一种芽孢杆菌的新用途

芽孢杆菌为杆菌科的一属细菌,为好氧或兼性厌氧的杆菌,广泛分布在水、空气和土壤中。芽孢杆菌在菌体生长及代谢过程中产生多种活性物质和酶,合成多种维生素和植物生长素,何月秋等(2009)报道:解淀粉芽孢菌9601-Y2具有非常好的促进植物插条生根和生长的作用。在进行春兰等种子萌发特性研究时发现,Bs芽孢杆菌在国兰种子萌发中具有较强的促进作用,即被该菌感染的春兰种子萌发率特别高,萌发整齐,萌发持续时间短。对该菌分离培养、再接种实验证明,春兰种子萌发率高出无菌萌发的10倍以上,且实验证明,该菌不仅对春兰种子有效,而且对多种莲瓣兰、墨兰、寒兰等种子的萌发同样有效,有效率达95%以上。研究发现的芽孢杆菌这一新用途对保护中国兰花(春兰)资源和新品种培育具十分重要意义。     

蓝莓根腐病生防细菌的筛选与鉴定

为了利用生物防治技术控制蓝莓根腐病的发生与流行,采用平板对峙法测定从蓝莓根围土壤中分离的纯化菌株对蓝莓根腐病原菌尖孢镰刀菌Fusariun oxysporun的抑菌活性。筛选出10株有拮抗作用的细菌;B6,B7,B9菌株对尖孢镰刀菌的抑制率依次为83.89%,82.44%,79.39%;选择抑菌率较高的B6,B7,B10菌株在温室内盆栽蓝莓幼苗上测定其抑菌作用,B6菌株抑菌效果最好,发病率仅为13.3%;结合形态特征和16S r DNA序列分析进行拮抗细菌的鉴定,10株拮抗细菌均属于芽孢杆菌属Bacillus。B2、B10为解淀粉芽孢杆菌B.amyloliquefaciens,B3为解淀粉芽孢杆菌亚种B.amyloliquefaciens subsp.,B4为枯草芽孢杆菌B.subtilis,B5、B6为暹罗芽孢杆菌B.siamensis,B7为贝莱斯芽孢杆菌B.velezensis,B8为特基拉芽孢杆菌B.tequilensis,B9为枯草芽孢杆菌亚种B.subtilis subsp.。     

四种生物杀菌剂对黄栌枯萎病的防治效果评价

为筛选出防治黄栌Cotinus coggygria枯萎病的高效低毒杀菌剂，选择4种不同生物杀菌剂分别进行盆栽苗防治与田间防治试验。结果表明：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis菌剂和哈茨木霉Trichoderma harzianum菌剂对黄栌枯萎病有一定的防效，并且可以在一定程度上促进植株的生长。盆栽苗中，枯草芽孢杆菌菌剂500倍稀释液防效最好，达到了77.85%；田间防效中，枯草芽孢杆菌菌剂和哈茨木霉菌剂500倍稀释液防效最好，分别为59.15%,55.00%。选择生物杀菌剂防治黄栌枯萎病时，优先选择枯草芽孢杆菌菌剂。     

不同杀菌剂对杨树烂皮病菌抑制作用测定

通过测定不同杀菌剂对杨树烂皮病菌金黄壳囊孢菌丝生长和孢子萌发的抑制作用,筛选出了有效抑制杨树烂皮病的高效杀菌剂.主要结果:抑制菌丝生长试验发现吡唑醚菌酯和嘧菌酯EC50的用药量最小,浓度5μg/mL时抑菌率达到90%以上,效果最好;而甲基托布津的EC50量最大,效果最不明显.抑制孢子萌发试验发现,唑醚菌酯和嘧菌酯的抑制孢子萌发效果最好,甲基托布津效果最差,与抑制菌丝试验结果一致.说明吡唑醚菌酯和嘧菌酯不但能有效抑制菌丝生长,而且能够显著地抑制孢子萌发.退菌特、多菌灵、三唑酮、百菌清次之,而代森锰锌、烯唑醇锰锌和甲基托布津对菌丝生长和孢子萌发的抑制作用均不很明显.     

抑制杨木变色生防细菌的筛选及其发酵培养条件优化研究

2006 ～ 2008年,从苏鲁两省的严重变色杨木上分离筛选得到8株对杨木变色菌可可球二孢和弯孢有较强抑制作用的枯草芽孢杆菌,通过拮抗细菌的筛选,分析了该菌株的摇床液体发酵最适条件,建立了其生长曲线.结果表明,枯草芽孢杆菌B19对可可球二孢和弯孢2种变色菌的抑制效果最好,其最佳发酵条件是培养时间为46 h,pH值为6,培养温度为35℃,摇床转速为200 r/min,装液量为50 mL.在该参数下培养出的枯草芽孢杆菌B19细菌液对可可球二孢和弯孢的抑制效果最佳.     

杨树腐烂病内生拮抗细菌鉴定及防治研究

采用平板稀释法从杨树枝条中分离到56株内生细菌,其中23株为内生拮抗细菌。通过室内对峙培养、内生拮抗细菌发酵液对杨树腐烂病菌Cytospora chrysosperma的抑菌作用以及室内离体枝条防病试验,证明杨树内生拮抗细菌Y-S-Y12菌株对杨树腐烂病的抑菌防病作用最显著,其次为Y-S-Y 2菌株。对Y-S-Y12菌株采用16S rDNA的序列分析方法鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。     

杨树根腐病生防菌的筛选及鉴定

【目的】杨树作为我国最重要的工业用材林树种之一,对其长期的生产力维护和人工林的健康管理是林业和生态建设的重中之重。近年来,杨树根腐病的防治措施作为林学界亟待解决的重要问题,目前以化学防治方法为主,但其存在许多环境危害,所以具有诸多优点的生物防治成为了现在国内外的研究焦点,找到生防菌是研究的重中之重。以一系列实验分离筛选到用于防治根腐病的低温适生菌为创新点,旨在找到对杨树根腐病菌具有拮抗作用的生防菌,并明确其分类地位,令其在杨树根腐病的生物防治生防菌种类方面作为参考,也为进一步研究其定殖特性、林间防效及生物安全性等问题提供前期基础。【方法】为了筛选出新的低温适生生防菌菌种资源,采用稀释涂布平板法从杨树土壤中分离得到20株芽孢杆菌,经过初步筛选得到了拮抗效果最好的一株芽孢杆菌B42,并对其进行分离纯化,采用平板对峙法对该芽孢杆菌的抑菌活性进行测定,然后鉴定明确其分类地位。【结果】该芽孢杆菌对杨树根腐病菌具有显著的拮抗作用,同时对茄病镰刀菌、红松根腐病镰刀菌、山核桃干腐病菌、链格孢、油茶炭疽病菌、白腐菌均具有广谱抗性。【结论】根据菌体的形态特征、生理生化指标以及16S rDNA序列分析的结果,鉴定该菌B42为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis。     

拮抗细菌诱导油茶植株抗炭疽病研究

研究解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens F14和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis Y13,PX发酵液及其去菌液诱导油茶植株对炭疽病Colletotrichum gloeosporioides的抗性。结果表明,3株拮抗菌及其去菌液诱导处理油茶叶片,都能诱导其产生对炭疽病的系统抗性;以枯草芽孢杆菌Y13及其去菌液的诱导效果最大,分别达到70.7%和68.4%。不同浓度拮抗菌诱导效果有显著差异。在一定范围内,诱导效果随菌浓度增加而增强,当菌浓度达108cfu/mL时,诱抗效果最大。Y13发酵液处理3 d就已产生诱导效果,5 d诱导效果最强,可持续20 d以上。     

一株桑椹菌核病生防菌分离鉴定及其拮抗作用分析

桑椹菌核病是主要由桑实杯盘菌Ciboria shiraiana、桑椹核地杖菌Scleromitrula shiraiana和肉阜状杯盘菌Ciboria carunculoides引起的果桑毁灭性病害。采用组织分离法从健康桑椹中分离纯化获得内生细菌Wh-1,对其进行抑菌谱测定和种类鉴定;以桑实杯盘菌为靶标菌株研究Wh-1发酵滤液拮抗活性,分析拮抗机理。结果表明:Wh-1对分离自发病桑椹上的真菌具有显著拮抗作用,对桑椹核地杖菌,肉阜状杯盘菌,桑实杯盘菌的抑菌率分别为100%,100%,63.15%;基于形态学、Biolog鉴定及16S rDNA序列分析结果,将该菌株鉴定为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezens,其在PDB中振荡培养48 h,发酵滤液具有较强拮抗活性;PDA平板中发酵滤液的体积分数为5%时可完全抑制菌丝的生长;且发酵滤液热稳定性好。发酵滤液对桑实杯盘菌菌丝有致畸作用,Wh-1菌株具有脂肽基因(srfAA)、芽孢菌霉素基因(bmyB)、杆菌溶素基因(bacA)、丰原素基因(fenD)和生物素基因(bioA)脂肽类化合物合成相关功能基因。菌株Wh-1可作为开发桑椹菌核病生防制剂较为理想的候选菌株。     

杨树腐烂病拮抗细菌的筛选及其定殖研究

通过平板对峙培养,从1 013株分离于杨树干部的拮抗细菌中筛选出13株对杨树腐烂病病原菌(Valsa sordida)有较强拮抗作用的菌株;再结合发酵液的生长抑菌率测定,进一步筛选出了抑菌作用最强的JK-SH007和JK-SX001两株拮抗细菌.两拮抗菌株定殖的研究结果表明,JK-SH007、JK-SX001对杨树腐烂病病原菌的生长及孢子萌发具有较好的抑制作用,而对宿主无毒害作用,具有内生性,能在杨树体内较长期定殖,且对宿主具有显著的促生作用.     

复合功能菌群的构建及其对铅锌胁迫下蓖麻种子萌发和铅锌积累的影响

为了研究复合菌群对铅锌胁迫下蓖麻种子萌发的影响,以期为下一步微生物-蓖麻联合修复盆栽实验提供功能菌群和理论基础,从课题组内经菌肥改良后的植物根际土壤中筛选出根际促生菌,与课题组已有的菌株进行平板拮抗实验,优选测序并构建复合菌群。沙培实验考察复合菌群对铅锌胁迫下种子萌发的影响,收获后分别测定其萌发生长指标、扫描其根系形态、测定重金属富集量,并对其结果进行分析。筛选出了具有溶磷能力的真菌L14为尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum,且与实验室两株耐性菌HA、J3构建的复合菌群相互无拮抗。该复合菌群接种到基质后,能在高浓度重金属胁迫下有效促进蓖麻种子萌发及幼苗生长,同时促进其根系对重金属的富集。其中,对Pb的累积量最大可提升38.6%,对Zn的累积量最大可提升25.2%。分析结果表明:该复合菌群在铅锌胁迫下不仅能够促进蓖麻种子萌发及幼苗生长,还可以显著提高幼苗根系对重金属的吸收累积。     

10种杀菌剂对大叶黄杨坏损尾孢菌的毒力测定

采用室内生长速率法和载玻片上萌发法测定了50％多菌灵超微WP等10种供试杀菌剂对坏损尾孢菌Cercospora destructive Ravo菌落和孢子的抑菌作用。结果表明：70％甲基硫菌灵WP、30％氟菌唑WP、50％多菌灵超微WP和15％三唑酮WP等4种药剂对坏损尾孢菌菌落具有极强的毒力,70％甲基硫菌灵WP、50％腐霉利WP、30％氟菌唑WP和50％多菌灵超微WP对坏损尾孢菌孢子萌发抑制率极高。     

多粘类芽孢杆菌对木麻黄青枯病的抑菌防病作用

室内测定了商品化生物农药多粘类芽孢杆菌可湿性粉剂对木麻黄青枯病病原菌的毒力。采用打孔法结果表明,多粘类芽孢杆菌对木麻黄青枯病病原菌具有良好的拮抗作用,其抑菌圈的平均直径达到9.4 mm。采集4个品系的木麻黄小枝水培生根后进行温室盆栽,采用改进的伤根淋菌法进行接种,以只施多粘类芽孢杆菌可湿性粉剂(CK1)和只接种青枯菌(CK2)为对照,施用多粘类芽孢杆菌可湿性粉剂后接种青枯菌为处理进行实验。结果表明,在两个时间点,湛江-3的防效达到了60.8%和51.6%;湛江-2的防效达到了41.5%和40.3%;广东A14的防效达到了28.8%和23.3%,差异均显著(α=0.05);广东701-3的防效为16.3%和26.8%,差异不显著,出现此原因是广东701-3抗性强于其他3个品系。综上所述,在盆栽试验中,多粘类芽孢杆菌可湿性粉剂对木麻黄青枯病有显著的防治效果,品系本身越感病,防效越高。     

拮抗菌株XZQ-20的鉴定及对多种植物病原细菌的拮抗活性分析

利用拮抗微生物不仅能有效防治植物病原细菌,而且对环境友好。该研究中,拮抗菌株XZQ-20分离自健康杨树根际土壤,基于形态学特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析将该菌株鉴定为深层类芽孢杆菌(Paenibacillus profundus),XZQ-20具有蛋白酶活性,其对4种植物病原细菌欧美杨细菌性溃疡病菌(Lonsdalea quercina)、丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)、软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)和核桃黄极毛杆菌(Xanthomonas juglandis)均具有较强的拮抗活性,抑菌圈大小分别为(11.75±1.06)mm、(13.3±2.26)mm、(16.75±0.07)mm和(7.55±1.06)mm。此外,对拮抗菌株XZQ-20的无菌培养滤液的拮抗活性进行测定,发现其无菌培养滤液也表现出了较强的拮抗活性,对4种植物病原细菌的抑菌圈直径分别达到(8.18±0.75)mm、(7.63±0.88)mm、(8.03±0.93)mm和(8.60±0.53)mm。研究结果表明拮抗菌株XZQ-20可用作为潜在的高效防治植物病原细菌的生防制剂。     

拮抗菌株XZQ-20的鉴定及对多种植物病原细菌的拮抗 活性分析

利用拮抗微生物不仅能有效防治植物病原细菌,而且对环境友好。该研究中,拮抗菌株 XZQ- 20 分离自健康杨树根际土壤,基于形态学特征、生理生化特性和 16S rDNA 序列分析将该菌株鉴定为 深层类芽孢杆菌（Paenibacillus profundus）,XZQ-20 具有蛋白酶活性,其对 4 种植物病原细菌欧美杨细 菌性溃疡病菌（Lonsdalea quercina）、丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae）、软腐欧文氏菌（Erwinia carotovora）和核桃黄极毛杆菌（Xanthomonas juglandis）均具有较强的拮抗活性,抑菌圈大小分别 为（11.75±1.06）mm、（13.3±2.26）mm、（16.75±0.07）mm 和（7.55±1.06）mm。 此 外, 对 拮 抗 菌 株 XZQ-20 的无菌培养滤液的拮抗活性进行测定,发现其无菌培养滤液也表现出了较强的拮抗活性,对 4 种植物病原细菌的抑菌圈直径分别达到（8.18±0.75）mm、（7.63±0.88）mm、（8.03±0.93）mm 和 （8.60±0.53）mm。研究结果表明拮抗菌株 XZQ-20 可用作为潜在的高效防治植物病原细菌的生防制剂。     

油茶内生拮抗细菌Y13菌株16SrDNA序列分析及抑菌机理研究

为了确定与分析Y13的亲缘关系及其抑菌机理,以一株对油茶炭疽病有生物防治效果的内生拮抗细菌Y13为研究对象,对其16S rDNA序列进行了分析,并对其抑菌机理作了初步的研究。结果表明:菌株Y13 16SrDNA全长共1 475 bp,菌株Y13与芽孢杆菌属菌株的同源性较高,通过Clustalw,Y13菌株和B.subtilis的亲缘关系最近,最终确定Y13菌株为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌;Y13对油茶炭疽病病菌菌丝有抑制、致畸作用,且能抑制分生孢子的萌发,同时培养的滤液对热、酸碱的抑菌作用较为稳定。     

10种杀菌剂对大叶黄杨坏损尾孢菌的毒力测定

采用室内生长速率法和载玻片上萌发法测定了50%多茵灵超微WP等10种供试杀菌剂对坏损尾孢菌Cercospora destructive Ravo茵落和孢子的抑茵作用.结果表明:70%甲基硫茵灵wP、30%氟茵唑WP、50%多菌灵超微WP和15%三唑酮WP等4种药剂对坏损尾孢菌茵落具有极强的毒力,70%甲基硫菌灵WP、50%腐霉利WP、30%氟菌唑WP和50%多茵灵超微WP对坏损尾孢菌孢子萌发抑制率极高.     

油松内生细菌的分离及拮抗菌的筛选

采用组织分离法,从健康油松Pinus tabulaeformis 1 a生松针,2 a生松针,1 a生松枝韧皮部、木质部,2 a生松枝韧皮部、木质部,根等7类部位共分离出40株内生细菌。通过平板对峙法对所得菌株的拮抗性进行了初筛和复筛,得到3株对油松枯梢病拮抗作用较强的菌株。其中AM-5菌株抑菌效果最强,菌体的抑制率达66.95%,其发酵液的抑制率为27.89%;菌体对病原菌孢子萌发也有显著的抑制作用。结合形态特征、生理生化及16S rDNA同源性分析,将AM-5菌株鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。盆栽试验结果表明,AM-5菌株对油松枯梢病的防治效果显著,在预防实验中,明显降低了油松枯梢病的发病率,预防效果为64.26%;在防治试验中,防效为53.32%。     

梨干枯病拮抗菌的分离鉴定及田间防治效果

为给梨干枯病的生物防治提供参考,采用稀释涂布法,从武威梨园土壤中分离梨干枯病拮抗菌,并通过形态学与分子生物学方法对其鉴定,测定其对梨干枯病菌丝的抑制作用及其田间防治效果,揭示其生防潜力。分离出1株对梨干枯病病菌具有较强抑制效果的拮抗菌,命名为LKYHC-4,鉴定为萎缩芽孢杆菌;该菌株对梨干枯病菌丝具有显著抑制作用,抑制率为85.37%;使用拮抗菌株LKYHC-4对梨干枯病病菌进行预防及治疗处理后,其防效分别为66.7%和57.14%。故拮抗菌株LKYHC-4对梨干枯病病菌具有较强的拮抗作用,可为梨干枯病的生物防治提供菌类资源。     

人参黑斑病生防用内生拮抗菌分离鉴定及发酵浓缩液的性质

采用平板稀释法在几种中药材中分离内生拮抗细菌,结果人参根中分离到的内生拮抗细菌菌株数较多。采用平板对峙法筛选高效拮抗菌菌株,其中菌株BJ33对人参黑斑病具有很强的抑菌活性,其抑制率达到了80%。根据BJ33菌株的形态和生理生化特征以及采用16S rDNA同源性分析方法鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。BJ33菌株及发酵浓缩液对供试的6种植物病原菌菌丝生长均具有较强的抑制作用;BJ33菌株发酵浓缩液在15~35℃和pH5~11均具有较强的抑菌活性;BJ33菌株发酵浓缩液对高温、紫外线以及蛋白酶等具有较强的稳定性。