用ELISA检测山羊关节炎脑炎病毒抗体

以差速离心，结合ＳＤＳ处理制备ＥＬＩＳＡ抗原，用含０．０２％ＮａＮ３的碳酸盐缓冲液作抗原包被液，不加任何封闭剂，待测血清以含５％犊牛血清和０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０稀释，检测９２２份山羊血清的ＣＡＥ抗体，并与免疫扩散试验（ＡＧＩＤ）比较，提高检出率约一倍并减少漏检     

用ELISA法检测犬细小病毒抗体

本文采用吸附豚鼠犬细小病毒（ＣＰＶ）多克隆抗体的微量板，进行间接酶免疫测定（ＥＬＩＳＡ）检测犬血清中的ＣＰＶ抗体。结果，ＥＬＩＳＡ抗体效价比血凝抑制抗体（ＨＩ）效价高，与ＨＩ效价的相关系数ｒ＝０．７８。     

ELISA双抗体夹心法测定兔出血症病毒抗原

自刘胜江等报道兔出血症病毒(RHDV)以来,国内许多学者对该病毒的各种生物学特性进行了广泛研究,并取得了显著进展。但该病毒在各脏器组织中的动态分布尚未见报道。为此,我们应用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法对其进行了研究,取     

一种检测乙型脑炎病毒抗体阻断ELISA的建立及其初步应用

流行性乙型脑炎是由日本脑炎病毒(JEV)引起的蚊媒传播人畜共患传染病,严重危害人类和猪、马等动物的健康。为建立检测多种动物血清中JEV抗体的ELISA,应用重组囊膜蛋白和辣根过氧化物酶标记的JEV单克隆抗体建立了检测JEV抗体的阻断ELISA。结果显示:通过对100份JEV抗体阴性猪血清的检测结果进行统计学分析,确定阻断ELISA的判定标准:阻断率(PI)≥34%时判定为阳性,PI≤25%时判定为阴性,25%PI34%时判定为可疑。该阻断ELISA与其他常见猪病毒病抗体阳性血清无交叉反应;批内和批间重复试验的变异系数均小于5%;与商品化ELISA试剂盒的对比检测表明,敏感性为98.5%、特异性为94.3%,两者的符合率为97.2%。应用该阻断ELISA对临床收集的猪、牛和羊共515份血清样品进行检测,JEV抗体阳性检出率分别为74.5%、13.3%和9.2%,抽样的血清中和试验结果与阻断ELISA检测结果的符合率为100%(9/9)。本研究成功建立了可适用于猪、牛和羊临床血清JEV抗体检测的阻断ELISA方法。     

用斑点ELISA和间接ELISA检测蓝舌病病毒抗体的比较

目前广泛应用免疫扩散(ID)试验检测蓝舌病毒(BTV)群特异抗体,但敏感性较差。Manning和Chen(1980)建立的ELISA检测BTV抗体有很高的敏感性。而斑点ELISA(DIA)是一种快速、简便的另一种酶免疫检测方法。其敏感性与ELISA     

用ELISA监测牛呼吸道疾病病毒的血清抗体

用酶联免疫吸附试验检测牛传染性鼻气管炎、副流感3型、3型腺病毒和牛呼吸道合胞体病素抗体。成对的血清样品来自弱毒疫苗接种的犊牛。试验结果表明:酶联免疫吸附试验是一种快速、敏感、简单的检测方法、可作为呼吸道病毒免疫学研究的有用手段。     

6种狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的比对

为评价不同品牌狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的有效性,以确保实验室检测结果更加客观可靠,采集85份北京市犬临床血清样本,分别用荧光抗体病毒中和试验(FAVN)和6种品牌试剂盒(包括国产、进口,阻断法、间接法)进行抗体检测。以FAVN检测结果为标准,通过Kappa一致性检验、χ2检验及诊断效能评价,比对分析6种品牌试剂盒的检测效果。结果显示:6种试剂盒的一致性有差异,且整体一致性不高;3种试剂盒的检测结果与FAVN无统计学差异(P0.05),另3种存在差异(P0.05);2种试剂盒的灵敏度及符合率较好,均在90%左右,2种试剂盒较差,在70%左右,剩余2种在80%左右。结果表明:不同品牌的商品化试剂盒检测效果存在差异,且这种差异与品牌来源及试剂盒类型无明显相关性。因此,建议在实际监测工作中,以标准方法为参考,对商品化试剂盒进行一致性、差异性检验和诊断效能评价,将检测效果作为筛选试剂盒的首要考量因素,以确保实验室检测结果客观准确。     

猪瘟病毒5种ELISA抗体检测试剂盒的比较

[目的]比较猪瘟病毒（CSFV）5种ELISA抗体检测试剂盒的使用效果。[方法]利用细胞中和试验制备的标准质控血清,制备不同猪瘟抗体效价的阳性血清70份和阴性血清20份,对5种试剂盒的敏感性、特异性和符合率进行比较。利用该5种试剂盒对不同年龄段猪群血清中猪瘟抗体水平进行检测。[结果] 5种试剂盒的敏感性为85.7%-100%,特异性均达到100%,符合率为88.9%-100%。不同年龄段猪血清样品中,5种试剂盒检测结果不尽相同。[结论]猪瘟抗体效价的高低对5种试剂盒检测结果的一致性有一定影响,尤其是针对弱阳性样品时,IDEXX猪瘟抗体试剂盒和荷兰赛迪公司的猪瘟抗体试剂盒检测效果相对较好,为猪瘟免疫检测工作提供了一定依据。     

4种狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的评价

为评价国产狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的性能,选择4种国产品牌ELISA抗体检测试剂盒,分别检测463份已用荧光抗体病毒中和试验（FAVN）测知狂犬病病毒抗体效价的犬血清,用Kappa检验和配对卡方检验评价ELISA试剂盒与FAVN检测结果的一致性和差异性,计算ELISA试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、符合率和重复性等,并比较4种试剂盒的使用范围、样品稀释倍数等参数。结果显示：经Kappa检验,4种试剂盒与FAVN一致性均为弱;经配对卡方检验,A、B试剂盒与FAVN检测结果的差异不显著（P> 0.05）,而C、D试剂盒差异显著（P <0.05）。诊断敏感性,D试剂盒最高,B试剂盒最低;4种试剂盒诊断特异性均较低,为29.5%～57.7%;各试剂盒符合率相当,为71.3%～72.8%。综合敏感性、特异性、重复性等考量因素,得出C试剂盒更能满足免疫后抗体检测需求,A试剂盒也较好,两者可作为候选试剂盒。结果表明,4种国产狂犬病病毒ELISA试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、批间稳定性等性能需进一步提高,以满足基层免疫抗体监测需求。     

猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测方法的建立与初步52用

本研究利用原核表达的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为标准抗原蛋白建立PCV2抗体检测方法,同时对建立的检测方法的相关条件进行了优化.通过优化确定抗原的最佳包被浓度为10μg/mL,血清的最佳稀释度为1:160,最佳封闭试剂为10%牛血清,二抗的使用浓度为1:1000,血清及二抗的最佳反应条件为37℃孵育60 min,底物的最佳反应条件为37℃反应10 min,cutoff值为0.25.通过批内及批间重复性的评价,变异系数均小于0.1,表明本检测方法具有较高的可重复性.与标准的检测试剂盒相比,检测临床样本时,本检测方法与对照试剂盒检测结果符合率为91.7%.结果表明,建立的检测方法可用于临床PCV2抗体的检测.     

鸭坦布苏病毒间接ELISA抗体检测试剂盒的初步应用

为了开发鸭坦布苏病毒间接ELISA抗体检测试剂盒,研究利用灭活纯化的鸭坦布苏病毒(DTMUV)FX2010株作为包被抗原,由瑞普(保定)生物药业有限公司连续制备了5批次鸭坦布苏病毒间接ELISA抗体检测试剂盒中试产品。该试剂盒对禽流感病毒、鸭瘟病毒、鸭细小病毒、Ⅰ型鸭肝炎病毒、鸭呼肠孤病毒阳性血清和5份SPF阴性质控血清进行的检测均无交叉反应,表明具有较好的特异性。批内和批间重复性试验的变异系数为1.5%~4.2%和2.2%~5.3%,表明产品具有很好的稳定性。应用该试剂盒及中和试验对300份疑似DTMUV阳性血清样品进行检测,结果显示:二者阳性样品符合率为90.12%,阴性样品符合率为93.6%,总符合率为92.7%。研究结果表明,该试剂盒具有操作简便、敏感性高和特异性强的特点,可以为鸭坦布苏病毒病的快速诊断及其流行病学调查提供有力的工具。     

犬狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

用狂犬病毒单克隆抗体预包被酶标板,将纯化的狂犬病毒作为检测用抗原,利用捕获包被法建立了间接ELISA法用于犬狂犬病病毒抗体的检测。通过优化ELISA条件,研制试剂盒并应用于犬狂犬疫苗的免疫效果检验。利用研制的试剂盒与RFFIT、商品化同类试剂盒对30份犬血清进行平行检测,总符合率分别为90%和93.33%,与其它几种常见犬病毒抗体阳性血清无交叉反应。试剂盒批内、批间变异系数分别为1.45%～5.79%和2.35%～7.21%,2～8℃保存12个月稳定。基于用单抗预包被后再包被检测抗原,本试剂盒检测样品抗体的灵敏度和稳定性得以显著提高,因此适合于不同来源狂犬疫苗人工免疫犬血清的RV抗体水平监测。     

两种蓝舌病病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较

为验证昆明海关检验检疫技术中心等单位联合研发的蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒(YN BTVB-ELISA)的临床适用性,将YN BTV B-ELISA检测试剂盒与法国ID.VET公司研制的蓝舌病病毒ELISA抗体检测试剂盒(ID.VET C-ELISA)进行比对检测试验。本试验对1 278份牛羊血清进行比对检测,另外对1份已知背景的阳性血清倍比稀释后进行检测,比较两种试剂盒的敏感性。结果显示:YN BTV B-ELISA检测试剂盒与ID.VET C-ELISA试剂盒的符合率、相对敏感性、相对特异性分别是99.92%、99.63%、100%;将两者一致性用Kappa值表示,Kappa=0. 998;YN BTV B-ELISA、ID.VET C-ELISA检测阳性血清效价的最低稀释倍数分别是1:128、1:16。试验表明,YN BTV B-ELISA检测试剂盒与ID.VET C-ELISA检测试剂盒的符合率、相对敏感性、相对特异性均较高,并且YN BTV B-ELISA检测试剂盒敏感性更高,在蓝舌病病毒抗体检测中具有良好的实用价值。     

6种非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较

为了比较市场上国产及进口非洲猪瘟病毒(ASFV)ELISA抗体检测试剂盒的产品质量和使用效果,本试验对B、C、D三种进口试剂盒和A、E、F三种国产试剂盒进行敏感性、特异性和重复性比较。结果显示,试剂盒B、D、E、F分析敏感性均为1∶512;试剂盒C分析敏感性为1∶256;试剂盒A分析敏感性为1∶128;诊断敏感性比较结果为试剂盒B>试剂盒D、F>试剂盒E>试剂盒C>试剂盒A;6种试剂盒对7份特异性质控血清的检测结果均为阴性,表明6种试剂盒均具有排除潜在交叉反应的病原抗体的能力;诊断特异性比较结果为试剂盒A、C、D>试剂盒F>试剂盒E>试剂盒B;批内重复性结果显示,6种试剂盒的批内变异系数(CV%)均在15%以内。结果表明,非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测国产试剂盒与进口试剂盒的敏感性、特异性和批内重复性相差无几,国产试剂盒的兴起解决了以往过度依赖昂贵的进口试剂盒的问题,国产化替代进程在不断加速。     

用ELISA检测猪细小病毒(PPV)血清抗体

采用差速离心、透析、聚乙二醇(PEG)浓缩方法纯化猪细小病毒(PPVDK7113)制备抗原。用纯化的PPV抗原包被聚苯乙烯微量反应板，建立了检测PPV血清抗体的间接ELISA。抗原最佳包被浓度为6．3μg/ml，被检血清最佳稀释度为1：200。用建立的ELISA检测山东、东北、广东等地的426份血清，结果阳性率为36．2％。与华中农大病毒室提供的猪细小病毒乳胶凝集试验试剂盒相比，其结果符合率为98．6％。通过阻断试验、交叉试验，说明本方法在特异性上达到了较为满意的结果，且易于操作，适用于血清学定性诊断、检疫和大规模的血清流行病学调查。