检测植物病毒的几种免疫电镜法

免疫电镜一般是指用电镜检测特异抗原抗体反映的技术,可以大致分为二类:一种是用来检测固定或切片材料中的免疫反应;另一种用来检测在特殊材料特别是病毒制剂中的免疫反应。对于后者我们先简单回顾一下早期的几种方法,然后详述二种快速的改进方法。     

种传植物病毒及新检测技术

一、研究种传植物病毒的意义 较早以前,人们认为病毒的种传问题远不及真菌、细菌等病原的种传普遍和重要,在植物病毒病的流行过程中不是主要因素。但隧着植物病毒学和种子病理学发展,及各种检测技术的改进和提高,已报道的种子传带病毒数量,和由种子带毒的植物种类和数量越来越大(见表)。种子传毒逐渐引起了植病、     

应用免疫电镜技术检测植物病毒

免疫电镜技术是将免疫学与超微结构形态学相结合的一种新的检验技术。为了把此项新技术迅速应用到植物病毒检疫上去,我们做了一些工作,简报如下:一、抗血清和抗原制备:烟草坏死病毒(TNV)、烟草花叶病毒(TMV)、番茄不孕病毒(TAV)、苜蓿花叶病毒(AMV)、红三叶草坏死花叶病毒(RCNMV)和白三叶草花叶病毒(WCMV)的抗血清由农牧渔业部植检所血清室提供;马铃薯 x 病毒(PVX)和马铃薯 y 病毒(PVY)的抗血清由中国科学院微生物所提供,抗血清效价     

检测植物病毒的三种血清学方法敏感性的比较

 以芋花叶病毒和豇豆花叶病毒为试验材料,进行了酶联免疫吸附试验,免疫吸附电子显微术和点免疫结合试验检测植物病毒的敏感性的研究。无论是检测感染组织粗汁液还是纯化的病毒,点免疫结合试验均优于酶联免疫吸附试验和免疫吸附电子显微术。在使用羟基吲(口乃木)磷酸盐和氮蓝四唑为碱性磷酸酶的底物时,点免疫结合试验检测纯化的豇豆花叶病毒的可测感度为0.35ng,芋花叶病毒为0.83ng。对三种检测植物病毒的血清学方法进行了比较,并讨论了点免疫结合试验的优点。     

种传植病细菌血清学检测的新趋势

种传植病细菌血清学检测的新趋势赵友福（农业部植物检疫实验所１０００２９）１种传植病细菌的常规血清学检测方法早在１９１８年，血清学试验就已应用于植病细菌。由于血清学方法不仅迅速、可靠，而且应用方便，因此非常适合于诊断种子是否携带病原细菌，特别是大批量种...     

乳胶溶液电镜法在检测植物病毒中的应用

一、介绍乳胶溶液电镜法是植物病毒制剂,特别是未经纯化的粗提液的电镜制样法,在制备电镜样品时,在铜网上加入乳胶稀释液,以提高沾取病毒的数目,提高电镜检测的灵敏度。目前广泛用于检测未纯化植物病毒的电镜制样方法主要是二类——直沾法和免疫电镜法。直沾法出现于五十年代,由于可以简便快速的检测被侵染的植物叶片和粗提液中的     

4种大豆种传病毒多重RT-PCR检测

进境大豆携带的病毒主要有菜豆荚斑驳病毒(BPMV)、烟草环斑病毒(TRSV)、烟草条纹病毒(TSV)和南方菜豆花叶病毒(SBMV)等,均为大豆种传病毒,可随大豆种子实现远距离传播。本研究对这4种大豆病毒的外壳蛋白基因部分序列设计引物,并通过优化引物、模板浓度和扩增参数,在一个体系中成功对4种病毒进行了多重RT-PCR扩增,得到307bp、206bp7、17bp5、18bp共4条特异性条带,建立了能同时检测BPMV、TRSV、TSV和SBMV的多重RT-PCR检测体系。该方法快速、灵敏、简便,同时特异性强,在出入境检疫中具有广泛的应用前景。     

国外关于植物病毒种传问题研究现状

病毒从一株植物到另一株植物的传播有许多途径,如:机械传播、嫁接和芽接,此外,真菌、类菌原质体和其它微生物也可以把植物病毒从一个寄主传到另一个寄主。然而上述这些途径、大多数是关于病毒的水平传播,一般只涉及植物的同一代;但是病毒不仅可以跨过地理的距离在同一代的作物间     

检测豆类种传病毒的一种简易方法

侵染豆科植物的种传病毒大多由种胚或了叶带毒,翌年随种子萌发进入幼苗体内,造成感染,在有条件的地方可用ELISA,RIA法等直接检测种胚或子叶带毒情况。但在缺乏血清,不具备必要设备的地方,不妨一试本方法。 用灭菌水浸泡5-10粒种子,24小时后切取小块子叶,加磷酸缓冲液研磨捣碎,用常规摩擦接种指示植物。剩下大部分带胚种子     

中国甘薯病毒的血清学检测

 作者用4种甘薯病毒抗体(IgG),3种血清学方法(DAS-ELISA、Dot-blot-ELISA和ISEM)对北京,江苏、四川、山东四省(市)的253份甘薯病毒病样品进行了检测。结果表明:上述地区甘薯中普遍存在甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)和甘薯潜隐病毒(SPLV),尚难确定是否存在甘薯轻斑驳病毒(SPMMV)和甘薯花叶菜花叶状病毒(Sweet Potato Caulimo-like Virus,SPCLV)。21%的显症样品同上述4种病毒的抗血清不产生反应,显示我国甘薯上尚存在其它病毒。用Dot blot-ELISA和ISEM检测甘薯病毒比用DAS-ELISA灵敏准确。     

应用免疫电镜技术检测马铃薯病毒

用免疫电镜技术检测田间有病毒症状的马铃薯叶片证实带有马铃薯 Y 病毒,马铃薯 X 病毒,马铃薯 S 病毒和苜蓿花叶病毒。用免疫电镜技术检测田间健株和人工茎尖培养的脱毒苗证明健株和脱毒苗都有部分是带毒的,只是其含毒量很低。用免疫电镜技术检测马铃薯薯块证实,用此方法可检测已萌发的单个小芽以及未萌发的休眠芽。同时证明有病毒病症状的病株,其地下薯块多数是带毒的;另同一薯块,病毒在各个芽眼之间的分布也是不均一的。     

种传病毒的检疫

1 种传病毒在检疫上的重要性种传病毒有两个含义,一是狭义的种传病毒——即只指通过植物种子传带的病毒。另一是广义的种传病毒——即凡是通过繁殖材料(包括种子及无性繁殖的块茎、鳞茎、球茎、块根、接穗、砧木、苗木、试管苗)传播的都包括在内。本文所谈的主要指狭义的种子传播的病毒。     

离体叶片检测种传植物病原细菌技术

寄主离体叶片和子叶用于检测棉花角斑病和大豆疫病,灵敏度分别达6×10~2cfu/ml和2.12×10~1cfu/ml;用于种子直接检测,三天内可得到结果。较之传统的分离方法优势显著,且方法简便适用。     

10种植物病毒的基因芯片检测技术研究

 本研究设计了10种植物病毒和各种对照的探针, 将探针固定在醛基化玻璃片基上制备基因芯片。用常规的Trizol法提取植物总RNA, 根据病毒的外壳蛋白基因或复制酶基因设计特异性引物, 经RT-PCR扩增相应区段并用Cy3-dCTP进行标记。将标记的PCR产物与芯片杂交, 扫描仪对杂交结果扫描, GenePix Pro 4.0软件对杂交图像进行分析。结果表明, 该芯片可以从病毒感染样本中检测到特异性识别信号, 检测灵敏度比RT-PCR高10~100倍, 所以, 基因芯片能对植物病毒作出快速、准确的检测。     

进境豇豆种子携带种传病毒的检测与鉴定

 Imported cowpea seeds were detected with growing test, ELISA assay and RT-PCR method. The ELISA results showed that cowpea seedlings with symptoms reacted positively with antibody against Southern bean mosaic virus (SBMV). The 979 bp of fragment could be amplified from two positive ELISA samples using primers specific for Southern cowpea mosaic virus (SCPMV), and the sequence determination results proved that the pathogen existing in imported cowpea seeds was SCPMV. The positive ELISA results with SBMV antibody could be further confirmed by RT-PCR amplification with specific primers designed to amplify the coat protein gene and 3' noncoding region of SCPMV and SBMV. The RT-PCR method presented here was suitable for molecular identification of SBMV and SCPMV in entry-exit plant quarantine laboratories.     

虫传植物病毒的生物学研究方法

研究植物病毒和病毒病,主要包括生物学特性、理化特性和血清学特性等几个方面。近十多年来,尽管理化和血清学特性的研究技术进展很快,但生物学技术仍然是重要方法,而不能被别的方法代替。兹将我们     

胶体金免疫电镜技术检测和鉴定病汁液中不同形态的植物病毒

 本文报道胶体金免疫电镜技术的建立:铜网捕获病毒后,用其稀释约200倍的同源抗血清修饰处理3~5分钟,羊抗兔IgG-金复合物标记3~5分钟,经磷钨酸负染,电镜下可见病毒粒子周围金颗粒特异性吸附,而背景上非特异性吸附很少。用此技术成功地快速检测和鉴定了病汁液中线状病毒(大麦黄花叶病毒,大麦温和花叶病毒,小麦梭条斑花叶病毒,芜菁花叶病连和马铃薯Y病毒)、棒状病毒(烟草花叶病毒、长叶车前草花叶病毒和土传小麦花叶病毒)以及球状病毒(水稻矮缩病毒、黄瓜花叶病毒和大麦黄矮病毒)。用0.5M PBSpH7.0制备病汁液,可大幅度提高同源抗血清对黄瓜花叶病毒的捕获能力。     

用单克隆抗体检测病毒

繁殖与推广植物检疫签准的无毒种子、无性繁殖材料是防止病毒传播、控制水果、蔬菜和观赏作物的许多严重病毒病害的根本方法。几十年来,植物病毒学家已经用免疫化学技术来探测和分类植物病毒。自从1977年引用酶联免疫吸附测试(ELISA)于物植病毒的检测以来,血清学测定方法在植物检定中已广为应用。高质量抗血清的需求大增。在许多检定程序中血清学测定显得日趋重要。为提高血清学方法的灵敏度,血清的质量必须改进,避免非专化性反应出现。在植物病毒提纯过程中,某些植物材料总是附随于病毒,也作为抗原而刺激产生其专化性抗体反应。血清学测试越有效,每次测试需要的抗体量越少,寄主抗体的低含量也就显得越重要。许多在凝胶双扩散测试中能用的血清,除非先用健康植物汁液交互吸收过,否则不适合于做ELISA反应;某些情况下,即使是吸附收过的抗血清在ELISA反应中仍不能用。三十多种植物病毒的单克隆抗体(MCAs)已能制备了,在植物病毒的基础研究和应用研究中MCAs都有许多大用途。现在许多MCAs已应用于病毒检测和病毒间相互关系的研究。MCAs在研究根本性问题上也是有用的:如病毒怎样装配?为何病毒感染某种植物而不感染其它种植物?病毒怎样克服那结合到农作物中的抗性?在植物体中病毒是怎样运动的?在阐述病毒感染过程中的复杂生化反应时MCAs也是有用的。本文将集中谈谈用MCAs检测病毒和未来几十年病毒检测中MCAs将在哪些方面进行改进。     

应用细菌磁颗粒RT-PCR检测3种植物病毒

根据细菌磁颗粒对植物病毒颗粒的非特异性吸附作用,建立了一种新的提取植物病毒RNA的方法。利用细菌磁颗粒收集黄瓜绿斑驳花叶病毒、黄瓜花叶病毒和百合无症病毒等3种病毒颗粒,富集分离后,通过高温使其裂解释放出病毒RNA,进行RT-PCR检测。与利用Trizol试剂提取这3种植物病毒的RNA相比,具有操作简单、无毒性,能够显著缩短提取时间。对黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测灵敏度验证表明:BMPs-RT-PCR与Trizol-RT-PCR的检测灵敏度相同,均为105倍的植物叶片组织稀释液。