抗大肠杆菌耐热肠毒素中药方剂的筛选

肠毒素是产肠毒素大肠杆菌(ETEC)在体内或体外生长时产生并分泌到胞外的一种蛋白质性毒素,按其对热的耐受性还可分为热敏感肠毒素(LT)和热稳定肠毒素(ST) .大肠杆菌耐热肠毒素(ST)由分子量不足5 000的多肽组成,无免疫原性.     

大肠杆菌耐热肠毒素的结构与特性

产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxic Escherichia coli,ETEC)是引起人和动物急性腹泻的常见病原菌,其危害在发展中国家尤其突出.引起腹泻的根本因素是ETEC分泌的耐热肠毒素(Heat-stable enterotoxin,ST)及不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT).现已清楚,ST单独或联合LT即可引起重症腹泻[1].LT是一种分子质量较大的蛋白质,在人源菌株与猪源菌株高度同源,免疫原性好,已研究得比较深入.ST为小分子肽,免疫原性很弱或缺少,对其研究颇受重视.     

肠毒素对微血管内皮细胞功能影响的研究进展

大肠杆菌中产肠毒素大肠杆菌(ETEC)对幼畜消化道有致病性,初生幼畜特别易感,1980年Bergland报道,从断乳前腹泻仔猪中分离到ETEC的几率为45.6%,其频度比球虫(23%)和轮状病毒(20.9%)感染的总和还多。所以对产肠毒素的研究是非常必要的。本文就产肠毒素对微循环和微血管内皮细胞功能的影响作以下综述。一产肠毒素简介产肠毒素是ETEC在体内或体外生长时产生并分泌到胞外的一种蛋白质性毒素,按其对热的耐受性还可分为热敏感肠毒素(heat-labiletoxinLT)和热稳定肠毒素(heatstabletoxinST)。LT对热敏感,65℃加热30min既被灭活。LT全毒素分…     

貉产肠毒素型大肠杆菌的分离鉴定

致病性大肠杆菌能产生一种或多种肠毒素,称为毒素型大肠杆菌(ETEC)。ETEC是导致人畜腹泻的主要致病菌,借助于所产生的菌毛抗原黏附于动物小肠粘膜定居并产生作用于肠壁的外毒素称为肠毒素。主要有两类肠毒素:一类是不耐热性肠毒素,即热敏感性肠毒素(LT);另一类是耐热性肠毒素,即热稳定性肠毒素(ST)。仔猪的黄、白痢,牦牛的腹泻症及人的旅游者腹泻病通常是由毒素型     

大肠杆菌表达的融合蛋白VP4-STI的免疫效果研究

研究表明，肠毒素是ETEC致幼畜腹泻的根本原因，由ETEC产生的肠毒素包括热敏感肠毒素（LT）和热稳定肠毒素（ST），其中ST又包括STⅠ和STⅡ。调查表明，几乎所有的腹泻幼畜只要分离到ETEC．大部分都产生STⅠ。但是，由于STⅠ的分子质量太小，几乎没有免疫原性，因此，通过基因融合的方式借助大分子物质提高STⅠ的免疫原性是当前国内外学者致力于ETEC疫苗开发的重点。轮状病毒系呼肠孤病毒科（Reoviridae）轮状病毒属（Rotavirus）的成员，是致幼畜病毒性腹泻最主要的病原体，其中外膜蛋白VP4不仅是轮状病毒血清学分型的依据，而且是主要的保护性抗原。     

产肠毒素性大肠杆菌肠毒素的研究概况

本文分析了大肠杆菌耐热肠毒素 (heat-stable,ST)和不耐热肠毒素 (heat- labile,LT)生物学特性、分子水平机制及其应用价值。一方面着重讲述 LT作为粘膜免疫佐剂的研究前景 ,利用体外定点突变方法构建不同的突变株并且均具有不同程度的佐剂活性 ,是霍乱毒素 (Choleratoxin,CT)很有希望的替代品。另一方面讲述ETEC基因工程亚单位疫苗的研究概况。ETEC只有 LT、ST两类肠毒素 ,通过不同方式构建融合基因探讨对 ETEC性腹泻防治效果。目前 ,这两方面均卓有成效 ,但还有许多的难点需进一步的研究     

大肠杆菌不耐热肠毒素的分子生物学及粘膜免疫佐剂效应

大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-Labile,LT)是由产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenicEscherichiacoli,ETEC)分泌的一种外毒素。LT既有较强的免疫原性又有较强的粘膜佐剂效应,其毒力较霍乱毒素(choleratoxin,CT)小而被认为是替代CT的最有潜力的粘膜免疫佐剂。本文从LT的分子结构、分子生物学特性、免疫原性、粘膜佐剂效应及其作用机制以及LT的粘膜免疫佐剂的应用等方面进行了讨论。     

猪源大肠杆菌热稳定肠毒素的检测

致病性大肠杆菌产生一种或多种肠毒素称为肠毒素型大肠杆菌(Enterotoxigenic E．COLI ETEC)．ETEC是引起幼畜腹泻的重要病原菌。ETEC能借助于所产生的菌毛抗原粘附于动物小肠黏膜。定居并产生作用于肠壁的外毒素，称为肠毒素。主要有两类肠毒素：一类是不耐热性肠毒素即热敏感肠     

大肠埃希菌热敏性肠毒素B亚基研究进展

产肠毒素大肠埃希菌(EnterotoxigenicE.coil,ETEC)是引起幼畜、婴幼儿及旅游者腹泻的重要病原之一。ETEC产生两类肠毒素,一种是对热敏感的热敏性肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT),另一种是对热不敏感的耐热性肠毒素(heat-stable enterotoxin,ST)。LT不仅是ETEC主要的毒力因子,而且还是一种重要的黏膜佐剂,它由A、B亚基组成,由于LT A具有毒性作用,限制了LT作为黏膜免疫佐剂的应用;而LT B无毒且具有黏膜佐剂活性,使其成为备受关注的佐剂之一。近年来对LT B的结构、介导的免疫调节分子机制、突变体及其佐剂作用已进行了较为深入的研究,为充分利用LT B的黏膜免疫佐剂功能奠定了基础。     

大肠杆菌表达的融合蛋白VP4-STⅠ的免疫效果研究

研究表明,肠毒素是ETEC致幼畜腹泻的根本原因,由ETEC产生的肠毒素包括热敏感肠毒素( LT)和热稳定肠毒素(ST),其中ST又包括STⅠ和STⅡ.调查表明,几乎所有的腹泻幼畜只要分离到ETEC,大部分都产生STⅠ.     

应用酶联免疫吸附试验双夹心改良法检测毒素原性大肠杆菌

大肠杆菌是引起猪、牛、羊腹泻常见的病原菌之一。特别是由毒素原性大肠杆菌引起的腹泻,近年来引起了国内外的广泛重视。毒素原性大肠杆菌(ETEC)产生两种肠毒素:即耐热肠毒素(ST)和不耐热肠毒素(LT)。ST是小分子的无抗原性毒素。而LT除在理化性质上与霍乱毒素(CT)相似     

投用K_(99)菌毛免疫鸡卵黄粉预防新生犊牛大肠杆菌病

1 前言产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)是导致新生犊牛腹泻和死亡的主要病因。现已明确ETEC至少有二种毒力因子:介导粘附于上皮、使ETEC在小肠能迅速繁殖的定居因子和引起腹泻、脱水的热稳肠毒素(ST)或热敏肠毒素(LT)。K99菌毛     

重组大肠杆菌肠毒素蛋白LTA_(192)-STa_(13)的表达及其诱导小鼠体液免疫的研究

为研究重组大肠杆菌肠毒素融合蛋白LTA192-STa13的免疫原性,本研究将产肠毒素大肠杆菌(ETEC)elt A和est A基因定点突变后构建融合基因,进行重组蛋白LTAR192G-STaG13Q的表达。利用纯化的重组蛋白和灭活菌液分别免疫小鼠,比较不同抗原诱导小鼠体液免疫应答能力,以及体外免疫血清对毒素的中和作用。结果显示,各组免疫小鼠均可以产生高滴度抗LTA和STa抗体,其血清抗体可以通过乳汁传递给新生仔鼠,其中蛋白免疫组血清抗体效价更高。体内外中和试验证明,实验组小鼠三免后的血清能够中和LT和STa毒素对实验鼠的毒性作用,并且能够中和LT对Y-1细胞的毒性作用,蛋白免疫组血清抗体中和效价可达到1∶89.13,明显高于灭活菌免疫组。研究表明,重组蛋白LTA192-STa13对小鼠具有良好的免疫原性,能够诱导免疫鼠产生良好的体液免疫应答,可以作为ETEC亚单位疫苗的候选抗原。     

仔猪断奶前腹泻与控制

新生仔猪腹泻可由产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)、传染性胃肠炎(TGE)病毒、猪流行性腹泻(PED)病毒、A型和C型产气荚膜梭菌等引起,7日龄至断奶前仔猪的腹泻有时还可由轮状病毒和猪等孢子球虫(球虫病)引起(图1)。1产肠毒素性大肠杆菌1.1病原ETEC是新生仔猪腹泻最常见的病原之一。该菌引起疾病(仔猪黄痢)的能力主要取决于细菌在小肠内吸附、增殖和定植以及产生肠毒素的能力。ETEC可产生热敏感肠毒素(LT)和/或两种热稳定毒素(STa和STb)。产LT菌株可引起严重急性腹泻和高死亡率,而产ST菌株则引起温和型的腹泻,其死亡率较低。定植因子又称…     

抗STa多克隆抗体的制备、鉴定和纯化

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)可引起人及动物急性腹泻,其关键毒力因子为耐热肠毒素(ST)。由于ST是一种具有强烈毒性但缺乏免疫原性的小分子肽,如何在保持其免疫原性的同时减弱其毒性已成为制备ST类毒素疫苗的研究热点。本试验以利凡诺法提纯兔血清白蛋白(RSA),经0.2%戊二醛活化,再与人工合成的甲醇可溶性STa偶联,十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示获得分子质量约108.5 ku的完全抗原。用该偶联物免疫新西兰白兔4次,采集抗血清并用Protein A/G 琼脂糖小珠进行纯化,斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)和免疫印迹(Western blotting)结果显示抗血清效价均为1:400。试验结果表明抗STa多克隆抗体成功制备,这为筛选ST结构类似物做有益的铺垫。     

我国预防幼畜腹泻大肠杆菌基因工程菌苗的研究现状

肠毒素性大肠杆菌(ETEC)引起新生幼畜(仔猪、犊牛、羔羊)腹泻在国内外都很普遍,是导致幼畜死亡的主要原因之一.ETEC的致病环节主要有两个方面:一是肠毒素,有不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST),可促使肠腔积液,引起腹泻;二是粘着素(定居因子).粘着素抗原是细菌细胞膜上长出的菌毛状结构,它们是由蛋白亚单位经装配而成,不同的菌株产生不同的粘着素抗     

利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联技术构建产肠毒素大肠杆菌LT敲除菌株

本研究旨在利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联的技术对产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）K88的热不稳定性肠毒素（heat-labile toxin，LT）基因进行无痕敲除并获得K88 LT^-缺陷菌株。通过序列比对获取LT两端同源序列，并构建包含LT边界、氯霉素筛选标记、sgRNA和LT同源臂的供体片段；将供体片段转化至ETEC K88，同时分别利用λ-Red同源重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统，对LT基因进行敲除；通过PCR验证获得了K88 LT^-缺陷菌株，并通过试验测定了敲除菌株的溶血能力和生长曲线。结果显示，λ-Red同源重组系统可成功地将LT基因替换为相应的供体片段，CRISPR/Cas9基因编辑系统可高效地对筛选标记进行删除，最终通过λ-Red和CRISPR/Cas9结合的基因编辑系统可成功对ETEC K88的LT基因进行无痕敲除。体外试验结果表明，K88 LT^-缺陷菌株的溶血能力丧失，并且生长速度比野生型菌株减缓，LT可能和ETEC K88的致病能力和生长性能有关。表明λ-Red和CRISPR/Cas9级联的基因敲除方法可用于LT毒素基因及其他一些大肠杆菌基因的敲除。K88 LT^-缺陷菌株的构建为下一步研究LT毒素的致病机制奠定基础。     

仔猪产肠毒素性大肠杆菌和产气荚膜梭菌引发腹泻的症状与防治

1产肠毒素性大肠杆菌 产肠毒素性大肠杆菌（ETEC）是新生仔猪腹泻最为常见的病原。ETEC菌株引起疾病的能力主要取决于菌株在小肠内的吸附、增殖和定植的能力以及产生肠毒素的能力。能引起新生仔猪腹泻的ETEC菌株可产生热敏感的肠毒素（LT）或两种热稳定的毒素。定植因子决定了大肠杆菌在动物肠道定植的能力。如果能发生细菌定植,则产生的毒素会引起腹泻,其可与黏膜表面细胞的特异性受体结合而定植于黏膜。     

预防幼畜大肠杆菌性腹泻双价基因工程菌苗的研究进展

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)引起新生幼畜(仔猪、犊牛、羔羊等)腹泻在国内外都很普遍,是导致幼畜死亡的主要原因之一。ETEC具有两类致病因子:一种为肠毒素,即不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST)。另一种为粘着素(定居因子),已知的粘着素抗原有K88、K99、987P、F41和F42等。ETEC借助这些粘着素定居于肠道粘膜的上皮细胞上,在那里大量繁殖,并产生大量肠毒素,导致幼畜发病。据国内统计资料表明,幼畜大肠杆菌性腹泻在腹泻中的比例,猪为35％,牛为26％,羊为17％,其死亡率在10～30％左右,流行面广,死亡率高,即便幸免于死的幼畜亦常生长滞缓,难以育肥,造成很大经济损失,对家畜饲养业危害甚大。加上近几年抗药菌株大量增加,致使治     

猪源产肠毒素大肠杆菌三重PCR检测方法的建立及应用

为建立一种简单、快速、灵敏、准确的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)检测方法,根据产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88)和毒素(STa和LT)基因分别设计合成了1对引物,对K88、STa和LT基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、STa和LT的三重PCR方法。该方法对K88、STa和LT基因的扩增产物分别为499 bp,190 bp和373 bp;此外,该方法具有良好的灵敏性和特异性。本实验建立的三重PCR方法为致幼畜腹泻ETEC的检测提供了快速准确方法。用所建立的三重PCR方法对实验室从临床腹泻样品中分离的120株大肠杆菌进行检测,结果 9株为K88/LT/STa阳性,14株为K88/LT阳性,21株K88/STa阳性,13株LT/STa阳性,8株K88阳性,2株LT阳性,12株STa阳性。