黄芪多糖对小鼠腹腔巨噬细胞iNOS基因表达及NO生成的影响

研究黄芪多糖(APS)在体内对小鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达及产生一氧化氮(NO)的影响。分别按5、25、50、100、200mg/kg体重,连续1周以腹腔注射方式给予小鼠APS。分离小鼠腹腔巨噬细胞,QRT-PCR检测小鼠腹腔巨噬细胞中iNOS的基因表达量;培养细胞24h,硝酸还原酶法检测上清中的NO含量,培养的单层巨噬细胞做吞噬中性红试验。结果显示,APS(100mg/kg和200mg/kg)可显著地促进巨噬细胞iNOS基因的表达和NO的产生,并显著(50、100、200mg/kg)增强巨噬细胞吞噬中性红功能,APS的作用呈浓度依赖性。体内条件下APS增强巨噬细胞功能的机制之一可能是促进巨噬细胞iNOS基因的表达进而催化产生NO。     

活性氧参与脂多糖诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7活化诱导凋亡

研究活性氧(ROS)与脂多糖(LPS)诱导后巨噬细胞活化诱导凋亡的关系。体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用不同浓度LPS诱导细胞,添加100μmol/L H2O2增加细胞内ROS,或用姜黄素(7.5μmol/L)降低细胞内ROS;流式细胞术分析细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)和ROS。结果显示,RAW264.7细胞凋亡和细胞内ROS水平均随LPS浓度增加而增加,高浓度的LPS导致MMP下降;与LPS(8μg/m L)单独作用组比,H2O2增加ROS,并导致凋亡细胞百分率增加;姜黄素降低LPS诱导的细胞凋亡,同时减少细胞内ROS。表明活性氧参与LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7活化诱导凋亡。     

取代基对黄酮类化合物抑制脂多糖诱导巨噬细胞释放一氧化氮活性的影响

为给黄酮类非甾体抗炎药的研发提供试验依据,本试验以脂多糖诱导巨噬细胞(RAW264.7)释放一氧化氮(NO)为试验体系,研究了5种取代基对黄酮类化合物体外抗炎活性的影响。具体评价了黄酮、5,7-二羟基黄酮、5,7,4'-三羟基黄酮、芹菜素-7-葡萄糖苷及蒙花苷的体外抗炎活性。结果表明5,7,4'-三羟基黄酮能明显抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞NO的释放,5,7,4'-三羟基黄酮的4'羟基是其活性的必需基团。     

牦牛转铁蛋白对小鼠巨噬细胞释放一氧化氮的影响

用从牦牛血清中分离纯化的转铁蛋白和Sigma公司提供的牛转铁蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮的影响进行研究.一氧化氮以伊利康生物技术有限公司提供的试剂盒测定.结果:脂多糖终浓度为20 μg/ml、培养时间12 h时,巨噬细胞释放一氧化氮的量显著增加,且满足实验需要,当两种转铁蛋白的浓度在25 μg/ml时能显著抑制小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮释放.这表明转铁蛋白对巨噬细胞的生长及免疫功能的影响与其抑制一氧化氮的释放有关.抑制一氧化氮生成,可能是转铁蛋白抑制细菌及病毒生长等的作用机制之一.     

不同浓度乙醇洗脱沙葱黄酮对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的抗炎作用

本试验旨在研究通过超声波法提取的35%和75%乙醇洗脱沙葱黄酮对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的抗炎作用。采用细胞计数试剂盒检测不同添加浓度(25、50、100、200、400μg/mL)的35%或75%乙醇洗脱沙葱黄酮对小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响;设空白对照组、LPS应激模型组、不同浓度乙醇洗脱沙葱黄酮组(分别加入25、50、100μg/mL 35%或75%乙醇洗脱沙葱黄酮溶液),采用Griess、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附测定法检测不同浓度乙醇洗脱沙葱黄酮对小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子及炎性因子的影响。结果表明:与空白对照组相比,35%、75%乙醇洗脱沙葱黄酮在25～100μg/mL添加浓度内可极显著提高小鼠腹腔巨噬细胞活性(P0.01)。与LPS应激模型组相比,35%、75%乙醇洗脱沙葱黄酮均可极显著极显著降低小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮含量及诱导型一氧化氮合酶mRNA相对表达量(P0.01),并均呈剂量依赖效应,且75%乙醇洗脱沙葱黄酮作用效果优于35%乙醇洗脱沙葱黄酮; 35%乙醇洗脱沙葱黄酮可极显著降低小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量(P0.01),极显著降低TNF-α、IL-6 mRNA相对表达量(P0.01); 75%乙醇洗脱沙葱黄酮可显著或极显著降低小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α含量(P0.05或P0.01),极显著降低TNF-α、IL-6 mRNA相对表达量(P0.01)。由此可见,35%、75%乙醇洗脱沙葱黄酮可通过提高小鼠腹腔巨噬细胞活性、调控细胞因子及炎性因子的分泌而发挥抗炎作用。     

蒲公英提取物对小鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮的影响

用MTT法测定蒲公英提取物对脂多糖(LPS)激活小鼠腹腔巨噬细胞的毒性作用,以确定无细胞毒性剂量范围,并在该剂量范围内采用Griess试剂比色法测定蒲公英提取物对LPS激活小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮(NO)的影响,为蒲公英提取物药理作用的进一步研究提供依据.结果表明,蒲公英提取物≤1mg/mL剂量范围内对巨噬细胞无细胞毒性作用.其在0.25～1 mg/mL浓度范围内对LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO具有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖关系.     

野菊花提取物对小鼠血清NO、NOS的影响

目的：探讨野菊花提取物对小鼠血清中一氧化氮（NO）、一氧化氮舍酶（NOS）的影响，以研究野菊花对动物心血管系统的药理作用机理。方法：将小鼠随机分为试验组和对照组，试验组小鼠腹腔注射野菊花提取物（2ml／kg），l：K／d，连续7d。用Griess试剂法测定血清中NO的含量；化学比色法测定血清中NOS的含量。结果：试验组小鼠血清中NO、NOS含量均显著高于对照组（P〈0．05）。结论：野菊花提取物通过增强NOS活性而增加NO含量，这可能为其舒张血管内皮、降低血压的作用机理之一。     

TLR4信号分子在脂多糖诱导小鼠肝损伤过程中的变化

为了阐明LPS诱导小鼠肝损伤过程中TLR4信号分子的变化,本试验以昆明小鼠为研究对象,经腹腔注射LPS,从形态学和肝功能指标变化判定肝损伤模型的建立,利用RT-PCR法检测各组肝脏组织中TLR4、IL-10、TNFα的转录水平。结果表明,随着LPS作用时间的延长,肝脏组织病理变化明显,肝窦不同程度充血,炎性细胞浸润,肝细胞呈现点状、小片状或多灶性坏死;血液和肝脏中GPT和GOT的活性升高,升高幅度依赖LPS作用时间,提示成功建立了肝损伤模型;RT-PCR结果显示,LPS诱导肝组织TLR4、IL-10、TNFα表达增加,且具有时间依赖性,TLR4、IL-10在3h表达开始升高,12h达高峰,TNFα变化幅度不如TLR4、IL-10变化显著,提示TLR4、IL-10、TNFα的表达水平依赖于肝损伤程度。     

艾叶挥发油对脂多糖诱导的巨噬细胞的抗炎作用

本试验旨在研究艾叶挥发油(AAEO)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞的抗炎作用.以LPS诱导小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)建立炎症模型,设置对照组[添加0.1％二甲基亚砜(DMSO)的培养基]、LPS组(添加1μg/mL LPS的培养基)、不同浓度AAEO组(分别添加5、10、20μg/mL的AAEO,预处理1 ...     

淫羊藿多糖醇沉工艺优化及其对巨噬细胞释放NO的影响

旨在优化淫羊藿多糖醇沉条件并研究不同浓度乙醇醇沉的淫羊藿多糖对巨噬细胞释放NO的影响。采用乙醇沉淀法从淫羊藿多糖提取物中获得淫羊藿多糖,在单因素试验基础上,选择浓缩比、乙醇浓度、乙醇体积倍数、醇沉时间为自变量,采用L9(34)的正交试验设计,优化淫羊藿多糖最佳醇沉条件。用浓度为400、500、600、700、800mL/L乙醇醇沉的淫羊藿多糖,采用体外培养法,测定淫羊藿多糖对巨噬细胞释放NO的影响。结果表明,淫羊藿多糖最佳醇沉条件为浓缩比为1∶2,乙醇浓度为800mL/L,乙醇体积倍数为4倍,醇沉时间为12h;每个乙醇浓度醇沉的淫羊藿多糖均具有良好的活性,500mL/L乙醇醇沉的多糖活性最好。结果显示,淫羊藿多糖对巨噬细胞具有良好的刺激作用。     

脂多糖诱导小鼠肾小管上皮细胞和肺泡巨噬细胞IL-12和TNF-α表达的研究

为了研究脂多糖(LPS)诱导小鼠肾小管上皮细胞和肺泡巨噬细胞IL-12和TNF-α表达的关系,试验采用不同浓度LPS以不同时间体外刺激肾小管上皮细胞(TEC)和肺泡巨噬细胞(AM),用ELISA法分别检测上清液中IL-12和TNF-α的分泌量。结果表明:用2μg/mLLPS刺激TEC,其分泌IL-12的量于24小时达到峰值(P0.01);随着LPS浓度的增加,TEC分泌IL-12的量逐渐增大,当LPS浓度增加到20μg/mL时IL-12的分泌量达到峰值。用10μg/mLLPS刺激AM,AM分泌TNF-α的量于2小时达到峰值(P0.01),随后逐渐下降;随着LPS浓度的变化,TNF-α分泌水平有明显不同。说明在一定的剂量范围内,IL-12和TNF-α的分泌量与LPS呈剂量及时间依赖关系,但随着LPS刺激时间及浓度的增加,IL-12和TNF-α的分泌量逐渐减少;不同浓度的LPS与细胞因子的产生效价有相关性。     

黄芪多糖对细菌脂多糖诱导仔猪腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、NO及IL-1的影响

目的:研究黄芪多糖(APS)对细菌脂多糖(LPS)诱导仔猪腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)基因表达、白细胞介素-1(IL-1)及一氧化氮(NO)的影响。方法:取仔猪腹腔巨噬细胞进行体外培养,用APS和LPS处理,分完全培养液组、APS组、APS LPS组和LPS组四个处理。采用实时定量PCR方法检测TNF-α基因表达,TNF-α和IL-1蛋白含量采用放免法,NO含量采用Griess法测定。结果:完全培养液组、APS组、APS LPS组TNF-α mRNA的表达显著或极显著低于LPS组(P<0.05或P<0.01)。完全培养液组、APS组、APS LPS组上清液中TNF-α、IL-1和NO的含量显著或极显著低于LPS组(P<0.05或P<0.01)。结论:APS抑制仔猪巨噬细胞TNF-α表达及分泌炎性因子,这可能是APS维持仔猪健康的重要机制之一。     

脂多糖诱导的猪肺泡巨噬细胞中Toll样受体和下游基因的表达

本研究旨在确定Toll样受体(TLRs)和下游基因的表达,以及脂多糖(LPS)刺激的猪肺泡巨噬细胞(AM)中细胞因子的分泌随年龄的动态变化。从5日龄新生仔猪和120日龄幼猪中分离AMs,在无LPS和不同浓度LPS添加条件下培养24 h,用实时定量PCR和ELISA分别对其mRNA的表达和细胞因子进行检测。结果表明,与未刺激的细胞相比,添加不同浓度的LPS均导致TLRs 2、4、5和9 mRNA的上调,其中在不同年龄中TLR4的表达均为最高(P<0.05)。此外,定量分析结果表明,两个年龄阶段编码TLRs 2、4、5和9,LBP、CD14、MD2、MyD88、IRAK4和TRAF6的mRNA表达的增加均呈时间依赖性(P<0.05);LPS诱导的TLR4、LBP、CD14和MyD88 mRNA的表达,新生仔猪显著高于幼龄猪(P<0.05);上清液中细胞因子IL-6和TNF-α的水平随培养时间和动物年龄显著变化(P<0.05)。在两个年龄的猪中,其浓度在LPS刺激1 h后增加,且在48 h时仍差异显著。幼龄猪上清液中的促炎性细胞因子IL-6和TNF-α显着高于仔猪。研究结果表明,TLRs和下游基因的表达随年龄而变化,促炎性细胞因子促进了与年龄相关的肺部感染先天性免疫应答的不同。下一步需要在更大的年龄范围内通过功能研究手段确定LPS对猪AMs的精确影响。     

内毒素诱导的一氧化氮作用机制

为了探讨一氧化氮（ＮＯ）作为一种新的内源性介质是如何参与内毒素（ＥＴ）休克发展过程，本文就ＮＯ的生成、代谢和调控；ＮＯ合酶（ＮＯＳ）的分子生物学和ＮＯ在ＥＴ休克中的作用机制的研究进展作一综述。     

细菌群体感应种类及其信号分子的研究进展

<正>细菌的群体感应(Quorum sensing,QS)效应为存在于细菌中,通过响应细菌细胞的密度变化而调节基因表达的机制。随着细菌细胞数目的增加,细菌通过QS的作用产生、释放类激素分子-自诱导物(Autoinducers,AI)并积聚在细菌细胞的外环境中,细菌就是通过这种被称作AI的信号分子的浓度变化来进行信息交流[1]。AI是随着细菌细胞密度的增大而增大的,当AI积聚达到一定的阈值时,     

血管紧张素Ⅱ协同LPS诱导巨噬细胞活化和凋亡的研究

为了研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导巨噬细胞活化和凋亡的影响,在体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,流式细胞术分析不同浓度AngⅡ对细胞TLR4表达的影响;AngⅡ处理细胞8 h后用LPS诱导细胞,流式细胞术分析细胞内活性氧(ROS),p H值,细胞凋亡和线粒体膜电位。通过研究发现,AngⅡ以浓度依赖的方式上调小鼠巨噬TLR4表达,而在AngⅡ与LPS协同诱导后,细胞内ROS含量显著增加,p H值下降幅度也较LPS单独作用组增大;与LPS单独作用比较,AngⅡ与LPS协同诱导增加了巨噬细胞凋亡和线粒体损伤效应。表明AngⅡ对LPS活化巨噬细胞具有增敏作用,同时也促进LPS诱导的细胞凋亡。     

脂多糖诱导的小鼠乳腺炎的研究进展

乳腺炎给养殖行业带来了许多管理上的难题以及经济上的损失,科研人员需要构建乳腺炎模型来对其进行相关研究.但是如果用大动物进行乳腺炎模型的建立,饲料以及管理费用是很高的,并且在获得稳定可信的实验数据需要的动物数量较大.随着科研人员的探索,逐渐发现脂多糖(LPS)诱导的小鼠乳腺炎模型是一个可以用来研究乳腺炎的稳定的模式动物模...