应用PCR检测隐孢子虫卵囊的研究

隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊，从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中，直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作PCR模板，用1对人工合成寡核苷酸作为PCR引物，扩增片段大小为452bp。优化了Mg^2 浓度、引物浓度和dNTP浓度，并进行了特异性检验。建立的PCR具有隐孢子虫属特异性，不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段，而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后，最低检测值100个卵囊／ml；从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA，尔后经过DNA纯化试剂盒纯化，PCR最低检测值为10^5个卵囊/g粪便。     

隐孢子虫病两种诊断方法的应用比较

目的对目前常用的两种检测隐孢子虫感染方法进行估价。方法取上海某牧场随机采集的20头奶牛粪便用改良抗酸染色法和巢式PCR(Nested PCR)法检测。结果两种方法均能检测出粪便中的隐孢子虫卵囊,改良抗酸染色法阳性检测率55%,Nested PCR法阳性检测率70%。结论:两种方法均能从感染隐孢子虫的奶牛粪便中捡出隐孢子虫卵囊,可根据需要选择。     

猪隐孢子虫病调查报告

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是由隐孢子虫属原虫引起的一种人畜共患的肠道寄生虫病。动物感染后常见的临床体征为间歇性水泻、脱水、厌食、进行性消瘦和减重。本试验应用直接涂片法、饱和盐水漂浮法、离心法以及改良抗酸染色法对沈阳东陵区3个猪养殖场的53头猪的粪便样品进行了隐孢子虫卵囊的分离。结果显示,未经染色隐孢子虫近似圆形,无色,囊壁光滑,卵囊内可见到数量不等的暗色颗粒,卵囊平均大小为4.1μm×3.6μm。经改良抗酸染色法染色后的隐孢子虫卵囊呈红色,近似圆形,轮廓清晰,背景为绿色。不同年龄的猪     

河北省奶牛场犊牛安氏隐孢子虫的分离鉴定

本研究从河北省奶牛场有腹泻症状2月龄左右的犊牛粪便中分离卵囊,进行病原分离与虫株鉴定。采集腹泻犊牛的新鲜粪便24份,采用饱和蔗糖溶液漂浮法和抗酸染色法检测隐孢子虫卵囊,观察卵囊形态、大小。提取卵囊基因组DNA,进行18S rRNA基因PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测。对扩增片段进行序列测定及分析,进一步确定分离虫株隐孢子虫的种类/基因型,根据18S rRNA基因核苷酸序列构建系统发育进化树,确定虫株亲缘关系。结果显示,5份样品检出隐孢子虫卵囊,感染率为20.83%。形态学观察卵囊呈长圆形或椭圆形,大小为(5.0～8.2)μm×(4.2～6.3)μm,平均大小为6.6μm×5.3μm,卵囊指数为1.24,鉴定分离虫株为安氏隐孢子虫。PCR扩增出预期大小为1 188 bp的特异性片段,序列分析和同源性分析结果表明,分离株与安氏隐孢子虫AB089285.2株、AB513856.1株、AY954885.1株的同源性为98.7%～98.8%,进一步表明分离的隐孢子虫虫株为安氏隐孢子虫。在种系进化关系上,分离株与安氏隐孢子虫AB513856.1株亲缘关系最近。本研究为揭示河北省奶牛隐孢子虫病的流行特征,实施有效防制措施提供了科学依据。     

猪隐孢子虫病调查报告

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是由隐孢子虫属原虫引起的一种人畜共患的肠道寄生虫病。动物感染后常见的临床体征为间歇性水泻、脱水、厌食、进行性消瘦和减重。本试验应用直接涂片法、饱和盐水漂浮法、离心法以及改良抗酸染色法对沈阳东陵区3个猪养殖场的53头猪的粪便样品进行了隐孢子虫卵囊的分离。结果显示,未经染色隐孢子虫近似圆形,无色,囊壁光滑,卵囊内可见到数量不等的暗色颗粒,卵囊平均大小为4.1μm×3.6μm。经改良抗酸染色法染色后的隐孢子虫卵囊呈红色,近似圆形,轮廓清晰,背景为绿色。不同年龄的猪隐孢子虫感染率不同,年龄越小感染强度越大,育肥猪的感染率为4%,断奶仔猪的感染率为11%。     

奶牛源微小隐孢子虫的分子鉴定及动物感染试验

采用饱和蔗糖溶液漂浮法检查商丘市某奶牛场牛新鲜粪便样本的隐孢子虫卵囊,用18SrRNA基因对隐孢子虫进行PCR扩增和限制性片段长度多态性分析;基于GP60基因位点对微小隐孢子虫进行基因亚型鉴定。结果显示:103份样本中有50份为隐孢子虫阳性,42份经形态学鉴定为安氏隐孢子虫,8份形态学未能鉴定到种。经限制性片段长度多态性分析,7个分离株为微小隐孢子虫,1个分离株为牛隐孢子虫;序列比对分析,7个微小隐孢子虫均为人兽共患基因亚型IIdA19G1。接种1头3日龄犊牛1×106个卵囊,潜隐期为3d,显露期为14d,于感染后第7天和第10天出现2个排卵囊高峰期,收集到大量纯卵囊。     

鼠隐孢子虫卵囊及子孢子的纯化

应用不连续蔗糖密度梯度离心法，对犊牛粪便中的鼠隐孢子虫卵囊进行了提取，经过两次漂浮和一次不连续蔗糖密度梯度离心，得到纯净的卵囊，其中含有极少量的杂质，不含其他微生物。卵囊的回收率为３７％。纯化的卵囊脱囊后，经过一次不连续蔗糖密度梯度离心，得到很纯的子孢子。子孢子的回收率为４７．６％。纯化的卵囊及于孢子可用于隐孢子虫的核酸分析、生物化学、免疫学及细胞培养等方面的研究。该法具有简便、快速、大量分离卵囊的优点。     

广东省乳牛隐孢子虫病的流行病学调查

对广东省10个奶牛场进行了隐孢子虫病的流行病学调查，并按大致10％的采样率采集了1087头乳牛的新鲜粪便，以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊，其中检出卵囊的阳性牛92头，阳性率为8．46％；有7个场检出隐孢子虫卵囊，场阳性率为70％。这7个奶牛场的卵囊阳性检出率分别是10．00％、7．19％、6．67％、9．80％、6．72％、12．76％和6．72％。调查发现，乳牛隐孢子虫的阳性率和感染强度与乳牛年龄呈负相关关系，而且可能与气候有关；所检出的隐孢子虫卵囊经形态学鉴定为鼠隐孢子虫(Crptosporidium muris)。     

猫粪便中隐孢子球虫卵囊染色和浓集检测法的比较

猫粪便中隐孢子球虫卵囊染色和浓集检测法的比较［英］Ｍ．Ｍ．Ａ．Ｍｔａｍｂｏ等隐孢子虫是一种球虫目的寄生虫，可引起人和多种动物的腹泻。隐孢子虫病的诊断主要是从宿主粪便中查得卵囊而确诊。已用于隐孢子虫卵囊检查的有卵囊染色的改良萋－尼法（ＭＺＮ）、金胺酚法...     

隐孢子虫病诊断方法研究──组织内隐孢子虫虫体不同染色法效果比较

隐孢子虫病诊断方法研究──组织内隐孢子虫虫体不同染色法效果比较田纯见（华南农业大学兽医系）近十年来，为了检查粪便内隐孢子虫卵囊，人们曾试用了各种染色方法，如姬姆沙染色、番红－次甲基蓝染色、改良抗酸染色等。我们试图把这些方法应用到组织内虫体的染色，以观...     

利用蚕沙喂猪的试验

为了探索生态蚕业良性循环系统和开发新的畜牧饲料来源,给生猪饲喂含蚕沙的日粮,通过消化试验、饲养试验、屠宰分析等,确定蚕沙在育肥猪日粮中的最佳添加比例为7%。利用蚕沙喂猪可以降低饲料成本,平均每头猪增加盈利55元。综合试验结果认为:蚕沙富含蛋白质及多种矿物质,是营养丰富的饲料源;利用蚕沙养猪,既可提高蚕业生产综合经济效益,又可减少蚕沙对环境的污染。     

华南蚕区蚕沙产地无害化和肥料化处理技术体系构建思路

调查华南蚕区现有的蚕沙处理主要有分散简易堆肥、沼气发酵和集中资源化利用处理3种模式。针对该蚕区高温多湿的环境,以及一年多次养蚕,蚕沙生产量大的情况,提出因地制宜,采用简易蚕沙池改造升级、小型设施堆肥处理、小规模集约化堆肥处理等多种模式相结合的蚕沙好氧堆肥处理技术,并通过蚕沙堆肥过程与条件的控制,达到蚕沙病原菌灭活无害化、蚕沙堆肥发酵完全熟化和蚕沙作为桑园肥料应用无风险的目的,构建蚕沙产地无害化和肥料化处理技术体系。     

中兽医治疗奶牛腹泻良方与临床应用

腹泻是以排便次数增多、便稀溏为特征的一类疾病,根据不同特点又可分为泄泻、痢疾、便血三大类,每一类叉分为不同的证型。以临床病例为例,阐述腹泻的辨证方法、有效良方的选择及加减应用,既有同病同治、异病异治的常规方法,也有同病异治、异病同治的变化方法。     

黄牛寄生虫感染情况的调查报告

应用蠕虫学完全剖检法、饱和盐水浮集法和尼龙网兜淘洗法、沉淀法,剖检黄牛86头,镜检黄牛粪便184头份,共鉴定出体内外寄生虫40种,其中吸虫8种、绦虫及绦虫蚴4种、线虫18种、蜘蛛昆虫7种、原虫3种,隶属于5纲、10目、22科、28属。为制定合理的寄生虫病综合防制措施提供了科学依据。     

Determination of the apparent digestibility of crude proteins in chickens using the alpha-NH2-N method

Based on a comparison between colostomy, the alpha-NH2-N method introduced by PAHLE et al. (1983, 1985), the HARTFIEL (1963) and the EKMAN (1948) methods of the separation of faecal N and urine N in the determination of the apparent digestibility of crude protein in chickens, extensive studies were carried out with mixed excrement from colostomy experiments and excrement samples from intact animals from digestibility experiments with different feedstuffs. In case of the application of the methods by HARTFIEL and EKMAN there were partly big deviations in the measured results. A modification of the alpha-NH2-N method applied by us showed results which largely agreed with the results of colostomy and the method developed by PAHLE.     

郓城县畜禽粪尿排放量估算及风险预测

利用统计资料和文献数据,确定粪尿资源的计算参数和各种畜禽粪便折算猪粪当量系数,计算出2000年至2006年的郓城县猪粪当量数。在猪粪当量的基础上,进一步利用GM(1,1)模型,对未来十年的家畜粪尿负荷预警值进行预测。结果表明:2000年至2006年,郓城县家畜粪尿排放量总体上呈上升趋势,在2004年达到最高值464.84万t,警报级别也由Ⅳ级变为污染严重的Ⅴ级水平;未来10年,郓城县家畜粪尿负荷警报级别仍是污染严重的Ⅴ级水平,家畜粪便的污染威胁程度以约1.29%的速度递增,逐年加剧。     

鸡粪便中氧氟沙星的降解动态研究

氧氟沙星（Ofloxacin,OFL）是畜禽养殖业中最常使用的抗菌药物之一,其在粪便中的残留会对微生态环境产生不利影响。本试验对3种条件下鸡粪便中氧氟沙星的降解进行了研究,结果显示,室温避光条件下,鸡粪便中氧氟沙星几乎不降解,发酵条件下OFL的降解很慢,自然光照时OFL的降解较快。 OFL降解的变化趋势符合一级动力学方程Ct=C0e-kt,根据此方程求得光照条件下的OFL降解半衰期为(5.77±0.466) d, 发酵条件下的OFL降解半衰期为(35.66±1.99) d。     

蚕沙发酵有机肥对烟草生长及其品质的影响

拓宽蚕沙有机肥在农业生产领域的应用范围,对促进蚕沙资源产业化开发利用具有重要意义。通过盆栽试验研究蚕沙发酵有机肥对烟草生长和烟叶品质的影响,结果表明:施用蚕沙发酵有机肥能够有效提高烟草植株叶片的生物量,烟叶的干质量与不施肥的对照相比,增加了46.16%,有显著差异(P<0.05);施用蚕沙发酵有机肥可增加烟叶中氮(N)、磷(P)、钾(K)的吸收量(分别比对照高出68.51%、59.15%、100.32%),且优化N、P、K 3种营养元素在烟草植株不同部位的分配比率,减少N、K在根和茎中的积累,提高N、K在烟叶中的分配比率;与对照相比,施用蚕沙发酵有机肥可使烟叶中的水溶性总糖含量提高30.17%,施木克值趋于适中,使烟叶的化学成分更趋合理。研究结果显示出蚕沙发酵有机肥在烟草大田生产中的应用潜力。     

猪鸡联养研究

研究表明笼养肉鸡的鸡粪中粗蛋白含量比平面养的高１６．４７个百分点，而粗纤维低９．１２个百分点。用鸡粪喂猪，其饲料报酬同加入鸡粪的比例呈正相关，如日粮中添加３０－６０％鸡粪，其饲料报酬提高１５．３２－５５．３２％；同样加入４０％鸡粪喂猪，鸡粪经发酵的饲料报酬又比不发酵的高９．６２％。为使育肥猪得到较好的增重，还应将日粮的营养水平调整到接近饲养标准，猪鸡联养规模，一个专业户一次批量以肉鸡１０００－１５００羽，联养生猪１０－２０头为宜。     

The Content of Amino Acids in Pasture Vegetation and Their Apparent Digestibility in 2-year-old Horses

Ten samples of plant vegetation and 10 samples of fresh excrement were taken from the same pasture area. The excrement were collected from 10 2-year-old Old Kladruber horses that received the pasture vegetation daily. The apparent digestibility of nitrogen and amino acids in pasture vegetation was determined by using the acid-insoluble ash marker method. In comparison with excrement, the pasture vegetation contained higher levels of Ser, Ala, Leu, and His and higher levels of Pro (P ≤ .01), Met (P ≤ .01), and Arg (P ≤ .05). The mean level of Ile in pasture vegetation was lower than in excrement (P ≤ .05). The apparent digestibility of amino acids from pasture vegetation was high for Pro and Met (86.75 and 89.39%), moderate for Ser, Ala, Leu, His, and Arg (68.61%-76%), and low for Asp, Thr, Glu, Gly, Val, Leu, Tyr, Phe, and Lys (56.15%-66.03%). The digestibility of lysine and Ile was relatively low (56.39% and 56.15%, respectively). The total content of nitrogen per dry matter was 10.98 ± 2.46 g/kg for pasture vegetation and 12.12 ± 2.38 g/kg for excrement, whereas the content of protein nitrogen was 7.20 ± 0.25 g/kg and 6.89 ± 0.21 g/kg of dry matter in pasture vegetation and excrement, respectively. This means that only 65.55% and 56.90% of N is bound in proteins in pasture vegetation and excrement, respectively. Non-protein nitrogen accounts for 34.45% in pasture vegetation and for 43.10% in excrement.