农杆菌介导的百合遗传转化体系的建立

 通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法, 建立了凝望星空百合(Lilium ‘Star Gazer’) 愈伤组织和西伯利亚百合(Lilium ‘Siberia’) 叶片的遗传转化体系。试验结果表明: 以愈伤组织和叶片为受体, 均能取得较理想的转化效果; 根癌农杆菌OD600介于0.5～1.0时, 能获得较高的转化率; 40 mg·L ^{- 1}的潮霉素对愈伤组织和叶片有很好的筛选效果; 在共培养培养基中, 去除NH₄NO₃对提高百合转化效率有极显著的效果。对转基因百合进行PCR检测, 结果表明gus基因已整合到百合基因组中。     

多胺与脱落酸对辣椒子叶再生的影响

 以‘中椒5 号’甜椒和‘湘研10 号’辣椒为试材, 探讨了Spm (精胺) 、Spd (亚精胺) 和ABA(脱落酸) 的不同浓度与不同添加时期对子叶再生的影响。结果表明: 在不定芽分化期和伸长期添加100μmol·L^-1的精胺能显著提高中椒5 号和湘研10 号不定芽的伸长率, 分别较对照提高78%和73%; 在不定芽分化期添加0.3 mg·L^-1的ABA 能促进不定芽分化, 两品种分别较对照提高52.8 %和71.6 %。     

农杆菌介导萱草植株CHS基因的转化

以萱草‘香宝’愈伤组织为外植体,以10 d为继代周期,将携有PSN1301-CHS的农杆菌EHA105菌株侵染受体材料,使CHS基因导入到萱草‘香宝’中。建立萱草遗传转化的适宜条件:抑菌剂以浓度为350 mg/L的羧苄青霉素为宜;潮霉素为转化子的筛选剂,25 mg/L为适宜的作用浓度;转化中宜选择预培养时间为2 d;农杆菌菌液浓度OD600在0.6左右,选用重悬液为MS+3%糖;侵染时间为15 min;在菌液和共培养基中同加100μmol/L的乙酰丁香酮;共培养基时间为2 d。     

发根农杆菌介导山定子遗传转化及发根再生植株

为了提高山定子的生根能力,用发根农杆菌转化山定子,诱导产生发根,并由发根诱导出再生植株。通过对不同发根农杆菌株系、培养基、共培养时间以及添加乙酰丁香酮（AS）的研究,优化了发根农杆菌转化体系。当用添加AS（100μmol﹒L-1）的菌液侵染植株切段30 min,共培养3 d,在无植物生长调节剂的固体1/4MS培养基上诱导产生发根时,发根诱导率最高,达到88.89%。将发根根段在MS+BA 2.0 mg﹒L-1 +IBA 0.1 mg﹒L-1+GA3 0.1 mg﹒L-1的再生培养基上,通过愈伤组织的诱导得到再生植株,再生率3%。     

根癌农杆菌介导荔枝遗传转化研究

利用带有内含子的GUS基因(uidA)的瞬时表达,研究影响根癌农杆菌介导荔枝胚性愈伤组织遗传转化的若干因素。结果表明:在AGL-1、LBA4404和EHA105三种菌株中,EHA105对荔枝胚性愈伤组织的侵染力最强;采用2d的共培养时间既有较高的瞬时表达率,又避免了农杆菌的过度生长;0.5×10~8个细胞/mL的菌液密度为最佳侵染浓度;继代培养15d的胚性愈伤组织处于最旺盛分裂的时期,是转化的合适受体;愈伤组织转化前干燥处理对uidA瞬时表达率的提高有一定的促进作用。使用优化的农杆菌侵染条件获得了稳定表达uidA基因的荔枝抗性愈伤组织。     

甜瓜再生体系的建立

以‘鑫福999’甜瓜5 d龄无菌苗的子叶、下胚轴、真叶为外植体,研究了添加6-BA、IAA和2,4-D的培养基对愈伤组织诱导、丛生芽的发生和丛生芽生根的影响。结果表明:诱导愈伤组织的最适外植体为子叶,由子叶诱导的愈伤组织生长速度最快、品质最好、数量最多,最适愈伤组织的诱导培养基为MS+IAA 0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L。最适宜诱导丛生芽的外植体为子叶,最适丛生芽诱导培养基MS+6-BA 1.0 mg/L,最适生根培养基为MS培养基。     

江山市辣椒工厂化无土栽培品种比较试验

选用5个辣椒品种(‘衢椒1号’、‘衢椒2号’、‘渝椒5号’、‘弄口早椒’、‘台农黄椒’)进行辣椒工厂化无土栽培品种比较试验。结果表明,‘衢椒1号’、‘衢椒2号’、‘渝椒5号’、‘弄口早椒’均比对照‘台农黄椒’极显著增产。综合评判‘衢椒2号’可作为辣椒工厂化无土栽培的首选品种种植。     

RNAi沉默CsHB1降低茶树叶片愈伤组织咖啡碱积累

以‘英红9号’茶树叶片为材料,克隆HD-Zip转录因子基因CsHB1,原核表达CsHB1重组蛋白,利用本氏烟草进行CsHB1表达蛋白的亚细胞定位;构建CsHB1的RNAi转基因载体,经农杆菌介导转化‘英红9号’茶树叶片愈伤组织,并对沉默CsHB1愈伤组织系进行基因表达分析和咖啡碱含量测定。结果表明,克隆基因与NCBI登记的‘龙井43’茶树CsHB1（MF033534）有6个碱基差异,但编码相同的氨基酸序列;原核诱导表达获得CsHB1的49 kD不可溶蛋白;将CsHB1蛋白亚细胞定位于细胞核和细胞质。在沉默表达CsHB1愈伤组织中,CsHB1表达显著下降,催化茶叶咖啡碱合成的N–甲基转移酶基因yhNMT1表达下调,愈伤组织中咖啡碱含量显著降低。推测转录因子基因CsHB1的沉默抑制了靶基因yhNMT1的表达,进而降低‘英红9号’愈伤组织中咖啡碱的合成积累。     

反义AcInv基因导入马铃薯遗传转化体系的优势

以马铃薯品种陇薯3号的茎段和微型薯为受体材料,对其再生和农杆菌介导的遗传转化体系进行了研究。结果表明,茎段愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA2.5mg.L-1+NAA0.5mg.L-1+GA35.0mg.L-1+2,4-D1.0mg.L-1,分化培养基为MS+6-BA3.5mg.L-1+NAA1.0mg.L-1+GA310.0mg.L-1,微型薯薯片再生培养基为MS+ZT2.0mg.L-1+IAA1.0mg.L-1;愈伤组织诱导和生根阶段的选择压分别为Kan50和75mg.L-1,转化时不经过预培养,茎段农杆菌侵染10min,共培养3d;微型薯薄片侵染5min,共培养2d;共培养基中加入50μmol.L-1乙酰丁香酮,茎段抗性愈伤率和分化率分别提高14.29%和6.77%。通过该体系将反义AcInv基因导入马铃薯中,获得了具卡那霉素抗性的转化植株。经PCR检测,外源基因已导入马铃薯基因组中。     

农杆菌介导南瓜遗传转化体系的建立

以南瓜金辉一号（Cucurbita moschata‘Jinhui1’）为实验材料,利用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导转化南瓜子叶节,研究了预培养时间、侵染时间、乙酰丁香酮（AS）浓度和共培养时间,     

Optimization of Agrobacterium-mediated transformation parameters for Melastomataceae spp. using green fluorescent protein (GFP) as a reporter

Agrobacterium-mediated transformation for both Melastoma malabathricum and Tibouchina semidecandra were optimized using green fluorescent protein (GFP) as a reporter. The binary vector pCAMBIA1304 harboring the modified green fluorescent protein (mgfp) gene driven by the CaMV 35S promoter was used. Parameters optimized were bacterial strain, bacterial concentration, pre-culture period, co-cultivation period, immersion time, acetosyringone concentration and wounding type. Results obtained were based on the percentage of GFP expression which was observed 3 days post-transformation. Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404 and EHA105 at concentration 1 × 10⁷ cfu ml⁻¹ (OD_600nm 0.8) showed the highest virulence on M. malabathricum and T. semidecandra, respectively. Four days of pre-culture and 2 days of co-cultivation were optimum for M. malabathricum transformation, while 3 days of pre-culture and co-cultivation for T. semidecandra. Result also showed that 60 min of immersion and addition of 200 μM acetosyringone gave the highest percentage of positive transformants for both M. malabathricum and T. semidecandra. Mild wounding also significantly increased the efficiency of M. malabathricum transformation.     

抗病基因VpPR10转化‘砀山酥梨’及转化条件的优化

将源自中国野生华东葡萄的抗病基因——病程相关蛋白基因导入‘砀山酥梨’,并对转化系统条件进行优化。首先将VpPR10基因重组于中间表达载体pWR-Ⅱ,得到重组质粒pWR-Ⅱ-VpPR10;继而以改进冻融法将其导入根癌农杆菌EHA105,再利用根癌农杆菌介导的叶盘转化法进行遗传转化。根癌农杆菌浓度OD600=0.5,离体叶片侵染5min,在含有100μmol·L-1乙酰丁香酮的培养基中暗处共培养48h有利于砀山酥梨的遗传转化;经PCR分析、Southern blot和RT-PCR检测,证明目的基因VpPR10已导入并整合到砀山酥梨基因组中;转化率为1.08%。     

‘翠秀’黄瓜子叶原生质体的高效培养及植株再生

 分离纯化的黄瓜子叶原生质体，以5.5×10～5.5×10⁵个/mL的不同密度培养于mKMSp液体培养基中，均获得不同程度的细胞分裂。当培养密度超过1.0×10³个/mL时，原生质体可持续分裂至愈伤组织形成，最高植板率为54%。原生质体来源的愈伤组织经诱导培养产生大量体胚并再生成植株。Ca²⁺ 浓度对黄瓜原生质体的稳定和细胞分裂有重要影响。     

辣椒核质互作雄性不育新品种‘湘研14 号’

 ‘湘研14 号’为中晚熟品种, 果实牛角形, 果面光滑, 皮较厚, 空腔小, 耐贮运; 商品果浅绿色, 生物学成熟果鲜红色, 平均单果质量38 g , 味辣, 产量49. 5～60. 0 t/hm² ; 适于长江中上游地区越夏露地栽培和华南地区冬季露地栽培。     

基因型和6-BA对黄瓜子叶节再生频率的影响

以华北、华南类型,欧洲、日本类型及美国加工类型黄瓜为材料,研究了基因型和激素（6-BA）对黄瓜子 叶节再生频率的影响。结果表明：基因型是子叶节再生频率的主要影响因素之一,不同基因型黄瓜子叶节在同一 培养基上每外植体再生芽数明显不同;6-BA是子叶节分化所需的重要激素,材料228、185、65G随着6-BA浓度的升 高,每外植体再生芽数增加;四川白瓜、吉林旱瓜、K2148随6-BA浓度的升高,每外植体再生芽数反而降低;其中 ,四川白瓜的再生频率最高,在MS1(MS+0.5 mg·L-1 6-BA+2.0 mg·L-1AgNO3)培养基上,每外植体再生芽数可 达6.4个。     

抗病大白菜新品种‘天正秋白一号’

 ‘天正秋白一号’是以‘安阳二包头’经多代自交选择育成的优良自交不亲和系安1043 为父本, 以‘福山二包头’通过抗性转育、筛选的自交不亲和系新福1042 为母本配制的大白菜一代杂种。该品种生长期80 d, 中晚熟; 球叶叠抱, 叶球矮桩倒锥形; 叶色淡绿,白帮, 净菜率75%, 单球质量5. 1 kg; 高抗病毒病、兼抗霜霉病和软腐病。     

PEG浸种对低温弱光下辣椒幼苗叶片部分生理指标的影响

以湘研1号辣椒为试验材料,用25%聚乙二醇（PEG）溶液处理种子,研究了在低温弱光胁迫下PEG处理对辣椒幼苗与抗冷性有关的部分生理指标的影响。结果表明：在15℃/5℃（昼/夜）低温,100μmol·m^-2·s^-1弱光下,辣椒幼苗地上部干质量、地下部干质量、株高、茎粗均降低;辣椒幼苗叶片细胞膜透性、丙二醛(MDA)和脯氨酸(Pro)含量升高,并随低温弱光处理时间的延长而增加;超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶(POD)活性呈现先升高后降低的趋势;可溶性蛋白含量呈逐渐下降趋势。PEG浸种处理可使辣椒幼苗地上部干质量、地下部干质量、株高、茎粗和叶片的SOD、POD活性、可溶性蛋白含量的下降幅度均较低温弱光对照显著减小,细胞膜透性、MDA与Pro含量的增加幅度均较对照显著降低,表明PEG浸种处理能够提高辣椒幼苗对低温弱光的适应能力。     

花椰菜新品种‘浙801’

 ‘浙801’是通过‘3045-1’ב955’获得的半松散花椰菜杂交一代,生育期约80 d。植株半直立,生长势强,叶面蜡粉多。花球半圆球形,球径约20 cm,单球质量1 kg以上,花蕾细腻,淡青梗。花球含粗蛋白2.12%,维生素C 625 mg · kg-1,可溶性糖2.71%,可用于脱水加工。适宜华东地区种植。     

西瓜新品种‘抗王’

 ‘抗王’为中早熟西瓜一代杂交种, 适合早春温室、大棚等多种覆盖及露地栽培, 从开花到成熟约32 d。果实圆形, 果皮绿色, 被伏深绿色粗花纹, 含可溶性固形物11%左右。丰产性好, 一般产量可达60～65 t·hm^-2 。抗病性强, 耐贮运。