苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的组织培养及其叶片不定梢诱导

【目的】建立苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的组织培养快繁技术体系及其离体叶片不定梢再生技术体系,为工厂化生产优质苗木及利用生物技术手段改良品种奠定技术基础。【方法】以苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的半木质化新梢为试材,建立初代无菌试管苗。以试管苗为试材,研究了基本培养基、植物生长调节物质对试管苗继代生长及生根的影响。以离体叶片为外植体,研究了细胞分裂素种类和浓度及碳源对不定梢再生的影响。【结果】半木质化新梢在芽启动培养基上的腋芽萌发率达85%以上。在基本培养基MS和QL上,试管苗的增殖没有显著差异,但生长表现不同,QL培养基上的增殖苗表现出该品种田间生长的红色特征。当细胞分裂素为BA时,蔗糖比D-山梨醇易诱导出叶片不定梢;当细胞分裂素为TDZ并且浓度较高时,D-山梨醇比蔗糖易诱导出叶片不定梢。以添加3 mg·L-1BA和30 g·L-1蔗糖处理获得的不定梢再生率最高,为71.6%。生根诱导,基本培养基1/2MS比1/4MS有效,生长素IBA比NAA有利于提高生根率。【结论】苹果砧木‘BP-176’试管苗适宜的继代增殖培养基为添加1.0 mg·L-1BA和0.1 mg·L-1IBA的QL培养基;最佳不定梢再生培养基为:NM+3 mg·L-1BA+0.3 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖;最佳生根培养基为1/2MS+0.3 mg·L-1IBA+20 g·L-1蔗糖,最高生根率为69.8%。     

金花梨子叶不定梢再生研究

以金花梨花后65 d的成熟胚子叶为外植体,研究了不同培养基、BA浓度、暗培养条件及AgNO3浓度对子叶不定梢再生的影响。结果表明:梨成熟胚子叶在适宜培养条件下能发生大量不定梢,培养15 d为初发生期,25~30d为高峰期,40 d后结束发生。暗培养预处理有利于提高子叶再生频率、再生不定梢数和不定梢质量。在NN69+BA3.0mg/L+NAA 0.2mg／L培养基上,暗培养3周后转光下培养获得了85.2％不定梢再生率,平均再生不定梢4.4个。培养基中加入0~4mg／LAgNO3对梨子叶不定梢再生有促进作用,但浓度大于4mg/L时抑制子叶不定梢再生。     

砂梨叶片再生不定梢的研究

研究了3个砂梨栽培品种翠冠、)青、西子绿离体叶片不定梢再生能力。翠冠再生能力最强,)青其次,而西子绿未能再生。一定时期的暗培养是翠冠叶片再生的必要条件。对翠冠再生过程不同时期的叶片样品进行扫描电子显微镜观察表明,在试验开始的10d后就出现了类分生组织结构,在2个月后观察到充分发育的梢,且最终形成的梢的数量远少于所形成的分生组织数量。     

培养条件对酸枣叶片不定梢再生率的影响

以酸枣无菌苗叶片为外植体,选用基本培养基ＮＮ６９和ＷＰＭ,外源激素包括ＴＤＺ、ＩＡＡ、ＩＢＡ和ＮＡＡ,暗培养时间为２、３、４周。采用正交实验设计方法,研究了基本培养基、外源激素及暗培养时间对叶片不定梢再生的影响。结果表明在附加ＴＤＺ１~３ｍｇ/Ｌ的ＷＰＭ和ＮＮ６９上都可诱导不定梢再生,但ＷＰＭ比ＮＮ６９更有效。暗培养时间对不定梢再生也有影响,暗培养３周比２、４周更有利于提高叶片的不定梢再生率。在附加ＴＤＺ１ｍｇ/Ｌ、ＩＡＡ０．１ｍｇ/Ｌ的ＷＰＭ培养基上,暗培养３周后转到光下培养,获得的不定梢再生率达８７．５%。     

西洋梨“丰产”叶片不定梢再生

以西洋利品种“丰产”试管苗叶片为外植体,研究了不同培养基及乙烯抑制剂ＡｇＮＯ３对叶片不定梢再生的影响。在ＮＮ６９＋ＢＡ５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ培养基上,暗培养３周我下培养,获得了最高不定梢再生率,达１００％。ＡｇＮＯ３结叶片不定梢再生也表现咄促进作用。在不加ＡｇＮＯ３的ＭＳ＋ＢＡ５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ培养基上暗培养３周,再生率仅为２０％,附加ＡｇＮＯ３０．１ｍｇ／Ｌ,再生率可达５     

甜樱桃品种吉列玛叶片再生不定梢的研究

在基本培养基NN69或WPM上附加BA和低浓度的NAA，IAA，IBA作培养基，诱导甜樱桃品种吉列玛试管苗的叶片产生了不定梢。以WPM附加BA 3mg/L和IAA0．3mg/L的处理，不定梢再生率最高为33．3％。     

乙烯抑制剂AgNO3对梨叶片再生不定梢的促进作用

该实验研究了乙烯抑制剂ＡｇＮＯ３对梨叶片再生不定梢的促进作用。ＡｇＮＯ３浓度在０．１￣８ｍｇ／Ｌ范围内对叶片再生不定梢都有明显的促进作用。添加ＡｇＮＯ３ ２ｍｇ／Ｌ的培养基上,叶片不定梢再生率最高,达７５％,而不加ＡｇＮＯ３的对照培养基上,再生率仅为１５％。     

抗生素对''''考密斯''''梨叶片不定梢诱导的影响

研究了氨苄青霉素（Amp）、羧苄青霉素（Carb）、头孢霉素（Cef）、卡那霉素（Kin）和新霉素（Nm）对‘考密斯’叶片愈伤组织和不定梢诱导的影响。结果表明，Cef对‘考密斯’叶片分化影响较小，当浓度达500mg／L时，出愈率和不定梢再生率分别为93．33％的51．48％，与对照差异不显著；恕np浓度在50-100mg／L时，对‘考密斯’叶片再生无显著影响，只有当Amp浓度高于100mg／L时，‘考密斯’的不定梢再生率才受到显著抑制；‘考密斯’对Carb的发应较为敏感，其浓度为50mg／L时，出愈率和不定梢再生率已降低到85．56％和25。00％，与对照差异极显著，浓度为200mg／L时，完全抑制了‘考密斯‘的不定梢再生；Km浓度为10mg／L时，已完全抑制了不定梢的再生，当Km浓度增加到60mg／L时，‘考密斯’叶片全部白化死亡；Nm浓度为10mg／L时，极显著的抑制了‘考密斯’叶片再生，当浓度达40mg／L时，已无不定梢发生。     

酸枣叶片不定植株的诱导

从酸枣实生苗叶片获得再生不定植株,在 ＷＰＭ附加 ＴＤＺ ２．０ ｍｇ· ｌ~(－１)和 ＩＡＡ０．５ ｍｇ· ｌ~(－１)的培养基上获得了４７.６％的不定梢再生率。不定梢转移到培养基ＭＳ＋ＢＡ ０．５ ｍｇ·１~(－１)上增殖,在１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．３ｍｇ·１~(－１)＋蔗糖２％培养基上诱导生根,仅获得１３．１％的生根率。     

酸枣叶片不定植株的诱导

从酸枣实生苗叶片获得再生不定植株,在ＷＰＭ附加ＴＤＺ２．０ｍｇ．ｌ＾－１和ＩＡＡ０．５ｍｇ．ｌ＾－１的培养基上获得了４７．６％的不定梢再生率。不定梢转移到培养基ＭＳ＋ＢＡ０．５ｍｇ．ｌ＾－１上增殖,在１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．３ｍｇ．ｌ＾－１＋蔗糖２％培养基上诱导生根,仅获得１３．１％的生根经。     

不同倍性苹果叶片不定植株再生研究

以苹果二倍体、三倍体、四倍体共２８个品种的无菌苗叶片为试材,研究了倍性、光和暗培养及叶片的生长部位对叶片不定梢再生的影响。结果表明：多倍体比二倍体容易再生不定梢,平均不定梢再生率,三倍体达９８．４％,二倍体６８．４％,一个四倍体品种达９３．３％。暗培养比光培养有利于促进不定梢再生,无菌苗顶部刚展开的嫩叶比中下部成熟老化叶再生率高。     

满园香梨叶片不定芽的诱导

采用正交试验设计研究了不同基本培养基、TDZ、生长素种类及其浓度4个因素组合对满园香梨(Pyrusus鄄suriensisMaxim.cv.Manyuanxiang)离体叶片不定芽再生的影响。结果表明,基本培养基的种类是影响叶片不定芽再生最重要的因素,其次是生长素的种类。通过叶片不定芽再生频率和平均每叶再生不定芽数分析表明,NN69+TDZ3.0mg/L+IAA0.2mg/L为满园香梨叶片不定芽发生的最佳培养基组合,在该培养基组合上,满园香梨叶片再生率和平均再生芽数分别达到了74.8%和4.40。同一叶片的基部和顶端比中部更有利于不定芽的再生。     

病害对3个砂梨品种早期落叶的影响

由于一些侵染性病害的影响,浙江省主要梨产区出现早期落叶严重的现象,严重影响了砂梨产业的发展。通过对浙江省杭州市商业梨园主栽品种的田间调查发现,不同品种对病菌的抵抗能力不同。圆黄为黑斑病的易感品种,但对炭疽病的抗性较强;黄花和翠冠较抗黑斑病,但黄花炭疽病的发病率较高;3个品种的锈病发病率没有显著差异。病菌侵染和落叶时间的相关性分析表明,病菌侵染后翠冠和圆黄落叶较黄花早;受黑斑病菌侵染的叶片最易脱落,而梨炭疽病菌和梨锈病菌不易引起落叶,仅在后期形成穿孔。总体上圆黄早期落叶现象最为严重。受梨黑斑病菌侵染后,叶片诱导POD活性的增加来抵御病原菌的侵染。     

野生毛桃叶片愈伤组织诱导及不定芽再生

【目的】为了初步建立野生‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导、保存及不定芽再生技术体系,【方法】以野生‘毛桃1号’试管苗幼嫩叶片为外植体,探讨了基本培养基、激素配比等一系列因素对‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导和保存的影响及TDZ浓度对愈伤组织不定芽再生的影响。【结果】结果表明,适合‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导的培养基为LP+6-BA 1.0 mg.L-1+2,4-D 3.0 mg.L-1+AgNO30.5 mg.L-1+蔗糖30.0 g.L-1+琼脂6.0 g.L-1;保存的培养基为LP+2,4-D1.5 mg.L-1+CH 0.4 g.L-1+蔗糖30 g.L-1+CA 3.0 g.L-1或PVP 3.0 g.L-1+琼脂5.8 g.L-1,且采用持续暗培养保存,每28 d继代1次。愈伤组织在SH+TDZ 3.0 mg.L-1+NAA 0.3 mg.L-1+蔗糖30 g.L-1+琼脂6.0 g.L-1的培养基上可再生不定芽,再生率为6.83%。【结论】初步建立了‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导、保存及不定芽再生体系,为桃愈伤组织再生和遗传转化的研究奠定了基础。     

马哈利樱桃叶片再生的研究

利用马哈利樱桃的无菌苗叶片做外植体 ,进行离体叶片再生不定芽研究。结果表明 :培养基中添加的激素浓度、种类、配比均影响不定芽再生 ,BA诱导马哈利樱桃离体叶片再生的活性强于TDZ ;在WPM BA 5mg/L IBA 0 .7mg/L培养基上 ,通过 3次继代培养的不定梢的叶片 ,再生不定芽的频率达 5 2 .4%。     

喷施KNO_3对新高梨实生苗硝酸还原酶活性和氮素积累的影响

在盆栽条件下,研究了喷施KNO3对新高梨实生苗硝酸还原酶活性(NRA)和氮素积累的影响。结果表明,最高NRA(386.28nmolNO2-/g·hFW)出现在喷施10mmol/LKNO38h后。叶片和根系中(+NO3-)NRA均显著地高于(-NO3-)NRA,其中(+NO3-)NRA与KNO3喷施浓度不存在任何相关性,但(-NO3-)NRA与KNO3喷施浓度呈显著正相关。NRA在茎上各叶位中的分布由顶部向基部逐渐减少。叶片中全氮和还原氮含量随KNO3喷施浓度的增加而增加,但硝态氮含量相对稳定;根系中氮素含量变化与KNO3喷施浓度相关性不明显。叶片和根系中(+NO3-)NRA与氮素含量变化无任何关系;叶片中(-NO3-)NRA与全氮和还原氮含量呈正相关,而根系中(-NO3-)NRA与氮素含量变化不存在任何相关性。因此认为硝酸盐还原在叶片和根系中可能存在不同的酶调控机制。     

不同肥料种类对黄金梨果实内在品质及风味的影响

应用田间试验方法。研究了不同肥料类型对黄金梨果实硬度、可溶性固形物含量和不同种类糖、酸含量的影响。结果表明,堆肥＋叶片喷施氨基酸肥和腐熟动物废弃料处理当年和第2年的果实可溶性固形物含量均显著高于单一施用堆肥（对照）;不同类型肥料施用后,显著提高了当年果实总糖、果糖含量,堆肥＋叶片喷施氨基酸肥和腐熟动物废弃料处理还能提高...     

利用枣离体叶片直接再生完整植株

以冬枣组培苗叶片为材料进行离体再生培养, 通过对再生条件的系统研究, 实现了离体叶片直接再生不定芽并获得完整植株。试验结果表明: 麦芽糖为离体叶片直接再生的适宜碳源; AgNO3可显著提高叶片不定芽再生率和出芽数, 在TDZ 1.0 mg·L - 1 +AgNO3 1.0 mg·L - 1的条件下, 不定芽直接再生率高达97.3% , 出芽数达14.4个。但麦芽糖不适宜继续作为不定芽伸长培养的碳源, 再生的不定芽需在MS+ 蔗糖40 g·L - 1 + 琼脂4 g·L - 1 +BA 1.0 mg·L - 1 + IBA 0.5 mg·L - 1的培养基上进行增殖, 增殖系数为3.2。在IBA1.0 mg·L - 1条件下, 生根率达87.3%。