桂林喀斯特地貌分布区苏云金芽孢杆菌菌株的分离鉴定

从桂林喀斯特地貌分布区采集了165份天然土壤样品,从中分离出10株苏云金芽孢杆菌。光学显微镜观察发现有菱形、球形、不规则等晶体类型。通过核酸电泳比对其大质粒DNA的图谱来区分菌株的类型,发现该批菌株有良好的多样性。对这10株菌进行cry1、cry11、cry2、cry3、cry4、cry5、cry6、cry7、cry8、cry9、cry10类基因的PCR-RFLP鉴定,在8株菌中分别发现含有cry1、cry11、cry2、cry3等基因类型,而G4、G6菌株中不含有已知基因。SDS-PAGE分析了10株野生菌株的杀虫晶体蛋白表达谱,发现有10株表达约130kD蛋白,有3株既表达130kD蛋白又表达60kD蛋白。对大猿叶甲、小菜蛾进行了杀虫活性测定,发现了一株对大猿叶甲具有较高毒力的菌株G8,其LC50为48.2μg/ml,置信区间为9.6～1.4ml;有6株菌株对小菜蛾有高活性。     

几株高效苏云金杆菌菌株对玉米螟,棉铃虫,粘虫和黄地老虎的毒力…

本文以玉米螟、棉铃虫、粘虫和黄地老虎为供试昆虫，对筛选出的７株高效苏云金杆菌菌株的孢晶制剂进行了毒力测定。以ＬＣ５０为衡量各菌株的毒效指标，属血清型Ｈ６的“Ｇ０２”菌株对上述４种供试昆虫的毒力最高，属血清型Ｈ３ａ３ｂ的“８０－１”菌株对棉铃虫和粘虫的毒力也高于“ＨＤ－１”菌株。这一研究结果为今后高效的苏云金杆菌制剂及生产菌株的轮换提供了后备菌株。     

四株对小地老虎有活性的苏云金芽胞杆菌的毒力评价

本文对4株苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis（Bt）的杀虫基因类型、杀虫蛋白表达类型、蛋白表达量以及杀虫活性进行了初步的评价分析。菌株PS9-D12和PS9-C12的基因类型与蛋白表达类型丰富,且其杀虫蛋白表达量是对照菌株HD-1的1.7倍。在相同培养条件下,制备菌株胞晶混合冻干粉对小地老虎Agrotis ypsilon的生测结果显示,菌株HD-1、PS9-D12、PS9-C12、PS9-D11和PS9-H9的LC50分别为0.71、0.19、0.14、0.24和1.16 mg·g^-1,菌株PS9-D12和PS9-C12的杀虫活性显著高于菌株HD-1（P〈0.05）;此4株菌株对小菜蛾Plutella xylostella幼虫的校正死亡率均大于78%,它们对甜菜夜蛾Spodoptera exigua幼虫的活性均高于菌株HD-1;而对大猿叶甲Colaphellus bowringi幼虫均无活性。可见菌株PS9-D12和PS9-C12比商业化生产的HD-1有更好的杀虫活性,可作为Bt杀虫剂的候选材料。     

几株高效苏云金杆菌菌株对玉米螟、棉铃虫、粘虫和黄地老虎的毒力测定

本文以玉米螟、棉铃虫、粘虫和黄地老虎为供试昆虫，对筛选出的７株高效苏云金杆菌菌株的孢晶制剂进行了毒力测定。以ＬＣ５０为衡量各菌株的毒效指标，属血清型Ｈ６的“Ｇ０２”菌株对上述４种供试昆虫的毒力最高，属血清型Ｈ３ａ３ｂ的“８０－１”菌株对棉铃虫和粘虫的毒力也高于“ＨＤ－１”菌株。这一研究结果为今后生产高效的苏云金杆菌制剂及生产菌株的轮换提供了后备菌株     

苏云金芽孢杆菌BtC008杀虫晶体蛋白基因鉴定、克隆及杀虫活性分析

苏云金芽孢杆菌BtC008对棉铃虫、小菜蛾和甜菜夜蛾等鳞翅目害虫具有高毒力。本文分析了其杀虫基因类型包括cry1Ab、cry1Ca、cry1Ia、cry2Ab和一种新的cry1类基因,SDS-PAGE分析其至少2种cry1类基因获得了表达,在分子水平说明了该菌株高毒力的原因。在此基础上克隆了1种cry1Ab类杀虫晶体蛋白(insecticidalcrystalproteins,ICPs)基因,并被Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会命名为cry1Ab20。序列分析显示该基因所编码蛋白与已知的Cry1Ab13有1个氨基酸不同。将cry1Ab基因毒性片段(1.95kb)插入表达载体pET-21b,转化EscherichiacoliRosetta(DE3)菌株,表达的包涵体蛋白对小菜蛾和棉铃虫幼虫具有杀虫活性,LC50分别为100.74μg/mL和29.87μg/mL,进一步明确了Cry1Ab20蛋白的杀虫活性区。     

苏云金杆菌（Bt）芽孢的杀虫作用

本文简要综述了苏云金杆菌（Ｂｔ）芽孢的杀虫作用。讨论了Ｂｔ芽孢和晶体之间的增效作用，芽孢孢衣蛋白和晶体蛋白的同源性，芽孢孢衣蛋白的杀虫活性以及芽孢杀虫的可能机制。     

对夜蛾科幼虫高毒力的苏云金芽孢杆菌菌株及其晶体蛋白特性

本文对自德国土壤中分离的８株苏云金芽孢杆菌进行毒力测定和晶体蛋白特性的研究。生物测定结果表明，８株Ｂｔ中除Ｓ２１－１、Ｓ２１－１３对甜菜夜蛾无毒性外，对夜蛾科的４种供试昆虫均有很高的毒效，４８小时校正死亡率高达８０％～１００％；扫描电镜观察和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ晶体蛋白电泳结果可知，Ｓ１１－６和Ｓ２１－１３２个菌株只有一种菱形晶体和一条相应的１３５ＫＤａ主带，其余６个菌株均有菱形和方形两种晶体，以及两条相应的１３５ＫＤａ和６５ＫＤａ主带。另对晶体的特性与其毒力的关系进行了讨论。     

苏云金芽孢杆菌HBF-1芽孢对棉铃虫幼虫生长发育及酶活的影响

苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株的芽孢对初孵棉铃虫幼虫无明显杀伤作用,但可以直接影响其正常的生长发育,使幼虫前期体重增加;而后期发育迟缓,历期延长,成虫产卵量明显减少。通过光学显微镜观察发现,用含有HBF-1芽孢的饲料饲喂棉铃虫幼虫,幼虫中肠肠壁细胞遭到破坏;随着虫龄的增大,微绒毛逐渐脱落,有的部位细胞壁破裂。酶活的测定结果表明:初孵棉铃虫幼虫取食含有HBF-1芽孢(100μg/g)的饲料后,幼虫体内的乙酰胆碱酯酶、羧酸酯酶和谷胱甘肽-S-转移酶的活性发生了变化。     

北京植物园苏云金芽胞杆菌菌株的分离鉴定

[目的]从北京植物园采集的土壤样品中分离高毒力的苏云金芽胞杆菌.[方法]采用温度法筛选Bt菌株,比对大质粒DNA图谱,区分不同类型的Bt菌株,PCR-RFLP方法对cry1～cry40类基因型进行鉴定,SDS-PAGE分析杀虫晶体蛋白,测定Bt分离株对大猿叶甲、小菜蛾幼虫的杀虫活性,筛选出高毒力的菌株.[结果]从149份土壤样品中分离出147株Bt,分为12种类型,含有菱形、方形、球形和不规则等晶体类型;6株菌中分别含有fry1Aa、cry1Ab、cry1Ac、cy1Ah、cry1Ba、cry1Be、cry1Ia、cry1La、cry2Ab和cry7Aa等基因类型,其余6株中不含有已知基因.有9株表达约130 ku蛋白,1株表达约70 ku蛋白,2株表达约150 ku蛋白,有3株既表达130 ku蛋白又表达60 ku蛋白;发现一株对大猿叶甲具有较高毒力的菌株ZWY-7,1株对小菜蛾有高毒力的菌株ZWY-9,2株菌都没有检测到已知基因型.[结论]北京植物园中Bt分布广泛,类型多样,其中发现两株高毒力的菌株,有望获得新的杀虫基因.     

苏云金杆菌(Bt)芽孢的杀虫作用

本文简要综述了苏云金杆菌(Bt)芽孢的杀虫作用。讨论了Bt芽孢和晶体之间的增效作用,芽孢孢衣蛋白和晶体蛋白的同源性,芽孢孢衣蛋白的杀虫活性以及芽孢杀虫的可能机制。     

The use of Bacillus thuringiensis to control two lepidopterous insect pests (Agrotis ypsilon and Spodoptera littoralis)

An area of 50 feddans cultivated with soybeans was treated withBacillus thuringiensis (B.t.) baits againstAgrotis ypsilon and 60 feddans were sprayed withB.t. spray againstSpodoptera littoralis. WhenB.t. baits were used, the percentage of kill ofA. ypsilon reached 96.1–96.4% compared to 97.4–98% kill on using hostathion baits. WhenB.t. was sprayed againstS. littoralis, a percentage of larval kill 88.3% was obtained. This increased to 97.3% after the second application. On the other hand, the precentage of kill reached 96.8% when lannate was sprayed once. The average yield was 1.54 tons/fed. whenB.t. was sprayed twice againstS. littoralis and 1.42 tons/fed. when sprayed once. Areas, treated with lannate gave 1.44 tons/fed., while in the untreated area the yield was comparatively low being 0.83 tons/fed.Mith 4 tables     

四川盆地部分地区土壤中苏云金芽胞杆菌分离与cry基因鉴定*

［目的］ 对四川盆地土壤中Bt资源进行研究,了解其分布特点,为我国苏云金芽胞杆菌的储备奠定基础。［方法］ 从四川盆地5个地区采集土样,分离苏云金芽胞杆菌野生菌株。利用PCR RFLP及SDS PAGE方法对Bt分离株进行基因型鉴定和蛋白分析,并对其室内杀虫活性进行初步测定。［结果］ 从207份土样中获得26株苏云金芽胞杆菌野生菌株,出菌率为12.56%。油镜观察可看到球形、方形、菱形及不规则形的伴胞晶体。在21株Bt分离株中检测到cry1、cry1I、cry2、cry9四类基因,且多数菌株都是同时含有多个基因类型,有5株Bt分离株未发现已知基因;SDS-PAGE显示有9株菌株只表达了130 ku的蛋白, 2株只表达了124 ku的蛋白,2株只表达了45 ku的蛋白,6株同时表达了130 ku和60 ku的蛋白, 4株同时表达了124 ku和60 ku的蛋白, 2株同时表达了135 ku和60 ku的蛋白, 1株同时表达了130、90 ku及75 ku的蛋白。毒力测定结果表明：9株菌株对小菜蛾具有高毒力,2株对大猿叶虫有一定的杀虫活性。［结论］四川盆地土壤中Bt资源多样性丰富,其中有2株有一定的研究前景。     

对蛴螬有活性的苏云金芽胞杆菌菌株的筛选与基因鉴定

为了寻找对地下害虫蛴螬有杀虫活性的基因资源,以实验室分离的500株苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株为材料,通过杀虫活性测定筛选到43株对蛴螬有活性的菌株,其中菌株C9对3种供试昆虫均有活性.光学及扫描电镜检测发现这些菌株均释放球形晶体.SDS-PAGE分析显示这些菌株均表达约130kD的蛋白.采用3种方法分析43株菌株的杀虫晶体蛋白基因类型,结果显示:其中21株只含cry8Ca;13株同时含cry8Ca和cry8Ea基因;QC4等8株菌株只能用引物HRM8F/HRM8R获得高度保守区域约110bp的扩增产物,说明这些基因的5'端序列与已知基因差异较大.测序结果经BLAST分析显示,产物序列同cry8基因的相似性均在98%以上,但其全长基因类型还需要其它方法确定.菌株QCM的PCR-RFLF图谱不同于已发现的cry8基因,推测其中含有新基因.     

苏云金芽胞杆菌分离过程中无晶体芽胞杆菌的分析

本研究选择了在苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)分离过程中发现的与Bt芽胞相似、没有伴胞晶体的8株芽胞杆菌,对其种属、质粒等生物学特性和杀虫活性进行了初步研究.对分离菌株所产芽胞进行形态观察及质粒图谱分析,发现其与Bt相似;但肽指纹图谱分析和16S rDNA聚类研究表明所分离菌株与蜡样芽胞杆菌B.cereus(Bc)匹配最高;杀虫活性测定表明这8株菌对猿叶甲Colaphellus bowringi幼虫均无毒杀作用,而15-3、W23-1和W25-3 3个菌株及其培养上清液对小菜蛾Plutella xylostella幼虫有一定的杀虫活性,说明它们能产生活性物质.这些结果说明在Bt菌株的分离过程中要对无晶体菌株加以重视,其含有的活性物质具有潜在的研究和利用价值.     

Characterisation and toxicity of Bacillus thuringiensis strains from hazelnut pests and fields

BACKGROUND: In order to find and identify more toxic insecticidal Bacillus thuringiensis Berliner (Bt) strains, a survey was carried out of B. thuringiensis isolate pests belonging to Coleoptera, Lepidoptera and Diptera and from soils in hazelnut fields. Of 16 isolates having Bacillus cereus‐B. thuringiensis morphology, eight were classified as B. thuringiensis because of the production of parasporal δ‐endotoxin crystals. RESULTS: In this study, eight isolates of B. thuringiensis from hazelnut pests (isolates Bn1, Mm2, Mnd and Xd3) and from hazelnut soils (isolates 6, 27, 40 and 46) have been characterised in detail. These isolates were compared with reference strains by electron microscopy, SDS‐PAGE analysis, cry gene content, serological test and insecticidal activity. CONCLUSION: Results indicate that Bn1 and MnD are B. thuringiensis subsp. kurstaki, and Mm2 and Xd3 are B. thuringiensis subsp. tenebrionis. In addition, isolate 6 is B. thuringiensis subsp. israelensis, isolates 27 and 46 are B. thuringiensis subsp. kumamotoensis and isolate 40 is B. thuringiensis subsp. indiana. The four B. thuringiensis isolates from hazelnut pests may be valuable as biological control agents against coleopteran and lepidopteran insects. Copyright © 2009 Society of Chemical Industry     

从土壤中高效分离苏云金杆菌的方法

在醋酸钠分离方法的基础上添加抗生素,能显著提高从土壤中分离苏云金杆菌的效率。当青霉素钠盐和硫酸庆大霉素的浓度分别达到４００μｇ／ｍｌ时,除地衣芽孢杆菌,短小芽孢杆菌和日本甲虫芽孢杆菌有产生长外,其它９种杂菌均不能生长。对２９个Ｂｔ亚种的生长抑制试验结果表明,仅４业种有轻度至中度的生长抑制,但仍能形成孢晶。其它各亚种均能正常生长和形成孢晶。醋酸钠－抗生素方法的可操作浓度为每克土壤稀土２０倍,较醋酸钠     

具除草活性放线菌的分离和形态学鉴定

从土壤中分离得到17株放线菌,其中JL27菌株的发酵液上清液对反枝苋萌发抑制率达90％,对苘麻萌发抑制率达96．7％;JL12菌株的发酵液上清液对反枝苋萌发抑制率为19．67％,对苘麻萌发抑制率达100％。JL27菌株属链霉菌属金色类群。