清中IL-2、IFN-γ和TNF-α水平,并从组织形态上观察胸腺与脾脏的结构变化。结果表明,PNS能使小鼠胸腺和脾脏指数有所提高,但无统计学意义(P>0.05);25mg/kg剂量能显著升高血清中IFN-γ和TNF-α水平(P<0.05),50mg/kg剂量能显著升高血清中TNF-α水平(P<0.05);PNS处理组能不同程度地对抗模型所致小鼠胸腺和脾脏的萎缩,增加胸腺皮质厚度和细胞数量,增加脾小结大小和淋巴细胞数量,在高剂量组尤为明显。     

4味常见中药对免疫抑制小鼠免疫功能及肠道菌群的影响

试验旨在研究4味中药对免疫抑制小鼠免疫功能和肠道菌群的影响,选取70只6周龄雌性昆明小鼠(18～20g),随机分为7组,分别为空白对照组、模型组、玉屏风组、乌梅组、蒲公英组、党参组、石榴皮组。采用环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)构建免疫抑制病理模型,从喂药的第3天起,2～7组以75mg/kg体重腹腔注射Cy,每隔1天注射1次,共注射4次,注射期间正常给药,模型组灌胃0.9%生理盐水,直至停止注射Cy的第2天,共给药7d。检测4味中药对免疫抑制小鼠体重、脾脏和胸腺指数、血液指标、分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、IgG及肠道菌群的影响。结果显示,与模型组相比,党参、乌梅、蒲公英、石榴皮可显著提高免疫抑制小鼠体重(P<0.05),其中乌梅组效果最好;显著提高免疫抑制小鼠免疫器官指数(P<0.05),但不能达到正常水平,其中蒲公英组脾脏指数最高;各中药组可提高白细胞数目(WBC)、显著提高红细胞数目(RBC)(P<0.05),但不能达到正常水平;各中药组可显著提高免疫球蛋白数量(P<0.05),党参组sIgA、IgG显著高于空白对照组(P<0.05),且和玉屏风组差异不显著(P>0.05);各中药组可显著降低大肠杆菌数量(P<0.05),显著增加双歧杆菌和乳酸杆菌数量(P<0.05),提高免疫抑制小鼠肠道菌群的丰富性和多样性,其中党参和蒲公英组小鼠肠道菌群的丰富度和多样性较好。综上说述,乌梅、蒲公英、石榴皮、党参均能够颉颃Cy对小鼠体重、免疫功能及肠道菌群的影响,可用于免疫增强类药物的开发。