鸵鸟大肠埃希菌病的细菌分离鉴定

无菌采取病死鸵鸟心血、肝脏、肺、肾,进行病原的分离鉴定、动物试验与药敏试验.结果表明,此次发病由大肠埃希菌引起,分离菌对小白鼠和雏鸡有较强致病力;该菌对头孢噻肟和头孢曲松高度敏感,对卡那霉素和阿米卡星中度敏感,对氧氟沙星、四环素、环丙沙星、庆大霉素、复方新诺明等抗菌药物有耐药性.     

四川省动物源常见细菌耐药性现状

近年来由于兽用抗生素的大量使用,动物源尤其是食品动物中常见病原菌耐药性水平逐渐增高,并可在人、动物和环境中传播.尽管国内外已有动物源细菌耐药菌株的大量报道,但是聚焦局部地区仍缺少系统的总结.因此,论文针对四川地区动物源常见的大肠埃希氏菌、沙门氏菌和肠球菌的耐药性进行总结,介绍以上3种细菌的耐药水平、分布及重要耐药基因的...     

兔致病性大肠埃希氏菌病的诊断

兔大肠杆菌病(colibacillosis)是由大肠埃希氏菌(Escherichia coli 简称 E.coli)某些特定血清型菌株所引起的一种肠道细菌传染病,尤其在幼兔中造成严重的损失,其中以1～4日龄幼兔感染最高,其次是7～15日龄内哺乳幼兔,有关试验结果资料表明:致病性血清型为 O_(23)、O_(35)、O_(86)、O_(13)、O_(26)等。我院实验动物中心家兔繁殖场连续不断发生幼兔腹泻下痢疫病,幼兔繁殖一直较困难,成活率较低,造成本院实验     

抗鸡致病性大肠埃希氏菌O88单克隆抗体的研究

用纯化的鸡致病性大肠埃希氏菌Ｏ８８菌株（ＭＧ３８ｅ）热灭活抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ雌性小鼠,再用该菌株粗提的脂多糖尾静脉注射加强免疫后,取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合,经有限稀释法克隆,用间接ＥＬＩＳＡ及凝集试验（ＩＨＴ）筛选,获得４株能稳定分泌该菌株单克隆抗体的杂交瘤细胞。哪样我瘤细胞培养液ＥＬＩＡＳ和ＩＨＴ效价分别为１：１００～１：１０００和３ｌｏｇ２～４ｌｏｇ２;腹水效价分别为１：１００～１：４     

黑龙江 家兔大肠埃希氏菌污染情况的调查

在自１９９６年至１９９９年的４年中，共从腹泻兔群中分离出１５株致病性大肠杆菌，血清型鉴定表示，这１５株大肠杆菌分属于７个血清型，其中以０６８的频率最高，达２０．０％，其次是０７和０１３０，达１３．３％。用试管凝集试验对１９９６年前自黑龙江省部分兔群中采集的血清进行检查，发现以０１３和０７血清型的污染率最高，分别达４８．４％和２４．３％。结果表明，近年来血清型的菌株流行为主，变为最近两年的以０６８等     

包膜丁酸钠对仔猪肠道微生物细菌数量的影响

研究包膜丁酸钠对仔猪肠道微生物细菌数量的影响。选择28日龄体质量相近的60头断奶仔猪,随机分成2组,分别为试验组和对照组,每组3个重复,每重复10头断奶仔猪。对照组饲喂基础日粮,试验组基础日粮+包膜丁酸钠1000g/t。试验结束后解剖取肠道物进行荧光聚合酶链式反应(PCR)测定,比较肠道物中乳酸杆菌和大肠埃希菌数量的变化。研究结果表明:在日粮中添加包膜丁酸钠可促进肠道乳酸杆菌的增值,降低大肠埃希菌的数量。包膜丁酸钠有改善断奶仔猪肠道微生态平衡的作用。     

禽源大肠埃希菌Biolog鉴定和系统发育分析

采用Biolog和16S rRNA基因序列分析法对中国兽医药品监察所菌种室收集保藏的18株大肠埃希菌(Escherichia coli)进行了鉴定.菌株经纯化培养,用Biolog微生物鉴定系统进行了鉴定,结果表明18株菌株为大肠埃希菌.提取基因组DNA,采用16S rRNA通用引物,用PCR进行16S rRNA基因序列扩增,扩增产物纯化后进行测序.序列经人工校对后用Clustal X 1.83软件进行比对分析,采用Mega 3.1软件构建系统发育树,结果表明18株菌株为大肠埃希菌.     

211茵对猪致病性肠埃希氏茵的体外抑制作用

将产乳酸、能生成芽胞的２１１茵对猪的９株致病性大肠埃希氏茵进行抑制试验。结果表明，培养２４－７２ｈ，２１１茵对９株大肠埃希氏茵均能产生抑制作用，抑茵长度０－３．２５ｃｍ；最佳抑茵时间为２４－４８ｈ；７２ｈ后抑茵区有不同程度的所缩小，Ｏ１４１和Ｏ９茵株抑茵区消失。     

宁夏部分地区鸡大肠埃希菌的分离与血清型鉴定

为调查宁夏地区鸡大肠杆菌病的流行情况,采集宁夏4个地区的103个规模化鸡场疑似病料151份,通过病原菌分离鉴定及生化试验,鉴定出鸡大肠埃希菌109株,平均分离率为72.19%(109/151);动物试验证实,59株分离菌有致病性,占分离菌54.13%(59/109);对致病性菌株进行血清型鉴定,确定血清型种类13种38株,占致病性菌株64.41%(38/59);优势血清型分别为O15、O18、O78、O88,占定型菌株63.16%(24/38)。     

一株猫源溶血性大肠埃希菌的分离与鉴定

从上海的1只无症状流浪猫的全血中分离到1株细菌,综合培养性状、生化特性,该菌株鉴定为大肠埃希菌(Escherichia coli),经PCR检测和O抗原血清型试验鉴定为产肠毒性大肠埃希菌O78:k80。该菌株对林可霉素耐药,对阿莫西林、氨苄西林、卡那霉素等15种抗生素均敏感。利用该菌株接种ICR小鼠,试验小鼠20 h内死亡。     

Advances in Biological Function of Rabies Virus Glycoprotein

Rabies is a lethal zoonotic infectious disease caused by rabies virus (RABV), which infected the central nervous system. The RABV glycoprotein exists on the surface of the virus particles, it is a major protective antigen which stimulate the body to produce the humoral immunity and cellular immunity;It is the identification of structure of the cell receptors;It plays an important role in the viral pathogenicity and tropism in the nerve, directly related to the virulence of virus.In this review,we summarized research progress of structure and function of RABV glycoprotein,and also reviewed the detection and evaluation of the neutralizing antibody. All these fundamental studies are important for the control and elimination of the RABV,to provide research basis for further revealing the biological function of RABV glycoprotein.     

狂犬病病毒糖蛋白生物学功能研究进展

狂犬病是由狂犬病病毒（rabies virus,RABV）感染中枢神经系统引起的致死性人畜共患传染病。RABV糖蛋白存在于病毒表面,它既是病毒的主要保护性抗原,诱导体液免疫产生中和抗体和刺激T细胞产生细胞免疫,又是病毒与细胞受体结合的结构,在病毒致病性和嗜神经性中发挥重要作用,与病毒毒力直接相关。作者归纳总结国内外RABV糖蛋白结构与功能研究进展,并对糖蛋白中和抗体的检测与评价进行阐述。将为进一步揭示RABV糖蛋白生物学功能奠定基础,为糖蛋白中和抗体的诊断提供理论参考,为控制和消灭狂犬病做出相应贡献。     

表达狂犬病病毒糖蛋白的重组鸡痘病毒的构建和鉴定

将 RVG基因插入到鸡痘病毒表达载体 p UTA- 2 Sm a 位点获得重组转移载体 p U TA- RVG,利用脂质体转染已感染中国鸡痘病毒疫苗株 2 82 E4株 2～ 3h的鸡胚成纤维 (CEF)细胞 ,收获病毒后 ,用 Brd U法进行加压筛选重组病毒 ,PCR检测到重组病毒 RVG基因 ,Western blot检测出 RVG,从而证实已成功构建了表达 RVG的重组鸡痘病毒     

狂犬病病毒糖蛋白转基因小鼠对该病毒形成免疫耐受

对带有绵羊ＭＴ启动子－狂犬病病毒糖蛋白基因的（ＭＴ－Ｒｇｐ）的ＴｇＮ（ｏＭＴ－Ｒｇｐ）２Ｌｇｅ、ＴｇＮ（ｏＭＴ－Ｒｇｐ）４Ｌｇｅ和ＴｇＮ（ｏＭＴ－Ｒｇｐ）６Ｌｇｅ３株转基因小鼠系（子代）进行了表达检测。ＥＬＩＳＡ结果表明，小鼠肝脏、肾脏中均有糖蛋白表达产物，以肝脏的表达量较高；对肝脏的免疫组化检测结果显示，糖蛋白分布在肝脏实质细胞，主要位于细胞膜上和胞浆内。对８只ＴｇＮ（ｏＭＴ－Ｒｇｐ）２Ｌｇｅ子代鼠一次接种灭活的狂犬病病毒８２０２株，接种前和接种后３周的血清抗体水平变化在转基因鼠和非转基因鼠之间有明显区别，非转基因鼠抗狂犬病病毒抗体水平明显升高，而转基因鼠抗体水平基本保持不变。经统计学分析，转基因鼠的抗体水平变化相差不显著，表明转基因小鼠对该病毒形成了部分免疫耐受性。     

狂犬病病毒糖蛋白原核表达及纯化

试验旨在提高狂犬病病毒(rabies virus,RV)糖蛋白(G)在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中的表达量。通过优化蛋白质诱导表达的温度、时间、诱导剂浓度等条件,以提高该蛋白质的表达量。SDS-PAGE电泳分析结果显示,重组质粒在1 mmol/mL IPTG、30 ℃诱导6 h条件下蛋白表达量最高,经GST-resin亲和层析柱法纯化获得的纯化蛋白约为36 ku,与预期大小相符。Western blotting结果显示,表达蛋白具有很好的免疫原性和特异性。结果表明,RV G融合蛋白的优化表达和纯化为RV亚单位疫苗及中和抗体的研制奠定了基础。     

狂犬病病毒糖蛋白基因在原核细胞中的表达

将狂犬病病毒糖蛋白（ＲＶｇｐ）基因ＢｇｌⅡ片段（１６７５ｂｐ）分别正向插入到原核高效表达载体ｐＥＴ－１７ｂ和ｐＥＴ－１７ｂ２（用ＳａｃⅠ－ＮｄｅⅠ缺失掉ｐＥＴ－１７ｂ６０ｂｐ含起始密码子ＡＴＧ小片段）的ＢａｍＨⅠ切点，构建重组质粒ｐＥＴ－１７ｂＲＶｇｐ和ｐＥＴ－１７ｂ２ＲＶｇｐ。将其分别转化表达受体菌Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）和Ｅ，ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ．ＩＰＴＧ诱导表达，菌体经超声波裂解处理后ＳＤＳ－ｐＡＧＥ，染色，在分子量约６００００处可见重组质粒表达的较宽的蛋白带，以抗ＲＶｇｐＭｃＡｂ进行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测，表明该表达蛋白为ＲＶｇｐ。通过扫描显示，表达的ＲＶｇｐ占菌体总蛋白的１０％～１４％，其中ｐＥＴ－１７ｂ２ＲＶｇｐ在Ｅ。ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中的表达量最高。     

狂犬病病毒Vero ERA株G蛋白333位点精氨酸突变株的构建

狂犬病病毒糖蛋白（G）在病毒的致病性中起着主要作用,其第333位点精氨酸（Arg）是决定病毒神经细胞侵嗜性的重要分子基础之一。为研制更加安全有效的狂犬病减毒活疫苗,本试验采用负链RNA病毒反向遗传学方法,在体外将狂犬病病毒Vero细胞适应株ERA糖蛋白G333位点精氨酸突变为谷氨酸,构建减毒株ERAGΔ,减弱了其潜在的毒力返强的危险。救获的ERAGΔ突变株在Vero细胞上表现出与ERA株亲本病毒相似的生长动力学特性。本研究成功构建并拯救出了狂犬病病毒ERA减毒疫苗株,为研制开发狂犬病病毒无毒疫苗提供了候选株。     

不同启动子对重组痘苗病毒表达狂犬病病毒糖蛋白基因的影响

以血凝素（ＨＡ）基因为侧翼，将狂犬病病毒糖蛋白基因ｃＤＮＡ置于不同类型的痘苗病毒复合启动子下游，构建了４种表达质粒。重组表达质粒转染已感染ＷＲ株痘苗病毒的ＢＨＫ２１细胞，并通过鸡红细胞吸附试验，筛选、纯化出与表达质粒对应的４组ＨＡ－重组痘苗病毒：ｖＳＦＪ１－１０ＲＶｇｐ，ｖＳＦＪ２－１６ＲＶｇｐ，ｖＲＪ１－１０ＲＶｇｐ，ｖＲＪ２－１０ＲＶｇｐ。经间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）鉴定，从４组重组病毒中每组各鉴定出１株阳性重组病毒。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测显示，重组病毒感染的ＢＨＫ２１细胞裂解物上清中有１种蛋白与抗ＲＶＧＰ的ＭｃＡｂ发生特异反应，分子量为６９０００。在重组病毒感染早期，ＲＶＧＰ的表达量以ｖＳＦＪ１－１０ＲＶｇｐ最高；而在感染晚期，则以ｖＳＦＪ２－１６ＲＶｇｐ最高。４株重组病毒免疫小鼠，均能够不同程度地诱导小鼠产生抗ＲＶＧＰ特异性抗体。     

狂犬病病毒CTN株糖蛋白基因的克隆与序列分析

克隆分离自我国狂犬病病毒固定毒CTN株糖蛋白基因,分析它的主要功能位点表明它具有319位的糖基化位点和完整的抗原位点,说明其具有用作疫苗株的潜力。并与国内外疫苗株、我国的3株街毒株、CVS株和Mokola毒株进行了同源性分析,表明我国疫苗株和CVS株与我国的街毒株相距最远,而CTN株与我国的3株街毒株相距最近,同属一个分支。     

不同转染介质对狂犬病病毒糖蛋白基因免疫的效应

将狂犬病病毒糖蛋白 ( RGP) c DNA Bgl 片段 ( 1 .6 7kb)分别克隆进质粒 p GFP-Cl、p SV2 -dhfr和pc DNA3 ,构建了重组质粒 p GFP-C1 -RGP、p SV2 -RGP和 pc DNA3 -RGP,通过脂质体和聚乙烯亚胺 ( PEI)包裹后分别转染 BHK-2 1细胞和乳鼠脑内接种 ,3种重组质粒均能表达出 RGP。表达水平高低依次为 p GFP-C1 -RGP>pc DNA3 -RGP>p SV2 -RGP。 3种重组质粒分别以全裸质粒、质粒 -脂质体、质粒 -PEI形式 ,经骨骼肌免疫小鼠 ,间接 ELISA检测。结果显示 ,免疫鼠血清中特异性抗体水平明显高于对照组 ;80 %免疫小鼠能抵抗狂犬病病毒强毒的攻击。全裸质粒免疫诱生的抗体水平同其剂量相关 ;而以 PEI或脂质体作为转染介质、质粒接种量超过 2 0μg时 ,诱生抗体水平不再随质粒剂量增大而显著变化。质粒免疫后 1 50 d采用 PCR仍然能从注射部位检测到 RGP基因的存在