谢瓦氏曲霉间型变种flbA基因cDNA的全长克隆及序列分析

为进一步研究谢瓦氏曲霉间型变种中flbA基因的结构及其与有性发育的关系,根据FlbA氨基酸的保守序列设计简并引物,利用RT-PCR、RACE方法从谢瓦氏曲霉间型变种的总RNA中扩增出flbA基因的cDNA序列。该序列全长3060 bp,包含2295bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),预测编码一个由764个氨基酸组成的蛋白,该蛋白分子量为83 181.19,理论等电点为6.31,为不稳定的亲水蛋白。序列同源性为:该基因与烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的发育调控子flbA相似度,最高为77%,其编码的氨基酸含有一个RGS(Regulator of G protein Singaling)和两个DEP(dishevelled,Egl-10,pleckstrin)保守域,与Aspergillus其他种的FlbA蛋白保守域一致。     

谢瓦氏曲霉间型变种nsdD基因全长克隆及序列分析

为研究谢瓦氏曲霉间型变种中nsdD基因的结构及其与有性产孢的关系,根据同源克隆及染色体步移技术克隆nsdD的全基因序列,并进行生物信息学分析。结果表明:该序列基因全长为1 773bp,开放阅读框长度为1 293bp,编码430个氨基酸,分子质量为46.659 4KD,理论等电点为9.08。序列同源性分析该基因与土曲霉(Aspergillus terreus)nsdD基因相似度最高为69%,含有1个GATA型锌指保守结构域,与其他曲霉的nsdD蛋白保守域相符。     

一种防治蚜虫寄生曲霉的分离与防效试验

从自然染菌死亡的蚜虫体内分离得到一种杀蚜真菌,经鉴定为寄生曲霉(Aspergillus parasiticus),具有感染流行性,相对湿度75%以上,对蚜虫的侵染率达95%以上,对培养条件进行优化。结果表明,接种量为2.5%(重量比),玉米面和麸皮比例1∶1,水分含量60%,28℃,相对湿度80%,培养时间72 h,产孢量最高达3.0×10~9 CFU/g;该株杀蚜真菌对蚜虫持效期达15 d以上,明显优于10%吡虫啉和40%毒死蜱防治效果。     

曲霉有性生殖及相关功能基因的研究进展

曲霉属真菌能通过分生孢子进行繁殖,目前已知有77个基因与曲霉有性产孢相关,其是曲霉完成有性产孢所必需的,但对曲霉有性产孢的作用机制尚不清楚。为深入研究曲霉有性产孢的机制提供参考,对曲霉的有性生殖特点,以及对环境信号感知、交配进程和信号传导、子囊孢子产生和成熟、其他调控蛋白等的相关功能基因进行了综述。     

狐貉源犬瘟热病毒融合蛋白基因的同源性分析

2004—2006年,从黑龙江省和内蒙等地发病饲养狐、貉中分离获得6株犬瘟热病毒(CDV),分别命名为MS01、SC01、ZD01、GN01、HL01、NM01分离株。根据Genbank上发表的的CDV F基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR方法分别对6个分离株F基因进行克隆、测序,并推导其氨基酸序列,绘制出F基因的遗传进化树。结果表明:6个CDV分离株F基因的开放阅读框架(ORF)均为1 989 bp,编码663个氨基酸,蛋白结构中的13个Cys残基位点和4个潜在的糖基化位点均高度保守,其裂解位点的氨基酸序列为220R-R-Q-R-224R。遗传进化分析表明:6个分离株与CDV代表强毒株A75/17属于同一谱系,均为强毒株。其中,HL01株与海豹瘟热病毒2型(PDV-2)亲缘关系较近,与其它5个分离株关系相对较远。     

花生种子的黄曲霉抗性物质成分和基因研究进展

为花生黄曲霉的抗性研究和建立快速有效的鉴定方法提供参考,对花生种子的白藜露醇、脂肪氧化酶、苯丙氨酸解氨酶、胰蛋白酶抑制剂、几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶等黄曲霉抗性物质、膜质过氧化反应、种皮超微结构和抗性成分及抗黄曲霉基因进行了综述,同时对花生抗黄曲霉成分和基因研究进行了展望.     

谢瓦氏曲霉间型变种veA基因全长克隆及序列分析

为进一步研究谢瓦氏曲霉间型变种中veA基因的结构及其与有性发育的关系,以谢瓦氏曲霉间型变种为有性发育研究材料对veA基因进行全长克隆,根据已克隆到的veA保守区片段设计基因特异性引物(GSP),使用RACE技术从总RNA克隆到了长度为2 515 bp的veA基因的cDNA。序列分析表明,该cDNA编码有562个氨基酸残基,其预测蛋白质序列与丝状真菌的其他种相应预测蛋白质比对结果发现,其相似性较好,保守区序列集中于蛋白质的N端。进一步研究表明,该基因开放阅读框内只含一个内含子,长度为54 bp,位于起始密码子下游149 bp处。说明,已成功地从谢瓦氏曲霉间型变种中克隆到了veA基因。     

东北虎巴氏杆菌毒力基因toxA的克隆及同源性分析

通过对吉林市江南公园送检东北虎病例的病原分离鉴定,分离出多杀性巴氏杆菌,为进一步加强对该病的流行病学调查,并为准确诊断和治疗该病提供依据,实验对该株巴氏杆菌毒力基因toxA进行了研究。根据巴氏杆菌毒力基因toxA序列设计合成1对引物,以临床分离的虎源巴氏杆菌为模板,通过PCR技术,扩增出toxA基因片段。将长约526bp的toxA目的基因克隆到pGEM-T载体上,通过核苷酸序列测定,结果表明toxA基因序列与发表序列(X51512)的同源性为100%。流行病学调查显示,东北虎巴氏杆菌病的病原可能来自其食物(牛、羊肉等)。因此,在饲养过程中应加强检疫,切断巴氏杆菌病食源性传播途径。     

南方根结虫寄生相关基因研究进展

南方根结线虫在世界范围内广泛分布,在最低温度高于3℃的每个国家都有发现.它能侵染几乎所有农作物的根系因此成为最具破坏力的作物病原物.每年造成的经济损失高达1000亿美元.尽管杀线虫化学药剂是控制南方根结线虫最有效的方法,但因其对人类和环境的毒性而逐渐被弃用.因此研究工作的重点转向研究南方根结线虫寄生相关基因及其产物上.这些研究有助于深入了解其成功寄生和突破植物免疫防御的机理.综述了南方根结线虫寄生相关基因及其产物的研究进展,并对使用RNAi技术防治南方根结线虫的策略进行了评估.     

曲霉生长发育相关基因及分子调控机制的研究进展

随着分子生物学,基因组学和生物信息学等的快速发展,近年来模式菌株构巢曲霉和其他曲霉生长发育的相关基因及分子机制研究逐步深入。为曲霉(Aspergillus)生长发育分子生物学研究提供参考,对曲霉的应答环境条件光、营养和渗透压、参与交配过程、信号传导通路、转录因子及其他调节蛋白、内源性生理学过程、有性发育晚期产生子囊孢子过程等7个方面生长发育的相关基因及分子机制的研究进行了综述。     

玉米抗黄曲霉菌的基因位点及效应分析

以6个对黄曲霉菌抗性不同的玉米自交系完全双列杂交所获得的6个世代的种子,用黄曲霉菌接种,调查病级,研究玉米抗黄曲霉菌的基因位点及效应.结果表明:参试的6个亲本自交系之间对黄曲霉菌的抗性有较大差异,不同亲本组配的杂种F1对黄曲霉菌的抗感表现不同.各家系的分离群体中抗感个体的分离,少部分呈有规律的分离比例,而大部分组合的分离群体不呈有规律的分离比例,说明玉米对黄曲霉菌的抗性遗传既有主基因效应,也有多基因效应.多基因遗传体系中,既有基因的加性效应、显性效应,还有上位性效应.6个自交系中,可检测到5个对黄曲霉菌有抗性的基因位点,在自交系RA中携带1个效应较大的抗性基因,而其他几个自交系仅携带1～2个效应较小的抗性基因.自交系RA除可用于抗黄曲霉菌玉米新品种的选育,也可用于发展作图群体对玉米抗黄曲霉菌基因进行定位.     

玉米抗黄曲霉Ti基因的克隆与表达

[目的]对玉米抗黄典霉基因（胰蛋白酶抑制剂基因Ti）进行克隆并诱导表达,为以后的研究打下基础。[方法]提取抗黄3号玉米种子总RNA,电泳检测其浓度及纯度,利用RT-PCR体系扩增玉米种子Ti基因,回收目的基因,将目的基因与PMD18-T载体连接并将连接产物转入大肠杆菌感受态细胞,提取重组质粒DNA进行酶切鉴定。回收Ti基因并与表达载体PGEX-4T-1连接,诱导表达并检测表达产物。[结果]胰蛋白酶抑制剂以二聚体的形式存在,体外对黄曲霉孢子的萌发和菌丝的生长同样具有抑制作用。[结论]通过对玉米Ti基因的研究,得出胰蛋白酶抑制剂在提高玉米对黄曲霉的抗性方面具有很重要的作用。     

花生黄曲霉生长预测模型的研究

通过对分离自花生的黄曲霉LYYSS03-3在不同温度(15-35℃)、不同相对湿度(水活度分别为0.5,0.7,0.9)下的菌落生长特性进行检测,采用Boltzmann和Logistic 模型对黄曲霉的生长曲线进行拟合,结果表明,在适宜温湿度阶段,花生黄曲霉的生长曲线更适合用Boltzmann模型拟合.     

乳酸菌和枯草芽孢杆菌对黄曲霉毒素产生菌生长的抑制作用研究

为了筛选对黄曲霉毒素产生茵的生长有抑制作用的微生物,选用乳酸茵和枯草芽孢杆菌与黄曲霉共培养,通过测定黄曲霉菌丝质量以及培养液pH来判断对霉菌生长的抑制作用强弱.结果表明:3株乳酸茵培养液上清液和4株枯草芽孢杆茵对黄曲霉菌丝的生长皆有明显抑制作用(P＜0.05),以乳酸菌A2培养液上清液抑制作用最强,茵丝质量为0.119...     

花生黄曲霉侵染力

【背景】黄曲霉(Aspergillus flavus)极易侵染花生等农产品,产生的黄曲霉毒素具有高毒性、致畸性和致癌性,威胁人类和动物健康,造成重大的农业经济损失。【目的】在前期明确我国黄曲霉分布的基础上,进一步探明不同产毒力、不同地理来源的花生黄曲霉侵染特征,为抗黄曲霉花生品种选育,以及黄曲霉毒素污染风险预警与源头控制提供依据。【方法】从我国东北早熟花生区、北方大花生区、长江流域春夏花生交作区及南方春秋两熟花生区等花生主产区分离出的黄曲霉中挑选出不产毒(ND)、中低产毒(0—1 500μg·kg^-1)和高产毒(>1 500μg·kg^-1)黄曲霉102株,采用孢子悬浮液浸泡法接种花生种子,进行黄曲霉侵染等级和侵染指数鉴定,分析不同产毒力、不同地理来源黄曲霉的侵染差异及其相关性。【结果】102株黄曲霉对花生侵染指数分布范围为3.89%—67.50%,侵染指数在31%以上(侵染等级为3级、4级)的中高侵染力菌株占比达54.90%,中高侵染力且高产毒菌株占比为18.63%,主要来自江西樟树和广东湛江;聚类及相关性分析表明,菌株产毒量与侵染指数...     

几种多糖对黄曲霉菌生长及产毒的抑制作用

研究了香菇多糖、海带多糖、石耳素等10余种多糖对黄曲霉生长及产毒的抑制作用,发现海带多糖、香菇纤维素、马铃薯直链淀粉、A型大豆多糖能够明显降低黄曲霉菌丝产量;同时海带多糖、香菇纤维素、马铃薯直链淀粉、香菇多糖、绿豆多糖抑制了黄曲霉菌产毒,其中海带多糖、马铃薯直链淀粉、香菇纤维素、香菇多糖能够明显降低黄曲霉菌菌丝产毒能力。     

米曲霉磷酸果糖激酶基因克隆及序列分析

磷酸果糖激酶(PFK)是糖酵解途径的重要调控酶。以酿酒米曲霉CICC2012为材料,克隆获得PFK基因pfkA(GenBank登录号:KC113503.1)。序列分析表明:pfkA序列长度为2 722bp,含有2个内含子,开放阅读框长2 358bp;PFK为785个氨基酸组成的亲水蛋白,分子量86.0kDa,等电点6.38,含有2个PFK家族指纹结构;二级结构包含42.68%的α-螺旋,14.27%的β-折叠和43.06%的无规则卷曲;同源建模三级结构PFK含有N端和C端的2个结构域,底物果糖-6-磷酸结合于N端结构域。采用进化树分析,发现米曲霉PFK与丝状真菌PFK亲缘性较近。     

紫外线照射对黄曲霉菌产毒影响的研究

分别用照射强度373.8 mW/cm2的总紫外线,强度为60.6 mW/cm2、波长365 nm的UVA和强度7.8 mW/cm2、波长253.7 nm的UVC对黄曲霉进行照射处理,然后在避光和光照培养两种条件下继续培养,研究了不同波长紫外线照射对黄曲霉菌产毒的影响。试验结果表明:在一定条件下,各波长的最佳抑制率分别为:UVA:53%、UVC:91%、总紫外线:100%;而且在紫外照射强度相同的条件下,避光培养表现出的抑制作用强于光下培养,可能与光修复有关。     

荣莉酸甲酯对贮藏花生种子黄曲霉抗性的影响

花生Arachis hypogaea种子(汕油523、粤油79、湛油30)在干燥器中分别用LiCl、MgCl2饱和溶液隔层储存1个月后,种子的含水量(w)分别降至2.82%、4.96%,用1 mmol/L茉莉酸甲酯(MJ)处理这些种子,开放式贮存6个月,然后接种黄曲霉孢子并培养9 d,测定种子黄曲霉毒素B1质量分数及几丁质外切酶、几丁质内切酶和β-1,3葡聚糖苷酶的活性.发现MJ处理后可降低黄曲霉毒素B1质量分数,同时,通过提高几丁质外切酶、几丁质内切酶活性来提高花生种子对黄曲霉的抗性.但对β-1,3-葡聚糖苷酶活性无影响.     

Bacillus subtilis脂肽Bacillomycin D抗黄曲霉毒素研究进展

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtills)被认为是一种有效抑制黄曲霉并降解其毒素的菌种。己从不同的枯草芽孢杆菌菌株中分离得到具有抑制黄曲霉毒素的脂肽抗生素Bacillomycin D。Bacillomycin D属于Iturin家族,是枯草芽孢杆菌抑制黄曲霉毒素最强抗生素,也是目前唯一从枯草芽孢杆菌菌株中得到并且已经鉴定的具有抗黄曲霉活性的物质。该文对枯草芽孢杆菌及其抗菌脂肽Bacillomycin D的结构、性质、抑制黄曲霉机制进行了综述,为其进一步应用提供参考。