杜仲愈伤组织诱导及胚性愈伤组织的判别

为探索杜仲胚性愈伤组织诱导的条件,建立杜仲体细胞胚胎发生初步体系,以杜仲幼嫩叶片和未成熟合子胚为外植体、MS为基本培养基,探究外源激素配比、未成熟合子胚发育阶段与基因型对愈伤组织诱导的影响,并从形态学和细胞学对愈伤组织进行胚性的判断。试验结果表明：4种不同激素配比的培养基诱导出的叶片愈伤组织在形态上具有差异,MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L和MS+ 2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L有利于叶片胚性愈伤组织诱导;在培养基MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L上,以未成熟合子胚为外植体诱导出4种类型愈伤组织,其中圆球形和颗粒型突起的愈伤组织具有胚性;未成熟合子胚采集时间对愈伤组织诱导率具有显著差异,6月14日采集的外植体愈伤诱导率最高,不同基因型差异不显著。     

糯玉米的成熟胚培养

以糯玉米成熟胚为外植体作离体培养,研究在培养基中添加植物激素,硝酸银及有机物等对玉米愈伤组织的诱导和胚性愈伤继代生长的影响。结果表明：在诱导培养阶段,N6+6-BA 0.2mg/L+2,4-D 2mg/L的培养基诱导率最高,愈伤质量好;在继代培养阶段,MS+6-BA 0.2mg/L+2,4-D 2mg/L +AgNO310mg/L或CW (Coconut Water) 10%的培养基可改善胚性愈伤的质量。     

洪平杏体细胞胚胎发生初探

以洪平杏(Armeniaca hongpingensis Yu et Li)不同取样时期的不同外植体进行愈伤组织的诱导,研究发现洪平杏开花11周左右的去子叶胚和子叶较容易诱导出愈伤组织,污染率低,诱导率高。不同外植体愈伤组织诱导能力大小依次为去子叶胚=子叶>未成熟胚>花药>嫩叶叶柄>嫩叶叶片。以洪平杏子叶为外植体诱导体细胞胚胎发生,诱导子叶愈伤组织的最佳培养基是MS+0.5 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA,愈伤诱导率为(97.04±2.31)%;胚性愈伤组织诱导的培养基为MS+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA;体细胞胚胎增殖的培养基为MS+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA+0.2 g/L水解酪蛋白。     

不同品系橡胶树花药愈伤诱导和体胚发生研究

为建立橡胶树不同品系的体胚发生和植株再生体系,为不同品系橡胶树良种生产奠定基础。以橡胶树优良品系‘热研106’、‘热试59’、‘热试62’的花药为材料,采用正交设计,对不同品系、不同植物生长调节剂配比培养基的花药愈伤和体胚诱导效果进行了研究。[结果]结果表明：3个品系的愈伤诱导率和体胚诱导效率差异明显,同一品系不同培养基的愈伤诱导率和体胚诱导效率差异明显;愈伤诱导培养基中的植物生长调节剂对下一阶段的体胚诱导有明显影响。根据本研究,‘热研106’的花药愈伤诱导最佳浓度组合为2,4-D 1 mg/L+NAA 2 mg/L+KT 1 mg/L,‘热试59’的花药愈伤组织诱导最佳浓度组合为2,4-D 0.5mg/L+NAA 1 mg/L+KT 1 mg/L,‘热试62’的花药愈伤组织诱导最佳浓度组合为2,4-D 1 mg/L+NAA 1 mg/L+KT 1 mg/L。‘热试62’的体胚发生最佳浓度组合为KT 3 mg/L+NAA 0.05 mg/L+GA3 0.05 mg/L+6-BA 0.5 mg/L。[结论]本研究获得了不同品系的愈伤诱导和体胚发生最佳培养基组合,为多品系橡胶树花药植株再生体系的建立奠定了基础。     

甜瓜松散型胚性愈伤组织诱导

为建立甜瓜松散胚性愈伤组织再生体系，给分子标记辅助育种、转基因育种、诱变育种等新型的育种技术提供优质材料，以甜瓜成熟叶片为外植体，调节培养基中激素、蔗糖浓度以及愈伤组织继代次数诱导甜瓜松散型胚性愈伤组织。结果表明，在2,4-D的作用下叶片能诱导出愈伤组织，在MS+0.1 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2,4-D+20 g/L蔗糖的培养基上，可以获得结构松散、质地较软呈黄绿色的愈伤组织；诱导松散型愈伤组织最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+30 g/L蔗糖，经过3次继代后可以获得生长速度较快，结构松散、质地较硬呈黄绿色的松散型愈伤组织；在MS+0.25 mg/L 6-BA+0.25 mg/L 2,4-D+40 g/L蔗糖的培养基上愈伤组织胚性化最好，继代5次，可获得结构松散、质地较硬，生长速度较快的松散型胚性愈伤组织。     

实验设计在优化水稻愈伤培养基中的应用

以同源四倍体双胚苗水稻DER 10-04-01成熟种子为试验材料进行无性系诱导,统计愈伤组织的诱导率、平均愈伤指数和愈伤组织的生长率.运用田口设计方法分析培养基中2,4-D,NAA和NOA不同的浓度配比对愈伤组织诱导率、生长率和平均愈伤指数的影响,由此获得最适于试验材料愈伤组织诱导和培养的优化组合.试验结果表明,2,4-D,NAA和NOA均对愈伤组织的诱导率、平均愈伤指数和生长率有一定的影响,其最优培养组合(MS +2,4-D 2 mg/L+ NAA2 mg/L+ NOA 3 mg/L)在无性系诱导和培养中有一定的参考价值.     

彰武松离体培养初步分析

以彰武松休眠芽和次年新梢为外植体,初步建立彰武松离体培养研究体系。结果表明:以当年发的新梢作为外植体,经1.5%H₂O₂预处理消毒10 min,75%乙醇30 s,0.1%Hg Cl₂消毒6 min消毒效果最好;接种在DCR+6-BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L培养基中,能够诱导外植体顶部长出幼嫩的2针1束针叶,且生长旺盛,颜色鲜绿,活力强,诱导率达48.7%。以彰武松针叶为外植体进行体胚诱导,将消毒后的针叶接种在DCR+2,4-D 5 mg/L+NAA 5 mg/L的培养基中培养,能够产生愈伤组织,愈伤组织诱导率为100%,获得的愈伤组织为非胚性愈伤组织。     

油梨愈伤组织诱导及分化研究

摘要：[目的]研究不同激素及外植体类型对‘哈斯’油梨（Persea Americana Mill.cv.Hass）愈伤组织诱导及分化的影响,筛选最佳诱导条件和外植体。[方法]通过间接器官发生途径。主要探讨（1）单一激素萘乙酸（1-Naphthylacetic acid,NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-dichlorophenoxy acetic acid,2,4-D）;6-苄氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine,6-BA）分别与2,4-D和NAA 结合时对‘哈斯’油梨叶片愈伤组织的诱导效应。（2）不同外植体（叶片、叶柄、茎尖、茎段）在相同条件下（基本培养基：MS+1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.1NAA mg/L）的愈伤组织诱导效应。（3）单一激素 6-BA（或与NAA结合）对油梨愈伤组织芽分化的效应。[结果]结果表明：以MS为基本培养基,（1）添加1.0 mg/L 2,4-D/NAA,其诱导效果最佳,诱导率分别为45.3%和20.2%;但NAA诱导的愈伤质地较佳。（2）1 mg/L NAA与1.0 mg/L 6-BA结合,诱导效果较好,其诱导率最高可达84%。（3）诱导愈伤组织的最适外植体为茎段,其诱导率≥72.8%。叶柄次之,叶片和茎尖较差。[结论]综上,不同激素种类及其浓度和外植体类型对‘哈斯’油梨愈伤组织诱导影响显著。最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂。愈伤组织诱导最佳外植体为茎段,但诱导形成的愈伤组织难以分化出芽。     

不同诱导条件对尾巨桉愈伤组织及体胚诱导的影响

本研究以尾巨桉无性系(32-29)无菌苗茎段作为外植体,进行组织培养及植株再生研究,通过优化不同浓度的植物生长调节剂组合以及LM、1/2LM以及MS不同培养基和不同浓度蔗糖溶液、不同温度的预处理,探讨尾巨桉胚性愈伤组织诱导的适宜培养基和培养条件。结果表明,在添加了1.5 mg/L 2,4-D与1.0 mg/L6-BA的改良1/2LM培养基上,茎段外植体培养6 d后愈伤组织诱导率达96%以上。将愈伤组织接种在0.01 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA激素组合的培养基中体胚诱导率最高可达到19.5%。本研究为尾巨桉胚状体诱导及植株再生提供了借鉴与参考。     

降香黄檀愈伤组织培养与植株再生研究

为了实现降香黄檀工厂化快速繁殖和扩大栽培,并为降香黄檀抗寒基因导入打下一定的基础,以降香黄檀无菌实生苗茎段、叶片、根尖为外植体,MS为基本培养基,对各器官愈伤组织诱导与分化的最适培养基成分进行了研究。结果表明,可从降香黄檀无菌实生苗茎段、叶片、根尖成功地进行愈伤组织培养和植株再生。茎段、叶片、根尖诱导愈伤组织的最适培养基分别为1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L、1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L和1/4MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L;茎段、叶片、根尖的愈伤组织诱导丛生芽最适培养基分别为1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 4.0 mg/L、1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 3.5 mg/L和1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 3.5 mg/L;茎段、叶片、根尖来源的单芽,其最佳生根培养基分别为MS+NAA 1.5 mg/L、MS+NAA 1.0 mg/L和MS+NAA 2.0 mg/L。比较茎段、叶片与根尖的愈伤组织诱导率、丛生芽诱导率和单芽生根率,得出以无菌实生苗根尖作为外植体是降香黄檀愈伤组织培养和植株再生的最佳选择。     

安祖花愈伤组织再生体系的建立及染色体检变

试验以安祖花幼嫩叶片和无菌苗叶柄为外植体,通过愈伤组织诱导途径,建立快速高效的安祖花再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片和叶柄愈伤组织的培养基分别为1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D和1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D;诱导出愈伤组织在1/2MS+2.0 mg/L KT+0.1 mg/L NAA培养基上能很好的分化不定芽苗;1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基可对再生芽实现增殖与复壮;最适宜的生根培养基为1/2MS+0.05 mg/L NAA。试验通过观察安祖花继代过程中愈伤组织细胞染色体变异的情况,发现随着继代次数的增多染色体变异细胞的频率也随之上升,并且染色体变异多为非整倍体变异。     

石刁柏幼胚胚状体发生与细胞学研究

以3个来自国外的石刁柏品种(C.IL,PURPLE和APOLLO)为试材,研究不同基因型以及培养基中添加2,4-D、KT、6-BA和NAA等生长物质对石刁柏幼胚胚状体发生的影响.结果表明,幼胚在MS 2,4-D 1.0 mg/L KT 0.5 mg/L 6-BA 2.0 mg/L培养基中可直接诱导产生体细胞胚.降低2,4-D的浓度,将诱导产生的体细胞胚组织块继代培养2～3次可诱导产生出米黄色颗粒状的胚性愈伤组织,继而有胚状体的发生.胚性细胞继续分裂形成多细胞原胚,经球形胚、梨形胚、长形胚、子叶分化期到成熟胚,其发生的胚状体与单子叶合子胚形成具有相似的过程.     

总状绿绒蒿组织培养再生体系的建立

本研究以总状绿绒蒿(Meconopsis racemosa)的种子、无菌苗的根及生长点为材料,以2,4-D、NAA、6-BA设置不同的激素配比,以建立其组织培养快繁体系。结果显示,用0.1%升汞溶液为消毒剂,5.5 min为最佳的消毒时间,此时的种子发芽率为56.7%;愈伤组织诱导培养：以种子为外植体诱导愈伤,MS+0.6 mg/L 2,4-D为最佳的培养基。以无菌苗的根为外植体诱导愈伤,进行暗培养,MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA为最佳的诱导培养基。以无菌苗的生长点为外植体诱导愈伤,并进行光培养,MS+2.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA为最佳的诱导培养基;愈伤增殖培养：由种子诱导愈伤的最佳增殖培养基为MS+0.6 mg/L 2,4-D。MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA是无菌苗的根诱导愈伤的最佳增殖培养基。MS和MS+2.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA为生长点诱导愈伤的最佳增殖培养基;生根培养：由种子、生长点诱导并增殖愈伤的最佳生根培养基为MS。本研究为总状绿绒蒿的快速繁殖和分子育种提供了基...     

西部沙樱枝条愈伤组织诱导、增殖及分化培养

以西部沙樱一年生枝条为材料,研究不同激素配比条件下外植体愈伤组织的诱导、增殖及分化诱导。结果表明:西部沙樱茎段在2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂(pH 5.75)的MS培养基上可诱导出愈伤组织;愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂(pH 5.75);愈伤组织分化的最佳培养基为MS+NAA 0.3 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂(pH 5.75),经分化可获得无性系芽,继而产生丛生苗。西部沙樱愈伤诱导及分化的成功为西部沙樱资源的保护、开发和利用提供了理论依据和技术保障。     

石刁柏幼胚胚状体发生与细胞学研究

以3个来自国外的石刁柏品种（C.IL,PURPLE和APOLLO）为试材,研究不同基因型以及培养基中添加2,4-D、KT、6-BA和NAA等生长物质对石刁柏幼胚胚状体发生的影响。结果表明,幼胚在MS＋2,4-D 1.0 mg/L＋KT 0.5mg/L＋6-BA 2.0 mg/L培养基中可直接诱导产生体细胞胚。降低2,4-D的浓度,将诱导产生的体细胞胚组织块继代培养2-3次可诱导产生出米黄色颗粒状的胚性愈伤组织,继而有胚状体的发生。胚性细胞继续分裂形成多细胞原胚,经球形胚、梨形胚、长形胚、子叶分化期到成熟胚,其发生的胚状体与单子叶合子胚形成具有相似的过程。     

木蓝愈伤组织诱导与不定芽分化培养

初步建立了木蓝(Indigofera bungeana Walp.)的离体再生培养体系，为其基因工程育种研究提供前期技术参考。通过种子无菌播种技术获得野生木蓝无菌实生苗，以胚轴、茎段和叶片为外植体，筛选木蓝愈伤组织诱导、不定芽分化、增殖、壮苗培养的最适培养基配方。结果显示，木蓝种子无菌播种发芽率达98%，最适培养基为1/2MS。3种外植体在不同培养基下均能诱导出愈伤组织，根据愈伤组织生长及质地色泽筛选出最适诱导培养基，其中，叶片为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L NAA；茎段为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA；胚轴为MS+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L2,4-D+0.5 mg/L NAA。相比较叶片和茎段，胚轴来源的愈伤组织适于不定芽分化，最适分化培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA和MS+2.0 mg/L 6-BA。不定芽增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA，壮苗和生根的最适...     

‘凤丹’牡丹胚芽愈伤诱导及不定芽的分化

为提高‘凤丹’牡丹胚芽愈伤组织的诱导率及不定芽的分化效率,本研究以‘凤丹’牡丹种子为试验材料,对种胚愈伤诱导及不定芽分化的培养基配方进行添加与不添加2,4-D的对比试验。结果显示,诱导胚愈伤的最佳培养基为MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,诱导率达33.33%;诱导不定芽分化的最佳培养基为MS+0.2 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,诱导率达65.33%,表明在没有2,4-D添加的培养基中能获得更高的‘凤丹’牡丹胚芽愈伤诱导率及更多的不定芽。本研究结果可为‘凤丹’牡丹的组培和快繁技术提供一定的技术指导。     

荚用菜豆松散型胚性愈伤组织保持体系的诱导方法

本研究旨在为诱导再生成苗提供基础材料,为进一步开展荚用菜豆育种相关研究奠定基础。以荚用菜豆无性细胞（茎、叶、子叶等器官）为试验材料,通过筛选植物激素及其最佳组合,获得了以细胞质浓密的圆球形细胞为主体的松散型愈伤组织细胞团。最终筛选出诱导无性细胞产生普通愈伤组织的“诱导培养基Ⅰ号”：MS +2,4-D 1 mg/L+蔗糖30 g/L。进一步研究获得了“诱导培养基Ⅱ号”：MS + 6-BA 0.25 mg/L + 2,4-D 0.5 mg/L+ AgNO₃ 10 mg/L。此培养基可以诱导和保持松散型胚性愈伤组织。本研究筛选出可以将无性细胞诱导为松散型胚性细胞团,并且维持胚性细胞继续增殖的系列培养基,解决了诱导过程中愈伤组织褐化问题,创建了一套诱导荚用菜豆松散型胚性愈伤组织的新方法。     

铁皮石斛愈伤组织诱导研究

研究了8种不同浓度的2,4-D培养基和3种不同的培养条件对铁皮石斛愈伤组织诱导的影响。结果表明:诱导愈伤组织时,培养基以0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA及1.5 mg/L 2,4-D+20.0 g/L蔗糖+200.0 g/L马铃薯泥+2.0 g/L活性碳+10.0 g/L琼脂的培养基效果最好,在暗培养15 d后光培养的条件下诱导愈伤组织效果最好。     

紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化研究

以紫花苜蓿SANDITI无菌苗下胚轴、茎、叶3种不同外植体,在附加不同激素浓度的MS培养基上诱导愈伤组织。结果表明,SANDIT最佳外植体为下胚轴,最佳下胚轴愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5mg/L。15 d继代1次,或适当降低2,4-D浓度,提高6-BA或KT浓度,可以降低愈伤组织褐化率。愈伤组织在6-BA0.5 mg/L,NAA 0.1 mg/L,GA31.0 mg/L,YE 250 mg/L,CH 250 mg/L的MS培养基上,可获得较高的分化率。