家蚕显性赤蚁(Ia)的RAPD分析

家蚕赤蚁突变基因作为标志基因在遗传分析、连锁检索和基因定位研究中发挥了重要的作用.用家蚕显性赤蚁Ia品种(09-041)与非显性赤蚁品种(08-101)杂交,经F1自交,取F2代的显性赤蚁与非赤蚁个体为材料,采取混合样品分析法进行RAPD多态性分析.通过250个RAPD随机引物,分别在显性赤蚁与非显性赤蚁中获得扩增带1 089条和1 083条,共有220个引物在2个材料中有扩增片段,其中有8个引物在显性赤蚁中扩增出多态性特异带,有2个引物在非显性赤蚁中扩增出多态性特异带,有30个引物在2个材料中无扩增产物.实验初步获得8个与家蚕显性赤蚁基因可能连锁的RAPD分子标记,为进一步的Ia基因定位、克隆及遗传分析等工作奠定了一定的基础.     

烤烟品种间香气成分差异及其性状遗传分析

以具有特殊香气的‘大白筋599’和具一般香气的‘G28’烤烟品种为材料,采用同时蒸馏萃取和GC/MS法测定了烟叶致香成分,利用常规遗传分析和RAPD法对烤烟特殊香气性状进行了遗传和分子标记探讨。结果表明:(1)测出的67种香气成分中,两品种间55种相同,12种不同。相同成分中,‘大白筋599’有25种含量高于G28。‘大白筋599’有8种特有成分,‘G28’有4种特有成分。(2)特殊香气性状在F1显性遗传,F2表现分离,且符合显性单基因遗传的3:1分离规律。(3)两品种间筛选到4个多态性引物,其扩增多态性片段可作为鉴定两品种的分子标记。用引物Y466对两品种及其F1和F2的17个单株进行遗传分析认为,扩增出的多态性片段与特殊香气性状呈连锁遗传趋势,可能是与香气性状连锁的分子标记。     

栽培绿豆V2709抗豆象特性遗传及基因初步定位

 【目的】绿豆[Vigna radiata（L.）Wilczek]是豇豆属亚洲亚属（Ceratotropis）中的一个栽培豆种,豆象是危害绿豆的重要害虫,利用分子标记对抗豆象基因进行初步定位,为该材料在绿豆育种中的利用和抗豆象基因的分离奠定基础。【方法】利用原产于印度的抗豆象栽培绿豆V2709与农艺性状优良的感豆象推广品种中绿1号（VC1973A）配制杂交组合,对杂种F2、BC1F1和F3进行遗传分析;采用BSA法,以上述F2代为定位群体,利用抗、感亲本和抗、感池筛选63个RAPD引物和113对SSR/STS引物。【结果】遗传分析结果表明该抗豆象特性由一对显性基因控制;引物筛选结果表明2个引物能在抗、感池间扩增出多态性条带,用Mapmaker EXP3.0b软件作图,将该抗豆象基因初步定位在一个RAPD标记和一个STS标记之间,遗传距离分别为11.0 cM和5.8 cM,并暂定名为Br2。【结论】本研究定位的基因标记可作为绿豆抗豆象育种分子标记辅助选择的一种工具。     

普通小麦抗条锈新种质—体克2号的抗性遗传分析

对普通小麦抗条锈新种质-体克2号进行了遗传学分析和RAPD标记研究。结果表明,体克2号对条中32号生理小种的的抗性是由1对显性基因控制的。RAPD分析筛选出重复性强、在抗病亲本和抗性基因池稳定出现的特异DNA片段2个,即引物S369的扩增片段和引物S1397的扩增片段,其长度分别约为770bp和1400bp。利用Mapmaker3．0对引物S369扩增出来的特异片段与目的基因的遗传连锁性进行分析,该多态性差异与目的基因的连锁距离为10．4cM。     

与大豆疫霉根腐病抗性基因Rps1-c连锁的分子标记研究

以大豆疫霉根腐病近等基因系Williams和Williams79为材料,对它们的基因组DNA进行RAPD分析,160个10-nt随机引物中,只有引物OPQ-04在Williams79中扩增出特异条带,在Williams中未扩增出,且3次重复均获得一致结果。经进一步检测在其它抗病材料中也出现该特异条带,推测该特异条带与大豆抗疫霉根腐病抗性基因Rps1-c连锁,得到显性RAPD标记OPQ-04700。     

家蚕RAPD的多态性与稳定性分析

从家蚕品种大造和C108及其F1,F2的后部丝腺提取的基因组DNA通过的RAPD扩增,在477个随机引物中,85.9%的引物在家蚕基因组有稳定的扩增产物,总扩增片段5155条,每个引物扩增片段1-23条,平均为12.6条,多态性片段数共1496条,占两品种中总片段数的29.0%,经多次重复及反复验证发现,只要严格控制扩增反应条件及保证基因组DNA和试剂等不污染,则能检测到稳定的DNA多态性片段,从而保证其稳定性与重复性。     

利用RAPD和ISSR 2种分子标记鉴定西瓜杂交种的遗传纯度

为了鉴定西瓜杂交种抗病苏蜜和苏蜜5号的遗传纯度,利用RAPD和ISSR 2种分子标记技术对F1杂种及其相应亲本的基因组DNA进行了分析。结果显示:在抗病苏蜜杂交种的分析中,对450个随机RAPD引物进行了筛选,其中139个引物产生了235个多态性条带,平均每个引物扩增出了3.12个条带,多态率为16.7%。139个多态性引物中,3个引物产生了母本特异标记,4个引物产生了父本特异标记,2个引物产生了共显性标记。引物JAASRP388的扩增图谱显示产生了1个母本特异标记JAASRP3881200及2个父本特异标记JAASRP3882010、JAAS-RP388500。引物JAASRP410的扩增图谱显示也产生了1个母本特异标记JAASRP410625及2个父本特异标记JAAS-RP4102000、JAASRP4101000。在杂交种苏蜜5号及其亲本的分析中,100个RAPD引物产生了325条扩增带,其中27个RAPD引物成功地扩增出了37个多态性条带,平均多态率为11.38%。在27个多态性RAPD引物中,4个引物产生了母本特异标记,1个引物产生了父本特异标记。此外对62个ISSR引物进行了检测,45个引物成功地产生了188个扩增条带,每个引物平均产生了4.18个条带,15个为多态性引物产生了23条多态性带,平均多态率为12.23%。在ISSR检测中,只发现了2个引物能产生母本特异条带。研究结果说明,不管是1个母本特异引物和1个父本特异引物组合还是利用1个共显性引物都是杂交种种子质量检测过程中一个非常有效的工具。     

石榴品种资源的RAPD亲缘关系分析

以36份石榴品种(类型)为研究对象,用RAPD技术对其亲缘关系进行分析。从128个随机引物中筛选出12个重复性好、条带清晰的多态性引物,并用这些引物对36份材料进行RAPD扩增,共扩增出111条谱带,平均每个引物9.25条。12个引物扩增出不同的多态性条带,多态性程度达到72.07%。用Statistic分析软件计算出的遗传距离在0.027~0.441之间,并对36份材料进行了UPGA法聚类,RAPD结果的亲缘关系树状图显示,36个品种或类型基因背景较复杂,说明了我国的石榴栽培品种有丰富的种质资源。     

V型小麦细胞质雄性不育“三系”及杂交种线粒体DNA的比较研究

以V型小麦细胞质雄性不育系及相应的保持系、恢复系以及其杂种F1为材料,用ISSR、SRAP、RAPD分子标记技术对它们的线粒体DNA进行了比较分析。结果如下:(1)153个SRAP引物组合中139个组合扩增出了多态性,9个组合扩增出不育系特有而保持系、恢复系、F1均缺失的片段,3个组合扩增出不育系特异缺失的片段。(2)92个ISSR引物中45个扩增出了多态性,筛选到了6个不育系特有而保持系、恢复系及杂种F1均缺失的片段。(3)288个RAPD引物中281个扩增出了多态性,4个引物扩增出不育系特有的片段,3个引物扩增出不育系特异缺失的片段。在对线粒体DNA进行分析时,SRAP比ISSR多态性好,比RAPD稳定性好。     

利用RAPD和ISSR分子标记对西瓜作图亲本的多态性分析

以西瓜为材料,对基因组DNA的RAPD和ISSR分析体系中的Mg2+、dNTPs和引物浓度进行了优化.筛选出的RAPD优化体系(20 μl)为:引物0.4 μmol/L,dNTPs 200 μmol/L,Mg2+ 2.0 mmol/L,DNA 20 ng,1 × Buffer缓冲液,Tap 酶1.0 U;ISSR优化体系(16 μl)为:引物0.25 μmol/L,dNTPs 160 μmol/L,Mg2+1.0 mmol/L,DNA 20ng,1×Buffer缓冲液,Taq酶0.64 U.以远生态西瓜品种自交系64+1⊕ -3和6⊕-2、及23⊕-1和4-1⊕-2为作图亲本,利用筛选好的RAPD和ISSR体系对作图亲本的多态性进行分析.结果表明,在作图亲本64-1⊕-3和6⊕-2中,181个RAPD引物中有11个引物不能有效扩增,其余170个引物产生了525条扩增带,平均每个引物在基因组中可检测到3.08个基因位点,其中可检测出多态性位点的引物有55个,产生了77条多态性扩增带,平均多态率为14.67%;62个ISSR引物中有17个引物不能有效扩增,其余45个引物产生了188条扩增带,平均每个引物产生了4.18条扩增带,15个多态性引物可以在双亲间检测到多态性位点23个,平均每个多态性引物能扩增出1.53个多态性位点,多态率为12.23%.在作图亲本23⊕-1和4.1⊕-2中,利用499个RAPD引物进行了基因组的扩增,其中43个引物为非有效引物,456个引物产生了1 431条带,平均每个引物产生3.14条带,142个多态性引物检测到了240个多态性基因位点,平均多态率为16.77%.表明西瓜作图亲本问的遗传背景较狭窄.     

女贞不同种质材料基因组 DNA 的提取及 RAPD 引物筛选

[目的]提取女贞不同种质材料的基因组DNA,并筛选RAPD引物。[方法]采用改良CTAB法提取女贞基因组DNA,并以此种方法提取的女贞基因组DNA为模板,对RAPD引物进行PCR扩增,筛选有效引物。[结果]筛选出21个多态性丰富、条带清晰且重复性好的有效引物,经检测所获得的基因组DNA条带清晰,且OD260／DD280在1．8左右。用筛选出的21个有效引物对126份女贞种质材料进行RAPD—PCR扩增,均可获得带型丰富且清晰可辨的DNA指纹图谱。[结论]该方法为快速和准确地应用RAPD方法分析女贞种质材料的遗传多样性提供了依据。     

银杏雄株种质资源遗传多样性研究

[目的]分析银杏雄株种质资源的遗传多样性,为其保存和育种创新奠定基础。[方法]采用改进的CTAB法提取来自11个省的银杏雄株叶片的基因组DNA,随机引物经初筛和复筛后用于RAPD扩增,并运用POPGENE软件分析银杏雄株种质资源的遗传多样性。[结果]从100多对随机引物中筛选出12对扩增带清晰、重复性和多态性好的引物,将其用于RAPD扩增和遗传多样性分析。利用筛选出的12对RAPD引物对40个样品进行PCR扩增,得到96条清晰条带,其中41条有多态性。银杏雄株种质资源的平均有效等位基因数为1.6440,平均基因多样度为0.3752,平均Shannon信息指数为0.5562。[结论]银杏雄株种质资源具有丰富的遗传多样性,对其有效保存和合理利用具有重要意义。     

RAPD分子标记技术在甜高梁基因组研究中的应用

[目的]应用RAPD技术对甜高粱丝黑穗病基因进行分子标记研究。[方法]以抗病亲本7050B与感病亲本TX622B杂交后的F2代以及抗病甜高粱品种8113和感病甜高粱品种8101为试材,用CrAB法提取DNA,用RAPD分子标记技术对其DNA进行多态性扩增与初步分析,同时对琼脂糖凝胶电泳检测体系进行优化。[结果]CTAB法适宜提取DNA。在对抗病亲本7050B与感病亲本TX622B杂交后的F1代进行RAPD标记时,用60个引物进行筛选,其中27个引物扩增出了多态性谱带;应用20个具有多态性扩增谱带的引物对抗病甜高粱品种8113和感病甜高粱品种8101进行RAID分析时,共有7个引物扩增出了差异谱带,分别为S56、S66、S67、S70、S72、S75、S78。[结论]该研究为甜高粱优良品种的培育提供科学基础。     

7种芸香科植物的RAPD分析

[目的]构建芸香科植物7个种12个材料的聚类分析树状图,为芸香科植物系统学的研究提供分子水平上的证据。[方法]以芸香科植物7个种12个材料为研究对象,利用RAPD技术对其亲缘关系进行分析。[结果]在建立适合芸香科植物PCR-RAPD反应体系的基础上,从21条随机引物(10 mer)中筛选出10个,对所有供试材料进行扩增,共获得10张DNA指纹图谱,85条DNA谱带,其中84条为多态带,多态性谱带比例为98.82%。[结论]建立了基于RAPD的芸香科植物亲缘关系树状图,该结果与经典的芸香科植物的起源、分类基本一致。     

RAPD和ISSR标记检测黄麻属遗传多样性的比较研究

应用RAPD和ISSR标记,分别对来自非洲地区和中国的15份黄麻野生种(10个种),以及来自中国、印度、越南、日本等地的12份黄麻栽培品种基因组DNA的遗传多样性进行检测。结果表明:(1)参与分析的所有RAPD和ISSR引物都对DNA模板浓度的梯度变化不敏感,对比RAPD和ISSR在PCR反应中的稳定性,ISSR优于RAPD;(2)25个RAPD和ISSR引物分别扩增出329条和283条带,多态比率分别为89.36%和92.5%,显然,ISSR检测出的多态性条带的能力优于RAPD;(3)RAPD和ISSR标记检测同组供试材料种间或种内的遗传相似性系数(GS)范围,分别为0.48～0.98和0.33～0.97,ISSR检测出种间遗传多样性的分辨力较RAPD为高,但两者GS相关系数高达0.955;(4)RAPD和ISSR标记的分子聚类获得了趋势相近,但不完全相同的聚类树,两种标记均能准确地把原始黄麻野生种与栽培种中的长果种和圆果种及其近缘野生种聚在不同的种群中,分子分类结果与传统经典分类相符,并揭示出种间或种内基因型的遗传差异与亲缘关系,而ISSR比RAPD能检测到种间更高的遗传差异性;(5)两种标记均可揭示种间与种内的遗传多样性及其进化的亲缘关系,可为进一步开展黄麻分子辅助育种和起源与进化研究提供有价值的理论依据。     

半夏不同变异类型的RAPD分析

为了利用RAPD技术研究半夏的各种变异类型。以栽培多年的6个不同变异类型的半夏为实验材料,取每一变异类型中的5~10株新鲜叶片,提取总基因组DNA。从100条随机引物中筛选出17条重复性好、条带清晰、能体现半夏性状变异类型差异的引物进行RAPD扩增。RAPD分析结果表明,17个RAPD引物扩增出了81条带,其中55条为多态带,占67.9%,表明半夏不同变异类型间存在分子水平的遗传差异。该研究为半夏的品种改良与栽培奠定了基础。     

甘蓝型油菜核不育基因的PCR标记初报

用Ｏｐｅｒｏｎ公司ＯＰＡ－０１－ＯＰＪ－２０ ２００个１０个碱基对随机序列引物对甘蓝型油菜隐性核不育涪优ＡＢ,显性核不育３７ＡＢ,广恢系９８－８０２６,９８－３７４９及Ｆ１材料基因组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ扩增的结果,共获得１３３４条扩增带,平均每引物扩增带约６．７条扩增带表明油菜存在较为丰富的遗传多样性。引物ＯＰＡ－０５,ＯＰＡ－１２,ＯＰＡ－１３,ＯＰＡ－２０等分别扩增出了大小不同的多态性带,初步认     

辣椒种质资源的遗传多样性分析

利用RAPD分子标记技术对90份辣椒种质资源遗传多样性进行分析,从200个RAPD引物中筛选出10个引物分别对供试材料的DNA进行扩增,共扩增出70个位点,其中多态性谱带38条,多态性程度为54.3％.平均每个引物产生7条多态性谱带,每个引物可扩增出4～9条,谱带大小为100～2000 bp.对RAPD结果进行聚类分析...     

甘蓝型油菜细胞质雄性不育恢复基因的分子标记及定位

以甘蓝型油菜恢复系CP015和不育系77A构建的F2群体为供试材料,运用RAPD,SSR和AFLP 3种标记技术,对甘蓝型油菜恢复基因进行分子标记和图谱定位。在260条RAPD引物、185对SSR引物、58对AFLP引物中,在两亲本间筛选多态性高的RAPD引物121条,SSR引物128对,AFLP引物组合26对,进一步通过BSA法筛选,获得了与甘蓝型油菜恢复基因Rf连锁的1个RAPD标记S1009-750和1个AFLP标记E5M11-150,标记与基因Rf之间的遗传距离分别为4.9cM和8.6cM。